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斑点免疫测定法在植物病毒研究中的应用及技术要点 被引量:12
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作者 钱秀红 周雪平 《生物技术》 CAS CSCD 1994年第4期39-41,共3页
斑点免疫测定法(DIA)能快速、有效地检测出植物组织及种子中的病毒,且灵敏度高,不需特殊设备。本文介绍了DIA的基本方法及步骤,并重点论述了进行DIA测定的技术要点。
关键词 植物病毒 检测 斑点免疫测定
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应用斑点免疫技术快速检测柑桔溃疡病菌 被引量:3
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作者 王中康 罗怀海 +4 位作者 舒正义 沈俊 柏贤辉 谢忠友 樊升玉 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1997年第6期529-532,共4页
应用改进的斑点免疫技术在国产微孔滤膜上检测柑桔溃疡病菌(Xan-thomonasaxonopodispv.citri)。结果表明,靶细菌检测下限为1×104细胞/ml,柑桔无症材料浸出液稀释(128倍)仍可检出。... 应用改进的斑点免疫技术在国产微孔滤膜上检测柑桔溃疡病菌(Xan-thomonasaxonopodispv.citri)。结果表明,靶细菌检测下限为1×104细胞/ml,柑桔无症材料浸出液稀释(128倍)仍可检出。经柑桔叶面腐生黄单胞及近缘细菌交叉吸收,提高了多克隆抗血清特异性,能有效地避免假阳性。3种HRP-标结结合物的效果为HRP-SpA>HRP-IgG(鼠抗兔)>HRP-IgG(羊抗兔)。封闭液采用TBS+0.1%曲拉通或0.5%吐温20,吐温80均可获得白色滤膜背景。对全国8省38县518个柑桔无症样品DIA检验结果,平均带菌率31.82%,符合实际病情。 展开更多
关键词 检测 柑桔 溃疡病菌 斑点免疫
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烟草花叶病毒(TMV)斑点免疫诊断试剂盒的研制 被引量:3
3
作者 李彬 许志刚 周明华 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期91-94,共4页
以烟草花叶病毒 (TMV)及其抗体为材料 ,以硝酸纤维素膜 (NCM)为载体 ,根据斑点免疫吸附法 (DIBA)的原理 ,在国内首次研制出斑点免疫诊断试剂盒。研究表明 :以健康汁液预先吸附抗血清以及用 1%H2 O2 处理点样后的NCM ,能有效地排除斑点... 以烟草花叶病毒 (TMV)及其抗体为材料 ,以硝酸纤维素膜 (NCM)为载体 ,根据斑点免疫吸附法 (DIBA)的原理 ,在国内首次研制出斑点免疫诊断试剂盒。研究表明 :以健康汁液预先吸附抗血清以及用 1%H2 O2 处理点样后的NCM ,能有效地排除斑点免疫吸附中非特异性干扰 ;用氯仿处理研磨后的样品和适当提高样品的稀释度能有效去除样品中叶绿素和其它色素的干扰 ,提高灵敏度。制备出的试剂盒具有体积小、重量轻、便于携带等优点 。 展开更多
关键词 免疫诊断试剂盒 斑点免疫吸附法 烟草花叶病毒
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斑点免疫金渗滤试验同步检测血清中抗登革病毒IgM和IgG抗体 被引量:2
4
作者 姚海军 段馥琴 曹虹 《第一军医大学学报》 CSCD 1997年第3期228-229,共2页
建立用斑点免疫金渗滤试验同步检测血清中抗登革病毒IgM和IgG抗体的方法,与MacELISA比较抗登革病毒IgM抗体检测符合率为93.8%,与DIBA比较抗登革病毒IgG抗体检测符合率为94.7%。本法简便、快速,适于在各级实验室推广应用。
关键词 登革热病毒 IGM抗体 血清诊断 DIGFA IGG抗体
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贵州五烟区烟蚜CMV、PVY带毒率检测 被引量:4
5
作者 张福莉 刘童童 +2 位作者 李创创 杨茂发 杨洪 《山地农业生物学报》 2013年第2期101-105,共5页
为深入了解贵州省烟草病毒病传毒介体烟蚜带毒率对烟草CMV、PVY发生情况的影响,本文采用间接DIBA法对2012年贵州省思南、凤冈、德江、正安和清镇5个烟区的烟蚜CMV、PVY进行了检测。结果表明:思南、凤冈、德江、正安和清镇5个烟区烟蚜CM... 为深入了解贵州省烟草病毒病传毒介体烟蚜带毒率对烟草CMV、PVY发生情况的影响,本文采用间接DIBA法对2012年贵州省思南、凤冈、德江、正安和清镇5个烟区的烟蚜CMV、PVY进行了检测。结果表明:思南、凤冈、德江、正安和清镇5个烟区烟蚜CMV带毒率分别为63.53%、47.64%、33.53%、74.11%和26.47%,PVY带毒率分别为50.63%、41.25%、31.86%、41.25%和20.63%。 展开更多
关键词 斑点免疫结合检测法 单头烟蚜 带毒率 黄瓜花叶病毒 马铃薯Y病毒
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斑点免疫结合试验对蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪中特异性抗原的检测 被引量:3
6
作者 贾克东 朱育光 +3 位作者 温培娥 赵中平 万功群 张西臣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第1期77-80,共4页
应用蔗糖密度梯度离心技术从蓝氏贾第鞭毛虫感染者的粪便中分离纯化贾第虫包囊,以此包囊免疫家兔,获得免疫血清,经大肠杆茵吸收后建立斑点免疫结合试验,检测粪中贾第虫特异性抗原。以此法检测39例贾第虫感染者粪便,有36例出现... 应用蔗糖密度梯度离心技术从蓝氏贾第鞭毛虫感染者的粪便中分离纯化贾第虫包囊,以此包囊免疫家兔,获得免疫血清,经大肠杆茵吸收后建立斑点免疫结合试验,检测粪中贾第虫特异性抗原。以此法检测39例贾第虫感染者粪便,有36例出现阳性斑点,阳性检出率为92.3%。以超声粉碎的贾第虫包囊抗原为标准,36例阳性标本中,有35例标本贾第虫特异性抗原蛋白含量分布在39~69ng/mL范围内,1例为138ng/mL。 展开更多
关键词 斑点免疫 鞭毛虫 抗原 粪便
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斑点免疫结合试验影响因素的探讨 被引量:1
7
作者 肖彭年 杨翼峰 《徐州医学院学报》 CAS 1992年第1期9-12,共4页
本文对斑点免疫结合试验的影响因素进行了探讨。在完全国产试剂条件下,阻断液的选择特别重要。并确定了阻断液、洗涤液、稀释液的最佳成分。在pH7.4时,37℃环境实验最适合。并对两种显色剂进行了比较。
关键词 DIA ELISA 硝酸纤维素膜
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斑点免疫结合试验直接检测末梢血甲胎蛋白的研究和应用 被引量:1
8
作者 贺海平 唐东平 《广西医科大学学报》 CAS 1999年第1期6-7,共2页
目的:探讨建立一种方便使用、检测人末梢血甲胎蛋白(AFP)的方法。方法:用斑点免疫结合试验(DIBA)直接检测人末梢血(全血)AFP。结果:DIBA检测的条件在37℃或室温,孵育时间为10min×2时,敏感度达25μg/L。用此法和放射免... 目的:探讨建立一种方便使用、检测人末梢血甲胎蛋白(AFP)的方法。方法:用斑点免疫结合试验(DIBA)直接检测人末梢血(全血)AFP。结果:DIBA检测的条件在37℃或室温,孵育时间为10min×2时,敏感度达25μg/L。用此法和放射免疫法同时检测住院肝癌病人90例的末梢血和血清AFP,结果符合率为96.67%,以AFP50μg/L判为阴性,两结果的阳性符合率达100%。并用此法检测普查的正常人群1200例,检出末梢血AFP浓度为50~100ug/L有3例,与血清DIBA和RIA检测结果相符。结论:DIBA试剂盒检测人末梢血(全血)AFP,具有特异性强、敏感度高,与常规检测法有较好的符合性,而且具有简便、省料、快速、可直接检测末梢血(全血)等优点。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 肝肿瘤 末稍血 斑点免疫结合法
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M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
9
作者 谭慧 王冰冰 +5 位作者 卢徐涟 侯柏龙 林晓云 刘巧琼 张丽芳 陈筱菲 《温州医学院学报》 CAS 2014年第4期245-247,251,共4页
目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克... 目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果:M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1:3 200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论:成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。 展开更多
关键词 M13K07辅助噬菌体 多克隆抗体 免疫斑点实验 酶联免疫吸附试验
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不同寄主植物烟蚜CMV和PVY的带毒率检测 被引量:1
10
作者 刘童童 杨洪 +1 位作者 王召 杨茂发 《贵州农业科学》 CAS 2016年第6期60-62,66,共4页
为明确贵州烟区CMV和PVY的侵染源及浸染途径,采用DIBA法检测贵州德江、长顺、凤冈、清镇和湄潭5个烟区的烟草、马铃薯和桃树3种寄主植物上有翅烟蚜的CMV及PVY带毒率。结果表明:5个烟区中,除长顺烟区外,烟草上烟蚜的CMV、PVY带毒率普遍... 为明确贵州烟区CMV和PVY的侵染源及浸染途径,采用DIBA法检测贵州德江、长顺、凤冈、清镇和湄潭5个烟区的烟草、马铃薯和桃树3种寄主植物上有翅烟蚜的CMV及PVY带毒率。结果表明:5个烟区中,除长顺烟区外,烟草上烟蚜的CMV、PVY带毒率普遍高于马铃薯和桃树,以德江烟区烟蚜带毒率最高;5个烟区烟草烟蚜CMV带毒率与马铃薯和桃树间差异显著;长顺、凤冈、清镇和湄潭4个烟区烟草烟蚜PVY带毒率与马铃薯间差异不显著。 展开更多
关键词 烟蚜 带毒率 黄瓜花叶病毒 马铃薯Y病毒 斑点免疫结合检测法
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点—免疫结合法检测抗SSA抗体的临床研究 被引量:1
11
作者 蒋明 周淑洁 +4 位作者 寇中琛 阎春丽 王春豹 史艳萍 曾小峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第5期311-313,共3页
自人脾提取和纯化 SSA 抗原,建立了点-免疫结合测定抗 SSA 抗体的方法,经与免疫双扩散法比较,具有特异性较高的特点.抗 SSA 抗体在干燥综合征患者血清中的阳性率为76.9%,而在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为33.3%,抗 SSA 抗体常与... 自人脾提取和纯化 SSA 抗原,建立了点-免疫结合测定抗 SSA 抗体的方法,经与免疫双扩散法比较,具有特异性较高的特点.抗 SSA 抗体在干燥综合征患者血清中的阳性率为76.9%,而在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为33.3%,抗 SSA 抗体常与类风湿因子同时存在. 展开更多
关键词 抗SSA抗体 干燥综合征
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棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响
12
作者 郑光宇 赵荣乐 《吉首大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第4期29-33,共5页
以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性(98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶40... 以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性(98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性(93.7%),提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性(98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异. 展开更多
关键词 棘球蚴病 棘球蚴抗原 免疫球蛋白IGG 免疫应答 斑点免疫结合试验
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多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白抗血清的制备及鉴定
13
作者 阮期平 赵莉 +2 位作者 周立 李建吾 郑远棋 《绵阳师范学院学报》 1997年第S1期57-60,共4页
用电泳纯的小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白免疫新西兰雄兔,获得了特异性强,效价较高的小麦.多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白抗血清.用此抗血清采用Dot—immunobinding assay,对流免疫电泳二种方法测定PGIP的检出限量,由此建立了多聚半糖醛酸酶... 用电泳纯的小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白免疫新西兰雄兔,获得了特异性强,效价较高的小麦.多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白抗血清.用此抗血清采用Dot—immunobinding assay,对流免疫电泳二种方法测定PGIP的检出限量,由此建立了多聚半糖醛酸酶抑制蛋白的Dot—immunobinding检测方法,并对制备该抗血清的意义予以讨论. 展开更多
关键词 小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 dot-immunobindingassay 抗血清 对流免疫电泳 免疫双扩散
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HCMV抗原、抗体和DNA的同时检测在慢性肾盂肾炎中的意义
14
作者 唐旭东 王媚 《陕西医学检验》 2001年第4期55-57,共3页
目的 进一步探讨人巨细胞病毒 (HCMV)感染与慢性肾盂肾炎的关系及同时检测 HCMV抗原、抗体和 DNA三项指标的意义。方法 对 95例慢性肾盂肾炎患者和 83例正常对照 ,分别用免疫斑点法测尿中 HCMV抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)测血清中... 目的 进一步探讨人巨细胞病毒 (HCMV)感染与慢性肾盂肾炎的关系及同时检测 HCMV抗原、抗体和 DNA三项指标的意义。方法 对 95例慢性肾盂肾炎患者和 83例正常对照 ,分别用免疫斑点法测尿中 HCMV抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)测血清中 HCMV抗体 (Ig G型 ) ,聚合酶链反应 (PCR)测尿中 HCMV- DNA。结果 患者组 HCMV抗原、抗体 (Ig G型 )及 DNA阳性率分别为 5 5 .8% ,82 .1 % ,2 4 .2 % ,抗体 (Ig G型 ) S/N值 (标本 45 0 nm吸光度 /阴性对照 45 0 nm平均吸光度 )为 3 .40± 0 .86 ,均明显高于正常对照组。三项指标的出现并非完全一致。结论  HCMV感染可能与慢性肾盂肾炎有关 。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 肾盂肾炎 免疫斑点法 酶联免疫吸附测定 聚合酶链反应
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用斑点免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力
15
作者 姚海军 曹虹 郭辉玉 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第4期323-324,共2页
建立斑点免疫结合法(DIA)测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白NS1四株单克隆抗体(McAbs)的相对亲和力,4株McAbs对NS1的亲和力各不相同。按50%最大结合浓度分析,抗体株6─1/C为0... 建立斑点免疫结合法(DIA)测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白NS1四株单克隆抗体(McAbs)的相对亲和力,4株McAbs对NS1的亲和力各不相同。按50%最大结合浓度分析,抗体株6─1/C为0.05μg/ml.1─7/F为0.67μg/ml.5D为25.00μg/ml,3─11/C为57.00μg/ml。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时,说明用DIA法测定McAb相对亲和力的可行性。 展开更多
关键词 单克隆抗体 登革病毒Ⅱ型 亲和力 斑点免疫结合试验
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用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体
16
作者 许辉 金伯泉 +2 位作者 刘雪松 黄传书 赵宁 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第2期27-31,共5页
将HFRS病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上,建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验(AP-DIBA)检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体的方法,并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验(HRP-DIBA)作了比较。结果表明,A... 将HFRS病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上,建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验(AP-DIBA)检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体的方法,并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验(HRP-DIBA)作了比较。结果表明,AP-DIBA具有特异性;其敏感性高于HRP-DIBA。该法可用于不同HFRS病毒株感染小鼠血清中抗HFRS病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 出血热病毒 抗体 免疫斑点试验
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用点酶法检测鱼类致病性嗜水气单胞菌HEC毒素 被引量:40
17
作者 陈怀青 陆承平 +1 位作者 陈琼 涂小林 《动物检疫》 1993年第4期7-9,共3页
本试验建立的检测嗜水气单胞菌HEC毒素的点酶法,可在嗜水气单胞菌培养上清和临床病料中检出HEC毒素,可检出的最低水平为95ng/ml。用该法检测大肠杆菌、沙门氏菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌、温和气单胞菌等的培养上清及患草鱼出血病的病鱼病... 本试验建立的检测嗜水气单胞菌HEC毒素的点酶法,可在嗜水气单胞菌培养上清和临床病料中检出HEC毒素,可检出的最低水平为95ng/ml。用该法检测大肠杆菌、沙门氏菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌、温和气单胞菌等的培养上清及患草鱼出血病的病鱼病料,均为阴性反应,仅与豚鼠气单胞菌、杀鲑气单胞菌新亚种及吕克氏耶尔森氏菌有轻度的交叉反应。对72株病鱼分离菌及33份病鱼组织的检测结果表明,点酶法与溶血试验的符合率分别为80.7%和90.9%。以上试验重复3次,结果完全一致。综上可见,用点酶法检测嗜水气单胞菌HEC毒素,无须作复杂的细菌鉴定,并能直接用于病料,是一个快速、敏感、特异、有效的方法,显示出广阔的应用前景。 展开更多
关键词 点酶法 嗜水气单胞菌 毒素 鱼类
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Pre-S_(2)蛋白B细胞表位的精细特异性 被引量:6
18
作者 吴玉章 朱锡华 张凌 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期80-82,共3页
采用我室建立的短肽点免疫结合试验确定Pre-S_(2)蛋白B细胞表位的精细特异性。结果发现Pre-S_(2)蛋白的B细胞识别部位(14~24)可进一步区分为两个部分交叠的表位:14~21和18~24,从而绘出了Pre... 采用我室建立的短肽点免疫结合试验确定Pre-S_(2)蛋白B细胞表位的精细特异性。结果发现Pre-S_(2)蛋白的B细胞识别部位(14~24)可进一步区分为两个部分交叠的表位:14~21和18~24,从而绘出了Pre-S_(2)蛋白B细胞表位图谱。这对设计新一代疫苗及诊断试剂有指导意义。 展开更多
关键词 Pre-S(2) 蛋白 表位 合成肽 B细胞
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PCR、DIA与致病性测定法检测柑桔溃疡病菌的比较 被引量:5
19
作者 王中康 夏玉先 +2 位作者 孙宪昀 周常勇 殷幼平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1728-1732,共5页
依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5,用于柑桔溃疡病菌的PCR检测,具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA(斑点免疫结合技术)及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性... 依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5,用于柑桔溃疡病菌的PCR检测,具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA(斑点免疫结合技术)及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异。结果表明,PCR的检测灵敏度可达103~104cfu·ml-1(每个反应体积约10个细菌),明显高于DIA(104~105cfu·ml-1,每个样点约300个细菌);PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%,而检测柑桔无症样品的检出率依次降低。此外,通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油,有效地降低了检测中存在的假阴性。 展开更多
关键词 PCR DIA 斑点免疫结合技术 致病性测定 柑桔 溃疡病 检测技术 地毯草黄单胞杆菌柑桔致病变种
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海水养殖真鲷弧菌病病原菌外毒素的点酶法检测 被引量:2
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作者 吴后波 潘金培 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期606-609,共4页
弧菌病(vibriosis)是我国南方沿海地区养殖真鲷(Pagrus major)中经常发生的主要细菌性疾病,该病的暴发性流行给整个真鲷养殖业造成了巨大的经济损失.在明确其病原菌是最小弧菌(Vibrio mimicus)基础上[1],对该菌的致病机理进行了深入的研... 弧菌病(vibriosis)是我国南方沿海地区养殖真鲷(Pagrus major)中经常发生的主要细菌性疾病,该病的暴发性流行给整个真鲷养殖业造成了巨大的经济损失.在明确其病原菌是最小弧菌(Vibrio mimicus)基础上[1],对该菌的致病机理进行了深入的研究,并取得了重要的进展. 展开更多
关键词 海水养殖 真鲷 弧菌病 病原菌 外毒素 点酶法 检测技术
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