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RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究 被引量：2
1
作者 王泽霖 王丽 +2 位作者 阎若潜 刘素云 菅复春 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1997年第4期304-309,共6页
用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４... 用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。 展开更多
关键词 传染性 支气管炎病毒 鸡病 检测 核酸探针
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地高辛标记的DNA探针和ID-ELISA检测芜菁花叶病毒的比较 被引量：3
2
作者 邓晓东 刘志昕 +1 位作者 潘俊松 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第2期48-52,共5页
以克隆的芜菁花叶病毒（TurnipmosaicVitusTuMV）外壳蛋白基因的重组质粒PGT3为模板，用PCR的方法合成了长度为0．87kb的地高辛标记的双链DNA探针。用其进行了十字花科蔬菜病毒检测研究。在斑点杂交中，探针检测TuMVRNA的灵敏度为250pg... 以克隆的芜菁花叶病毒（TurnipmosaicVitusTuMV）外壳蛋白基因的重组质粒PGT3为模板，用PCR的方法合成了长度为0．87kb的地高辛标记的双链DNA探针。用其进行了十字花科蔬菜病毒检测研究。在斑点杂交中，探针检测TuMVRNA的灵敏度为250pg，相当于5ng的病毒，比ID－ELISA检测TuMV的灵敏度高6倍。 展开更多
关键词 芜菁 花叶病毒 地高辛标记 dna探针 ID-ELISA
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PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌 被引量：4
3
作者 秦蕾 徐静 张正 《淮海工学院学报（自然科学版）》 CAS 2008年第2期66-69,共4页
以鳗弧菌（Vibrio anguillarum）toxR基因内366～571bp之间的基因序列为靶序列，采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针，探针长度为206bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌，通过斑点杂... 以鳗弧菌（Vibrio anguillarum）toxR基因内366～571bp之间的基因序列为靶序列，采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针，探针长度为206bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌，通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测，结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性，而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应。这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性，它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测。 展开更多
关键词 鳗弧菌 PCR法 地高辛标记探针 斑点杂交
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松材线虫杂交探针制备与检测技术 被引量：3
4
作者 陈凤毛 叶建仁 +1 位作者 吴小芹 郝德君 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期126-128,共3页
选用松材线虫特异引物对M05F2/R1(F1:5-′CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3,′R1:5′-TG-GCT CAATG GCAAA TCCTT CGTA-3′),以D ig-11-dUTP代替部分dTTP,采用PCR技术,直接扩增松材线虫特异片段作为松材线虫地高辛探针。结果表明,地高辛探... 选用松材线虫特异引物对M05F2/R1(F1:5-′CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3,′R1:5′-TG-GCT CAATG GCAAA TCCTT CGTA-3′),以D ig-11-dUTP代替部分dTTP,采用PCR技术,直接扩增松材线虫特异片段作为松材线虫地高辛探针。结果表明,地高辛探针长度一致,为600 bp。产量较高,探针质量浓度达280mg/L。采用探针D IG-F2/R1对线虫基因组DNA进行点杂交,19个松材线虫株系均表现有较强的杂交信号,而8个拟松材线虫、1个霍夫曼尼伞滑刃线虫、1个大核滑刃线虫、1个长尾属线虫均无杂交信号。且用该探针可以稳定地检测出单条松材线虫。因此,该探针特异性强,灵敏度高。该探针及其配套的杂交检测技术可以用于检测线虫样本中是否含有松材线虫。 展开更多
关键词 松材线虫 非放射性探针 核酸斑点杂交 地高辛探针
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地高辛标记DNA探针对茶园NPV的检测 被引量：1
5
作者 谭荣荣 毛迎新 龚自明 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第23期5894-5897,共4页
研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 ... 研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 CFU/μL。以感染病毒致死的茶尺蠖幼虫为试材,提取病毒基因组DNA,采用斑点杂交法检测均得到强的杂交信号。斑点杂交检测可有效区分茶园中几种核型多角体病毒,表明地高辛标记DNA探针的特异性好。 展开更多
关键词 茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis OBLIQUE NUCLEAR polyhedrosis virus EcobNPV) 地高辛标记dna探针 斑点杂交 检测
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用地高辛标记的染色体特异性DNA探针检测石蜡切片组织细胞中期核染色体异常的敏感方法 被引量：1
6
作者 谢民强 肖健云 +1 位作者 朴浚植 李相淑 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 1995年第1期43-43,共1页
为了增强福尔马林固定，石蜡包埋组织切片中细胞中期核染色体原位杂交效果，我们对组织的预处理条件进行了改良，结果发现，应用微波加热，硫氰酸钠处理后蛋白酶消化时间明显缩短，减轻了对组织形态结构的破坏，在大多数切片中获得均匀... 为了增强福尔马林固定，石蜡包埋组织切片中细胞中期核染色体原位杂交效果，我们对组织的预处理条件进行了改良，结果发现，应用微波加热，硫氰酸钠处理后蛋白酶消化时间明显缩短，减轻了对组织形态结构的破坏，在大多数切片中获得均匀一致的杂交信号。提示本改良方法可能成为肿瘤发生学研究的重要工具。 展开更多
关键词 染色体异常 地高辛标记 dna探针 原位杂交 肿瘤
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