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Molecular characterization and expression analysis of a novel dual-CRD C-type lectin in kuruma shrimp(Marsupenaeus japonicus) 被引量:1
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作者 ZHANG Man MAO Yong +3 位作者 WANG Jun FENG Wenrong SONG Xiaohong SU Yongquan 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2015年第2期74-83,共10页
C-type lectins are among the most significant pattern recognition receptors(PRRs) found in invertebrate. They are a class of carbohydrate-binding proteins that can recognize specific sugar moieties on the surface of... C-type lectins are among the most significant pattern recognition receptors(PRRs) found in invertebrate. They are a class of carbohydrate-binding proteins that can recognize specific sugar moieties on the surface of pathogens. In the present study, a novel C-type lecitn(termed Mj Lectin) from kuruma shrimp Marsupenaeus japonicus was identified. The full-length c DNA of Mj Lectin was 1 245 bp with a 1 011 bp open reading frame(ORF) that encoded a polypeptide of 336 amino acid residues. Mj Lectin consisted of two tandemly arrayed carbohydrate-recognition domains(CRDs), unlike other reported M. japonicus C-type lectins with only one CRD. It showed a high similarity to other shrimp dual-CRD lectins. Among the Ca2+-binding Site 2, the tripeptide motif dictating the carbohydrate binding specificity was exhibited as a rare mutant LPN(Leu134-Pro135-Asn136) in CRD1 and a traditional EPN(Glu299-Pro300-Asn301) in CRD2, respectively. Mj Lectin showed a specific expression pattern in both tissue and cellular levels, for its m RNA transcript was mainly expressed in the F-cells of the hepatopancreas. After white spot syndrome virus(WSSV) challenge(3.6×108 virions/μL), the expression of Mj Lectin in the hepatopancreas was up-regulated significantly at 48 h(P〈0.01) compared with the control group. These results suggested that Mj Lectin might be involved in the innate immune defense against WSSV infection. 展开更多
关键词 C-type lectin Marsupenaeus japonicus carbohydrate-recognition domaincrd gene expression white spot syndrome virus(WSSV)
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中国明对虾C-型凝集素基因(Fclectin)的重组表达及活性分析 被引量:7
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作者 刘逸尘 刘丽静 +3 位作者 张亦陈 耿绪云 孙妍 孙金生 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1493-1502,共10页
研究拟通过分析对虾C型凝集素的活性特点,探讨其在对虾先天免疫应答过程中的潜在功能以及在养殖生产实践中的应用。实验利用原核表达系统对中国明对虾C-型凝集素基因的两个串联的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)进... 研究拟通过分析对虾C型凝集素的活性特点,探讨其在对虾先天免疫应答过程中的潜在功能以及在养殖生产实践中的应用。实验利用原核表达系统对中国明对虾C-型凝集素基因的两个串联的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白(rFclectin-CRD1和rFclectin-CRD2)。活性分析结果显示,重组目的蛋白对多种病原菌有凝集和抑制生长的作用,并且具有Ca2+依赖活性;其凝集活性可被半乳糖、肽聚糖、脂多糖等多种病原相关分子模式所抑制,研究结果证实,Fclectin是一种典型的C-型凝集素,它可能作为中国明对虾先天免疫中重要的模式识别受体,在一定程度上参与了机体应答病原微生物的防御过程。 展开更多
关键词 中国明对虾 C-型凝集素 糖识别结构域 先天免疫 重组表达 凝菌 抑菌活性
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主要语序类型语言中关系小句的类型学研究 被引量:4
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作者 于秀金 王蔚 《北京第二外国语学院学报》 2020年第6期24-43,共20页
本文考察了Dryer的左右分枝理论和Hawkins的成分识别域理论在预测和解释SVO/SOV/VSO 3种主要语序类型语言(特别是英语和汉语)关系小句和其他语法成分组配等方面的有效性,并试图解释其动因。研究发现:(1)左右分枝理论无法预测英语和汉语... 本文考察了Dryer的左右分枝理论和Hawkins的成分识别域理论在预测和解释SVO/SOV/VSO 3种主要语序类型语言(特别是英语和汉语)关系小句和其他语法成分组配等方面的有效性,并试图解释其动因。研究发现:(1)左右分枝理论无法预测英语和汉语中关系小句与名词的组配。成分识别域理论与直接成分尽早识别原则相结合可解释英语关系小句和其他语法成分的组配,但无法揭示汉语和日语关系小句与其他语法成分的组配。(2)主要谓语动词凸显原则可视为不同语序语言中关系小句和其他成分组配的动因,以主要谓语动词凸显原则为核心的述谓性等级可预测跨语言关系小句的位置与VO-OV语言有关,而形容词的位置.则与VO-OV语言无关。 展开更多
关键词 类型学 左右分枝理论(BDT) 成分识别域理论(crd) 关系小句 主要谓语动词凸显原则
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重组含糖识别结构域的人源半乳糖凝集素-3在糖蛋白/糖肽富集中的应用 被引量:3
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作者 赵洋 张勇 +3 位作者 王明超 孟波 应万涛 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1197-1205,共9页
植物凝集素是广泛使用的糖蛋白富集和识别材料,动物凝集素则较少被尝试用于糖蛋白富集。基于人源半乳糖凝集素-3的糖识别结构域(CRD),设计了两种重组凝集素:Gal3C(一个CRD)和Tetra-Gal3C(四重串联CRD)。通过将两种凝集素固定于链霉亲和... 植物凝集素是广泛使用的糖蛋白富集和识别材料,动物凝集素则较少被尝试用于糖蛋白富集。基于人源半乳糖凝集素-3的糖识别结构域(CRD),设计了两种重组凝集素:Gal3C(一个CRD)和Tetra-Gal3C(四重串联CRD)。通过将两种凝集素固定于链霉亲和素琼脂糖小球上,构造了富集糖蛋白的重组凝集素亲和柱。使用凝胶电泳、免疫印迹以及生物质谱技术对重组凝集素的生物特征及其糖蛋白富集能力进行了表征与评价,发现两种类型的重组凝集素对糖蛋白/糖肽都有良好的富集效果,并具有较高的特异性和灵敏度。相对于Gal3C而言,TetraGal3C由于具有四重串联的CRD结构域,表现出更高的糖蛋白/糖肽富集能力。该凝集素亲和柱成功用于人肝癌细胞系HepG2的糖蛋白富集,表明重组凝集素具有从复杂生物样本中选择性识别和富集糖蛋白/糖肽的能力。 展开更多
关键词 液相色谱-质谱 半乳糖凝集素-3 糖识别结构域 糖蛋白富集
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半乳糖凝集素糖结合的新模式:一个糖结合域的双重配体结合(英文) 被引量:1
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作者 卞乘凤 张英 +1 位作者 李德峰 王大成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第9期810-815,共6页
半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通... 半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通过对人源半乳糖凝聚素-3 CRD与对硝基TF二糖(TFN)复合物的晶体结构解析首次发现,一个CRD可以同时结合2个TFN分子.与这2个TFN分子有双向结合的残基突变体E165A结构分析显示,一个残基的突变引起的结构上的微小变化会使结合位点2丧失结合糖底物的能力,而位点1的配体结合却不受影响.这表明,结合位点1对糖底物保守的识别和结合是基本的、主要的,而结合位点2对于糖有条件的结合,是额外的、次要的.序列比对和立体化学分析显示,参与新位点2结合的关键残基在其他半乳糖凝集素分子中都是保守的,而它们参与糖配体结合并不常见,表明它们作用的发挥是有条件的.可能在复杂寡聚结构的情况下,如有多重分支结构,双重结合位点将有利于对这类配体分子的辨识和结合,已有一系列研究报道,具有分支结构的寡糖与半乳糖分子的亲和势明显高于单价糖配体,与上述分析相一致.对这类双重位点糖结合的可能生物学意义进行了讨论. 展开更多
关键词 半乳糖凝集素家族 糖识别结构域(crd) β-半乳糖 对硝基TF二糖(TFN) 双重结合模式
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用SDSL-EPR技术测量LSECtin-CRD与甘露糖结合过程中的位点运动性变化
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作者 马蕾 董国福 +6 位作者 丛建波 杨俊涛 邹洁芮 郭俊旺 张成岗 王长振 吴可 《生物技术通讯》 CAS 2016年第3期381-385,共5页
目的:应用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)的糖基识别结构域CRD上不同位点氨基酸的运动特性及其与甘露糖结合过程中的构象变化。方法:通过SOE-PCR方法对LSECtin-CRD引入半胱氨酸... 目的:应用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)的糖基识别结构域CRD上不同位点氨基酸的运动特性及其与甘露糖结合过程中的构象变化。方法:通过SOE-PCR方法对LSECtin-CRD引入半胱氨酸点突变,构建p ET28b-Tat-LSECtin-CRD载体,可溶性表达LSECtin-CRD突变体蛋白;对突变位点进行自旋标记;EPR检测标记后样品的EPR波谱;用SS-FDDM软件对EPR波谱进行模拟和解析,获得旋转相关时间τc,研究其构象特点及变化。结果:在CRD的Ca^(2+)结合位点和配体结合功能区构建了5个突变体蛋白;LSECtin-CRD与Ca^(2+)和甘露糖结合后,4个位点的τc值明显升高,表明CRD结构域整体运动性降低;5个突变位点运动性差异较大,其中A258位点运动性变化最大,可能是参与糖基结合的关键位点。结论:SDSL-EPR技术能够有效研究LSECtin-CRD参与糖基结合过程中的构象运动性,研究结果证明了LSECtin-CRD在与糖基结合后整体运动性受限。 展开更多
关键词 定点自旋标记-电子顺磁共振技术(SDSL-EPR) 肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin) 糖基识别结构域(crd) 运动性
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凡纳滨对虾C型凝集素(LvLc1)的特征和活性分析 被引量:1
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作者 李俊烨 宋巧珍 +3 位作者 张亦陈 刘逸尘 耿绪云 孙金生 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1710-1718,共9页
C型凝集素是一种依赖于Ca^(2+)而发挥功能的糖蛋白,在一线的固有免疫防御过程中发挥着重要作用。围绕对虾C型凝集素开展深入研究,不仅可以丰富无脊椎动物固有免疫学内容,还有望将其开发为具有免疫增强效果的活性饵料,应用于对虾的健康... C型凝集素是一种依赖于Ca^(2+)而发挥功能的糖蛋白,在一线的固有免疫防御过程中发挥着重要作用。围绕对虾C型凝集素开展深入研究,不仅可以丰富无脊椎动物固有免疫学内容,还有望将其开发为具有免疫增强效果的活性饵料,应用于对虾的健康养殖。本实验根据实验室前期转录组信息提示克隆获得了凡纳滨对虾一种新的C型凝集素基因(LvLc1,Gen Bank注册号:KY937940)。生物信息学分析显示LvLc1基因的开放阅读框全长891 bp,编码296个氨基酸,该基因编码的蛋白质含有一个保守的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD),该结构域中具有潜在的半乳糖结合位点(QPD motif),进化发生分析显示LvLc1与来自节肢动物的甘露糖结合凝集素家族成员聚类在一起。对LvLc1基因的CRD结构域进行了原核重组表达与蛋白活性分析研究,结果显示:重组目的蛋白(rLvLc1)在Ca^(2+)存在的条件下,对多种病原菌(G^+、G~–和真菌)具有凝集作用,其凝集活性可被半乳糖、甘露糖、脂多糖等多种病原相关分子模式所抑制。研究表明,LvLc1作为C-型凝集素家族一个新成员,可能通过重要的模式识别受体作用,参与机体应答病原微生物侵染的防御过程。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 C型凝集素 糖识别结构域 重组表达 凝集 糖识别活性
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草鱼胶原凝集素基因的克隆及其功能分析 被引量:1
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作者 李琴 马梅生 胡成钰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期22-27,共6页
从草鱼Ctenopharyngodon idella肝肾cDNA文库中克隆得到胶原凝集素基因。草鱼胶原凝集素全长cDNA为1128bp,其中5′非编码区229bp,3′非翻译区104bp,最大开放阅读框为795bp,编码264个氨基酸。系统进化分析表明草鱼胶原凝集素与斑马鱼的... 从草鱼Ctenopharyngodon idella肝肾cDNA文库中克隆得到胶原凝集素基因。草鱼胶原凝集素全长cDNA为1128bp,其中5′非编码区229bp,3′非翻译区104bp,最大开放阅读框为795bp,编码264个氨基酸。系统进化分析表明草鱼胶原凝集素与斑马鱼的亲缘关系最近。根据草鱼胶原凝集素序列特征,克隆了包含糖基识别域(CRD)的cDNA,并进行原核表达、纯化获得其重组蛋白PCRD。进行PCRD与6种细菌的凝集和糖抑制实验,结果表明半乳糖、葡萄糖、甘露糖和麦芽糖4种糖都会使PCRD与嗜水气单胞菌的凝集明显下降甚至极大地干扰凝集;麦芽糖使金黄色葡萄球菌的凝集明显下降,而肽聚糖和甘露糖会使凝集受到抑制;此外,PCRD的凝集反应不依赖Ca2+。 展开更多
关键词 C-型凝集素 胶原凝集素 糖基识别域 表达 草鱼
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