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菰黑粉菌T-DNA突变体库的构建及分析
1
作者 汤近天 杨芙容 +3 位作者 张雅芬 夏文强 崔海峰 叶子弘 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期495-506,共12页
通过建立适用于菰黑粉菌Ustilago esculenta的农杆菌介导遗传转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)体系,构建菰黑粉菌T-DNA插入突变体库。针对性地筛选双核菌丝形成缺陷型转化子,并对T-DNA插入位点进行分析,... 通过建立适用于菰黑粉菌Ustilago esculenta的农杆菌介导遗传转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)体系,构建菰黑粉菌T-DNA插入突变体库。针对性地筛选双核菌丝形成缺陷型转化子,并对T-DNA插入位点进行分析,为研究菰黑粉菌二态型转换的分子调控机理打下基础。以构建的菰黑粉菌自融合菌株TSP为出发菌株,以含有遗传霉素(G418)抗性基因(neo)的质粒为载体,通过ATMT构建菰黑粉菌T-DNA突变体库,并对诱导剂乙酰丁香酮(AS)浓度、转化的共培养时间、农杆菌浓度和菰黑粉菌芽孢子浓度等建库影响因素进行单因素条件试验,筛选最优条件;对继代培养的转化子基因组中的遗传霉素抗性基因进行PCR检测,验证转化子遗传稳定性;对突变体库中的转化子双核菌丝生长情况进行观察,测定其双核菌丝形成能力;对上述双核菌丝形成缺陷型转化子进行基因组重测序,分析其T-DNA插入位点。当遗传霉素浓度为75μg/mL时,菰黑粉菌的生长被完全抑制。当AS浓度为100μg/mL、共培养时间为24 h、孢子浓度为1×10^(5)个/mL、农杆菌浓度为OD600=0.3时,转化获得转化子的效率最高,为菰黑粉菌ATMT最优转化体系。在突变体库中随机选取7株转化子在YEPS固体平板上继代培养10代,仍然能够通过PCR的方法在基因组中检测到neo基因片段,说明T-DNA成功插入TSP菌株基因组且稳定遗传。针对部分转化子进行双核菌丝生长能力测定,有5株转化子的菌落边缘没有形成菌丝,而TSP菌株的边缘长出了明显的菌丝,说明这5株转化子双核菌丝形成的能力丧失。对上述双核菌丝形成缺陷型转化子中的其中2个(TSP-1、TSP-23)进行基因组重测序,比对结果显示,TSP-1插入位点位于其交配型基因a位点的(GenBank:MK097140.1)mfa2.1基因的外显子区域,TSP-23插入位点位于两个假定蛋白之间。本研究优化了菰黑粉菌ATMT遗传转化体系,构建了菰黑� 展开更多
关键词 菰黑粉菌 T-DNA插入突变体 双核菌丝 二态型转换
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核转运蛋白SsKapM涉及调控甘蔗鞭孢堆黑粉菌的菌丝生长 被引量：1
2
作者 甘永健 陈金辉 +2 位作者 崔国兵 唐金阳 邓懿祯 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期913-926,共14页
核转运蛋白是真核生物中负责大分子物质进出核孔的重要载体,承担着维持正常生命活动的任务。本研究通过序列同源比对鉴定了甘蔗鞭孢堆黑粉菌核转运蛋白编码基因,根据注释命名为SsKapM。使用同源重组方法对SsKapM进行敲除后,发现ΔSsKap... 核转运蛋白是真核生物中负责大分子物质进出核孔的重要载体,承担着维持正常生命活动的任务。本研究通过序列同源比对鉴定了甘蔗鞭孢堆黑粉菌核转运蛋白编码基因,根据注释命名为SsKapM。使用同源重组方法对SsKapM进行敲除后,发现ΔSsKapM突变体担孢子的生长速率、适宜的生长温度、有性配合/菌丝生长等方面均发生改变。研究中还发现SsKapM缺失会导致双核菌丝体对高浓度磷酸盐敏感性下降。同时,通过转录组数据分析探究SsKapM的功能机制。结果表明SsKapM调控热激反应、磷酸盐信号与转运通路等基因的表达。这一发现将为甘蔗鞭孢堆黑粉菌的防治提供新的思路。 展开更多
关键词 核转运蛋白 甘蔗鞭孢堆黑粉菌 有性配合/菌丝生长 担孢子 双核菌丝体 最适生长温度 磷酸盐
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银耳（Tremella　fuciformis）原基分化前期双核菌丝细胞和分生孢子的边缘体与质膜体 被引量：1
3
作者 钟恒 《热带亚热带植物学报》 CSCD 1994年第2期41-46,共6页
本文报道银耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）原基分化前期．在双核菌丝的幼细胞、成熟细胞和分生孢子中，与质膜相关联的两类膜结构──边缘体和质膜体的形成与功能。根据相似结构的存在．支持小泡或多泡体排出质膜之外附在... 本文报道银耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）原基分化前期．在双核菌丝的幼细胞、成熟细胞和分生孢子中，与质膜相关联的两类膜结构──边缘体和质膜体的形成与功能。根据相似结构的存在．支持小泡或多泡体排出质膜之外附在细胞壁上成为边缘体和参于细胞壁合成的假定。银耳原基分化前期．双核菌丝迅速分裂的幼细胞．其质膜内陷产生泡状质膜体，内含数个小泡，或产生膜状质膜体；在成熟细胞中．质膜内陷通常形成回旋的膜结构──膜状质膜体．内含１—２个电子致密小泡．当这两类质膜体脱离质膜进入细胞质后，有的膜层和小泡局部被消化．因此，推断质膜体具有内吞和输送养料的作用。另外．在桶孔隔膜闭塞一侧电子致密度高的细胞质中．还观察到一种罕见的只有单个膜层的质膜体．其内充满３个电子致密小泡．估计它的形成与功能同膜状质膜体相似。作者认为．桶孔闭塞和质膜体的出现是与银耳原基细胞分化有关联的两个重要特征。最后，在成熟细胞中，尚可以观察到质膜体的膜层能够散开形成内质网．因此．内质网也可以来源于质膜体。 展开更多
关键词 银耳 双核菌丝 边缘体 质膜体
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银耳双核菌丝隔膜孔帽的超微结构
4
作者 钟恒 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第1期73-78,共6页
在银耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）双核菌丝隔膜孔器超微结构的研究中，发现银耳孔帽分子横切时为两平行条形，而不是环形。只有折叠片层体的横切面才呈两平行条形，纵切面呈Ｕ形，如果斜—纵切折叠片层体的基部则为开口... 在银耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）双核菌丝隔膜孔器超微结构的研究中，发现银耳孔帽分子横切时为两平行条形，而不是环形。只有折叠片层体的横切面才呈两平行条形，纵切面呈Ｕ形，如果斜—纵切折叠片层体的基部则为开口环形（其实是Ｕ形）。因此，作者认为圆顶形孔帽不是由许多杯状体组成，而是由众多折叠片层体组成。为了说明银耳型多单位的折叠片层体孔帽不同于单一单位的括孤体孔帽，特把银耳型的隔膜孔器命名为桶孔／叠层体隔膜（ｄｏｌｉｐｏｒｅ／ｌａｍｉｎａｔｅｓｏｍｅｓｓｅｐｔｕｍ），以区别于其他担子菌的桶孔／括弧体隔膜（ｄｏｌｉｐｏｒｅ／ｐａｒｅｎ－ｔｈｅｓｏｍｅｓｅｐｔｕｍ）。 展开更多
关键词 银耳 双核菌丝 隔膜孔帽 超微结构
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香菇双核菌丝细胞壁结构研究 被引量：1
5
作者 王镨 许英 +1 位作者 应求是 洪健 《浙江农业大学学报》 CSCD 1992年第3期102-106,共5页
以香菇(Lentinus edodes)锁状联合发育时期的双核菌丝为材料,通过对不同酶组合处理降解细胞壁的效果比较和电镜观察,对双核菌丝细胞壁作了研究,获得以下结果;①香菇双核时期的菌丝细胞壁的化学组成推断主要是为1,3和1,4糖苷键连接的多糖... 以香菇(Lentinus edodes)锁状联合发育时期的双核菌丝为材料,通过对不同酶组合处理降解细胞壁的效果比较和电镜观察,对双核菌丝细胞壁作了研究,获得以下结果;①香菇双核时期的菌丝细胞壁的化学组成推断主要是为1,3和1,4糖苷键连接的多糖类;②双核菌丝细胞壁宽厚,分层明显,壁物质沉积不均匀.沉积物主要呈颗粒状与短纤丝状,直接沉积在质膜上形成厚壁内层;③在双核菌丝顶端与倒壁凹陷处,以及菌丝交界处的细胞壁附近,都观察到管状、囊泡状的细胞器集合体.管状或囊泡状细胞器的一端,囊泡常与细胞壁内侧质膜相联.这一现象表明,香菇双核时期菌丝细胞的合成是十分活跃的. 展开更多
关键词 细胞壁 双核菌丝 香菇
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