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基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立
被引量：
1
1
作者
李宁
孟春春
+8 位作者
梁瑞英
李传峰
陈宗艳
缪秋红
毕庄莉
朱英奇
郭慧敏
刘光清
王桂军
《中国动物传染病学报》
CAS
2014年第3期1-7,共7页
为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染...
为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB）,重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。
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关键词
兔出血症病毒
VP60
优势抗原区
间接ELISA
下载PDF
职称材料
兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定
被引量：
2
2
作者
孟春春
程英杰
+5 位作者
李传峰
王玢瑸
缪秋红
陈宗艳
吴润
刘光清
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期239-242,共4页
为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB...
为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。
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关键词
VP60优势抗原区
Th细胞表位
原核表达
免疫效力测定
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职称材料
题名
基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立
被引量：
1
1
作者
李宁
孟春春
梁瑞英
李传峰
陈宗艳
缪秋红
毕庄莉
朱英奇
郭慧敏
刘光清
王桂军
机构
安徽农业大学动物科技学院
中国农业科学院上海兽医研究所
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2014年第3期1-7,共7页
基金
农业部公益性行业科研专项(201003012
201303046)
+3 种基金
国家自然科学基金项目(31270194
31101848
31300141)
863计划(2011AA10A200)
文摘
为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB）,重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。
关键词
兔出血症病毒
VP60
优势抗原区
间接ELISA
Keywords
Rabbit
hemorrhagic
disease
virus
VP60
capsid
protein
dominant
antigen
regions
indirect
enzyme
linked
immunosorbent
assay
（ELISA）
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定
被引量：
2
2
作者
孟春春
程英杰
李传峰
王玢瑸
缪秋红
陈宗艳
吴润
刘光清
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
甘肃农业大学动医医学院
西北农林科技大学动物医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期239-242,共4页
基金
农业公益性行业科研专项课题(201303046
201003012)
+1 种基金
"863"计划(2011AA10A209)
国家自然科学基金(C010802)
文摘
为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。
关键词
VP60优势抗原区
Th细胞表位
原核表达
免疫效力测定
Keywords
the
dominant
antigen
regions
of
VP60
capsid
protein
Th
cell
epitope
prokaryotes
expression
evaluate
immuneefficacy
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立
李宁
孟春春
梁瑞英
李传峰
陈宗艳
缪秋红
毕庄莉
朱英奇
郭慧敏
刘光清
王桂军
《中国动物传染病学报》
CAS
2014
1
下载PDF
职称材料
2
兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定
孟春春
程英杰
李传峰
王玢瑸
缪秋红
陈宗艳
吴润
刘光清
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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