传染性法氏囊病病毒dsRNA核酸提取 被引量：17

1

作者 陈溥言 卢春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期73-76,共4页

用免疫沉淀法从感染鸡法氏囊组织中分离传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），用差速离心法从感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）中分离ＩＢＤＶ，再从分离的ＩＢＤＶ中抽提ｄｓＲＮＡ。在ｄｓＲＮＡ提取物受ＤＮＡ降解产物影响时，可用ＤＮａ... 用免疫沉淀法从感染鸡法氏囊组织中分离传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），用差速离心法从感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）中分离ＩＢＤＶ，再从分离的ＩＢＤＶ中抽提ｄｓＲＮＡ。在ｄｓＲＮＡ提取物受ＤＮＡ降解产物影响时，可用ＤＮａｓｅⅠ消化去除，核酸再经琼脂糖凝胶电泳纯化。 展开更多

关键词 病毒 提纯 免疫沉淀法 IBD 鸡病

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差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察 被引量：12

2

作者 罗靖莹 贺宏丽 +2 位作者 郭阳 黄玮玮 黄晓波 《山东医药》 CAS 2019年第12期48-52,共5页

目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心... 目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心技术提取外泌体;记录各组外泌体提取时间;采用负染色技术观察各组外泌体形态;使用纳米颗粒跟踪分析仪测算各组外泌体浓度及大小;采用BCA法测定外泌体总蛋白浓度;采用Western blotting法检测各组外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、Alix。将肺微血管内皮细胞(PMVECs)分成5组,EC组上室加入PMVECs及培养基; LPS组上室加入PMVECs及含LPS的培养基(构建内皮细胞损伤模型); A、B、C组上室加入方法同LPS组,下室分别加入A、B、C组外泌体;采用葡聚糖渗漏实验检测外泌体内皮细胞通透性(观察外泌体对内皮细胞的修复作用),以内皮细胞通透指数表示。结果 A、B、C组的外泌体的提取时间分别为(180±8)、(203±10)、(40±5) min,A、B组外泌体的提取时间与C组相比,P均<0. 05。各组外泌体均为大小不等的椭圆形或圆形的膜性结构,边界清晰,但仅A组外泌体可见到典型的杯状结构。A、B、C组的外泌体浓度分别为(4. 46±0. 38)×108/m L、(5. 11±0. 16)×108/m L、(2. 18±0. 17)×108/m L,A、B组与C组外泌体浓度相比,P均<0. 05。A、B、C组的外泌体大小均为20～100 nm。A、B组外泌体总蛋白浓度及CD63、Alix的相对表达量均显著高于C组(P均<0. 05)。A、B、C、LPS、EC组的内皮细胞通透指数分别为2. 17±0. 15、1. 77±0. 32、2. 37±0. 42、2. 93±0. 15、1. 00±0. 00,A、B、C、LPS组的内皮细胞通透指数与EC组相比,P均<0. 05; A、B组的内皮细胞通透指数与LPS组相比,P均<0. 05。结论密度梯度离心技术虽耗时较长,但提取的外泌体纯度、浓度较高,对内皮细胞的修复作用较强,可以作为科研和临床研究的首选外泌体� 展开更多

关键词 外泌体 外泌体提取方法 差速离心技术 密度梯度离心技术 超滤离心技术 间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 肺微血管内皮细胞

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绿色蔬菜叶绿体DNA的提取和纯化 被引量：6

3

作者 卢太白 曾玲 +1 位作者 李坤 战海栗 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期186-188,共3页

对蔬菜绿叶通过组织匀浆,差速离心分离,密度梯度离心分离、纯化、提取叶绿体。显微镜下观察所得叶绿体纯度、形态及结构,看到椭圆、球形叶绿体,并用数码照相机拍照。样品用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后,用酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戎醇抽... 对蔬菜绿叶通过组织匀浆,差速离心分离,密度梯度离心分离、纯化、提取叶绿体。显微镜下观察所得叶绿体纯度、形态及结构,看到椭圆、球形叶绿体,并用数码照相机拍照。样品用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后,用酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戎醇抽提、处理纯化。取得的叶绿体DNA(ctDNA)用紫外分光光度计检测浓度与纯度,1%琼脂糖电泳得到清晰、整齐的条带。 展开更多

关键词 叶绿体 差速离心 密度梯度离心 CTDNA 蔬菜

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适于基因组测序的高纯度的大豆线粒体基因组DNA提取方法 被引量：9

4

作者 李玉秋 张春宝 +4 位作者 赵洪锟 谭化 费晓燕 赵丽梅 董英山 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1734-1738,共5页

为满足高通量二代测序要求,本研究采用大豆黄花苗为试材,结合差速离心、蔗糖密度梯度离心及超速离心方法提取高纯度大豆线粒体基因组DNA(mt DNA)。结果表明,差速离心能够有效去除核基因组掺杂;超速离心与蔗糖密度梯度离心结合能够有效... 为满足高通量二代测序要求,本研究采用大豆黄花苗为试材,结合差速离心、蔗糖密度梯度离心及超速离心方法提取高纯度大豆线粒体基因组DNA(mt DNA)。结果表明,差速离心能够有效去除核基因组掺杂;超速离心与蔗糖密度梯度离心结合能够有效去除叶绿体污染。提取的mt DNA经琼脂糖凝胶电泳、紫外光度计检测及叶绿体和细胞核特异性引物检测表明,该方法提取的大豆mt DNA无叶绿体DNA及核DNA污染,且纯度高,可满足测序等对线粒体高纯度的要求,为研究大豆线粒体相关性状的机理奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 大豆 MT DNA 差速离心 超速离心 线粒体

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猪伪狂犬病毒的增殖、纯化和鉴定 被引量：8

5

作者 王大伟 李学伍 +1 位作者 王丽 史西保 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第11期125-127,共3页

以伪狂犬病毒(PRV)活疫苗Bartha弱毒株接种于幼仓鼠肾细胞(BHK-21)使其增殖,通过PCR方法鉴定了病毒。以组织细胞半数感染剂量(TCID50)对病毒效价进行了评定,利用蔗糖密度梯度离心法纯化了病毒。结果表明,培养的病毒滴度为103.25TCID50/... 以伪狂犬病毒(PRV)活疫苗Bartha弱毒株接种于幼仓鼠肾细胞(BHK-21)使其增殖,通过PCR方法鉴定了病毒。以组织细胞半数感染剂量(TCID50)对病毒效价进行了评定,利用蔗糖密度梯度离心法纯化了病毒。结果表明,培养的病毒滴度为103.25TCID50/mL,纯化后的病毒经SDS-PAGE电泳显示,获得了较纯的蛋白条带。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 仓鼠肾细胞 差速离心 纯化 鉴定

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离心过滤法提取外切体的实验研究 被引量：3

6

作者 白俊 任军 +3 位作者 王均 张红梅 杨静悦 张利旺 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第10期890-892,共3页

目的 :利用外切体的物理特性 ,用基于孔径分离的生物膜离心过滤法制备外切体 ,以降低其研究及应用的技术门槛 .方法 :以树突状细胞的培养上清作为外切体的来源 ,分别用传统的超高速密度梯度离心法和生物膜离心过滤法制备外切体 ,再利用... 目的 :利用外切体的物理特性 ,用基于孔径分离的生物膜离心过滤法制备外切体 ,以降低其研究及应用的技术门槛 .方法 :以树突状细胞的培养上清作为外切体的来源 ,分别用传统的超高速密度梯度离心法和生物膜离心过滤法制备外切体 ,再利用透射电镜进行两者之间形态学鉴定 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质成分的鉴定 .结果 :两种方法的提取物在超微结构及形态方面非常相像 ,其蛋白质谱几乎一致 .结论 :基于生物膜分离技术的离心过滤法可制备出外切体 . 展开更多

关键词 外切体 超高速密度梯度离心 生物膜 离心过滤法

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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在尿标本微生物快速鉴定中的应用 被引量：6

7

作者 许荣琴 杜鸿 +2 位作者 谢小芳 郭敏 周惠琴 《检验医学与临床》 CAS 2018年第24期3694-3697,共4页

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在尿液标本微生物快速鉴定中的临床应用价值。方法收集苏州大学附属第二医院2016年10-12月住院和门诊送检的中段尿标本进行差速离心沉淀后经MALDI-TOF MS技术检测,同时进行... 目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在尿液标本微生物快速鉴定中的临床应用价值。方法收集苏州大学附属第二医院2016年10-12月住院和门诊送检的中段尿标本进行差速离心沉淀后经MALDI-TOF MS技术检测,同时进行尿常规和有形成分分析,并与传统尿培养鉴定结果进行比较,计算质谱的鉴定率。结果 212例尿培养阳性标本中MALDI-TOF MS技术鉴定出病原菌168例,总鉴定率为79.2%,大肠埃希菌鉴定率最高,为92.0%,其他肠杆菌科细菌、肠球菌属、非发酵菌科鉴定率分别为79.4%、66.5%、66.7%,假丝酵母菌属、链球菌属、其他革兰阳性菌标本量少,鉴定率分别为58.3%、50.0%、44.4%。其中140例标本菌落计数大于105 CFU/mL,鉴定率为92.9%。结论 MALDI-TOF MS技术直接检测尿液标本中的微生物具有简单快速、准确性高等优点,可以弥补传统方法的不足,有效缩短检验时间,优化实验室流程,准确快速地为临床提供检验结果,结合尿常规和有形成分分析等辅助手段具有较高的临床应用价值。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术 快速鉴定 差速离心 中段尿培养

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动物线粒体基因组全序列测定的研究策略 被引量：4

8

作者 尚娜 周志军 《河池学院学报》 2008年第2期62-65,共4页

动物线粒体基因组全序列测定是近年来生物学研究中的一个热点。科学技术的发展,对动物线粒体基因组全序列测定的研究策略也产生了深远的影响。在此对几种在动物线粒体基因组全序列测定中常用的几种策略进行了综述,并对其优缺点进行了比... 动物线粒体基因组全序列测定是近年来生物学研究中的一个热点。科学技术的发展,对动物线粒体基因组全序列测定的研究策略也产生了深远的影响。在此对几种在动物线粒体基因组全序列测定中常用的几种策略进行了综述,并对其优缺点进行了比较分析。 展开更多

关键词 后生动物 线粒体基因组全序列 氯化铯密度梯度离心法 差速离心法 L-PCR

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假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的提取与分析 被引量：6

9

作者 严孟宁 戴尅戎 +2 位作者 贾庆卫 李宏斌 王晓庆 《临床骨科杂志》 2005年第1期70-73,共4页

目的观察、分析假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的分布情况,为体外及体内磨损试验提供颗粒.方法从一个临床严重骨溶解的髋关节翻修病例术中的骨溶解组织,采用强碱消化法提取磨损颗粒,密度梯度离心法纯化金属颗粒直径,通过组织学观察颗粒... 目的观察、分析假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的分布情况,为体外及体内磨损试验提供颗粒.方法从一个临床严重骨溶解的髋关节翻修病例术中的骨溶解组织,采用强碱消化法提取磨损颗粒,密度梯度离心法纯化金属颗粒直径,通过组织学观察颗粒在组织中的分布,等离子光谱分析仪(ICP-AES)、偏光镜分析颗粒成分,扫描电镜、颗粒计数仪观察颗粒大小形态.结果磨损颗粒在骨溶解组织中分布不均匀;磨损颗粒主要成分为钛合金、聚乙烯、含硫酸钡骨水泥;组织中颗粒大小变化较大,聚乙烯颗粒直径为0.13～37.00 μm,钛合金颗粒直径为0.05～49.30 μm,金属颗粒密度梯度离心后平均直径为0.85 μm ,约90%颗粒直径在0.50～1.00 μm.结论通过强碱消化及密度梯度离心提取、纯化假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的方法可提供符合试验需要的金属颗粒. 展开更多

关键词 骨溶解组织 磨损颗粒 梯度离心法 钛合金

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人参根外泌体的提取、表征及其对多柔比星诱导的心肌损伤保护作用机制 被引量：5

10

作者 刘恬佳 邱智东 +3 位作者 邱野 陈亚君 胡爽 刘达 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3514-3521,共8页

目的研究人参Panax ginseng根外泌体提取、表征及其体外心肌保护活性。方法采用差速离心法与蔗糖梯度离心法提取人参根外泌体;通过透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术对外泌体进行鉴定;采... 目的研究人参Panax ginseng根外泌体提取、表征及其体外心肌保护活性。方法采用差速离心法与蔗糖梯度离心法提取人参根外泌体;通过透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术对外泌体进行鉴定;采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法对人参根外泌体进行蛋白质组学分析;通过SmallRNA测序分析人参根外泌体中SmallRNA种类;建立H9C2心肌细胞损伤模型,利用CCK-8法检测细胞活力;以最刘质量浓度的人参根外泌体处理H9C2细胞,应用Hoechst染色和JC-1染色考察细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白。结果 TEM图中清晰可见人参根外泌体呈茶托状的双层膜结构;NTA粒径分析检测到112.7nm的人参根外泌体占总人参根外泌体的92.7%;蛋白组学分析鉴定到5585个蛋白;SmallRNA测序鉴定到miRNA、tRNA、snRNA、rRNA、snoRNA 5种SmallRNA;体外实验结果显示,与对照组相比,模型组细胞活力下降,人参根外泌体给药组呈剂量依赖性地使细胞活力升高,细胞凋亡率降低;Western blotting结果显示凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白水平下降;Bax、Cyt C的蛋白水平升高。结论首次报道了人参根外泌体的提取工艺及表征,并发现人参根外泌体对多柔比星诱导的心肌损伤具有一定的保护作用。 展开更多

关键词 人参 外泌体 多柔比星 H9C2细胞 心肌损伤 细胞凋亡 差速离心法 梯度离心法 Small RNA

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Erwinia herbicola冰核活性蛋白的分离、电泳分析鉴定 被引量：3

11

作者 陈庆森 张晓玲 +2 位作者 阎亚丽 刘剑虹 庞广昌 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第1期8-10,共3页

对Erwiniaherbicola(A2 5 )菌株的冰核活性蛋白的分离纯化及电泳进行研究。主要方法①按双温培养的方法 ,获得了较高的生物量积累和强冰核活性的诱导表达。②实验采用渗透压冲击法破碎细菌细胞 ,破碎率达 98 6 7%。③通过差速离心法获... 对Erwiniaherbicola(A2 5 )菌株的冰核活性蛋白的分离纯化及电泳进行研究。主要方法①按双温培养的方法 ,获得了较高的生物量积累和强冰核活性的诱导表达。②实验采用渗透压冲击法破碎细菌细胞 ,破碎率达 98 6 7%。③通过差速离心法获取不同冰核活性蛋白组分 ,测定各组分的冰核活性和SDS -PAGE电泳图谱分析。建立了冰核活性因子的高冰核活性与离心力之间的关系 ;利用SDS -PAGE还建立了具冰核活性蛋白的分子量的大小与冰核活性蛋白组分之间的关系。证实了具高冰核活性蛋白质最小结构单位约为 2 6 0kD。 展开更多

关键词 冰核活性蛋白 差速离心 渗透压冲击法 SDS-PAGE 冰核活性细菌 分离 电泳分析

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穿刺液标本差速离心与甩片方法检菌效果观察 被引量：5

12

作者 张敏 王宁 +2 位作者 张迎春 顾岩 杜伟 《河北医学》 CAS 2012年第1期71-73,共3页

目的:了解差速离心与甩片方法涂片检菌的效果,为降低标本涂片检菌的假阴性率提供有效的方法。方法:对临床送检的穿刺液常规涂片检菌阴性的标本,以差速离心和甩片两种方法涂片检菌。结果:75份脓性标本差速离心方法检出细菌49例;甩片方法... 目的:了解差速离心与甩片方法涂片检菌的效果,为降低标本涂片检菌的假阴性率提供有效的方法。方法:对临床送检的穿刺液常规涂片检菌阴性的标本,以差速离心和甩片两种方法涂片检菌。结果:75份脓性标本差速离心方法检出细菌49例;甩片方法涂片检出细菌3例。63份血细胞压积5%以上非脓血性穿刺液标本差速离心方法检出细菌15例;甩片方法涂片检出细菌5例。71份血细胞压积5%以下穿刺液标本差速离心方法检出细菌6例;甩片方法涂片检出细菌3例。结论:穿刺液标本差速离心涂片检菌是目前最有效的检菌方法,值得大力推广。 展开更多

关键词 穿刺液 差速离心 标本

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马铃薯亚细胞结构线粒体DNA的分离与提取 被引量：3

13

作者 卢太白 韦伟 徐雷 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期155-157,共3页

以马铃薯块茎为材料,通过差速离心分离出线粒体,过垫梯度离心进一步纯化。显微镜下观察所得的线粒体的纯度、形态;并用数码相机进行照相。线粒体样用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后用饱和酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇提取处理,乙醇沉淀,提... 以马铃薯块茎为材料,通过差速离心分离出线粒体,过垫梯度离心进一步纯化。显微镜下观察所得的线粒体的纯度、形态;并用数码相机进行照相。线粒体样用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后用饱和酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇提取处理,乙醇沉淀,提取得线粒体DNA(mtDNA)。紫外分光光度计检测提取浓度、纯度,1%琼脂糖电泳获得清晰、整齐的条带。 展开更多

关键词 线粒体 MTDNA 差速离心 过垫梯度离心 马铃薯

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差速离心结合蛋白质组学技术研究受镉盐胁迫后的牙鲆肝差异蛋白质 被引量：4

14

作者 那宏坤 黄清育 黄河清 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1019-1024,共6页

人工构建镉盐污染源,选用差速离心结合双向凝胶电泳(2D-PAGE)法,高效提取、分离和筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus,PO)受镉盐胁迫后的肝脏全蛋白和差异蛋白质。实验结果表明:选用直接裂解法提取牙鲆肝(PO liver POL)全蛋白质且用2D-PAG... 人工构建镉盐污染源,选用差速离心结合双向凝胶电泳(2D-PAGE)法,高效提取、分离和筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus,PO)受镉盐胁迫后的肝脏全蛋白和差异蛋白质。实验结果表明:选用直接裂解法提取牙鲆肝(PO liver POL)全蛋白质且用2D-PAGE分离,可获得约800个蛋白斑点,其中镉盐诱导了11个差异蛋白斑点。以相对离心力为1000×g、12000×g和100000×g的差速离心法,分别制备了3种沉淀蛋白和1种胞浆蛋白,称为POL组分Ⅰ、POL组分Ⅱ、POL组分Ⅲ和POL组分Ⅳ(胞浆蛋白),蛋白斑点数目分别为380、550、500和850个,总计2280个,明显高于直接裂解法。比较分析法发现,差速离心结合2D-PAGE分离技术可获得牙鲆肝脏受镉盐胁迫后表达的54个差异蛋白质,并适合于用肽质量指纹(peptide mass fingerprint,PMF)图谱技术鉴定。本实验所建立的差速离心结合蛋白质组学技术可高效提取、分离和鉴定组织全蛋白或差异蛋白,并能有效地筛选出蛋白指示物。 展开更多

关键词 牙鲆肝 蛋白质组学 差速离心 镉污染 蛋白指示物

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蚊虫线粒体基因组DNA提取方法 被引量：4

15

作者 邹依霖 丁奕然 +1 位作者 罗钱春 陈斌 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2015年第4期333-336,共4页

目的优化和改进一套适用于蚊虫线粒体基因组DNA的提取方法。方法从动物线粒体基因组DNA提取的一般方法、步骤和原理出发,主要采用改进的高盐沉淀法,并注意去除核DNA的污染。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和线粒体COⅠ基因PCR扩增产... 目的优化和改进一套适用于蚊虫线粒体基因组DNA的提取方法。方法从动物线粒体基因组DNA提取的一般方法、步骤和原理出发,主要采用改进的高盐沉淀法,并注意去除核DNA的污染。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和线粒体COⅠ基因PCR扩增产物鉴定所提的线粒体基因组DNA。结果改进后的方法适用于单只蚊虫,用凝胶电泳检测后发现无核DNA与蛋白质污染。改进后的方法简便易行,经过多种蚊虫线粒体基因组提取的实验表明,提取的蚊虫线粒体基因组DNA质量高,能满足PCR、克隆、测序分析等要求。结论优化和改进的提取方法简便易行,得到的蚊虫线粒体基因组DNA质量高,能满足相关分析要求。 展开更多

关键词 蚊科 线粒体基因组 DNA提取方法 差速离心

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菠菜叶片线粒体DNA的提取及RAPD分析 被引量：4

16

作者 王丹丹 丁炳旭 《辽东学院学报（自然科学版）》 CAS 2014年第1期32-36,共5页

以菠菜叶片为实验材料，采用差速离心法、 DNaseI处理得到无核污染的线粒体、以SDS法去除蛋白，消化RNA得到单纯的菠菜叶片mtDNA，通过对mtDNA纯度的测定，从而建立了菠菜叶mtD-NA快速、高效的提取技术体系；同时选取30个引物对三种菠菜... 以菠菜叶片为实验材料，采用差速离心法、 DNaseI处理得到无核污染的线粒体、以SDS法去除蛋白，消化RNA得到单纯的菠菜叶片mtDNA，通过对mtDNA纯度的测定，从而建立了菠菜叶mtD-NA快速、高效的提取技术体系；同时选取30个引物对三种菠菜mtDNA进行RAPD扩增，对提取的mtD-NA体系进行了RAPD分析，结果表明，由引物S7、 S16、 S21、 S24扩增出的条带清晰、多态性较好，片段大小在200～2000 bp之间，表明菠菜各品种的mtDNA各碱基序列上的多态性，是各品种之间进化凸现的原因之一。本研究建立的试验方法耗时短、对离心机的要求不高，并且提取的mtDNA产率高、结构也比较完整。 展开更多

关键词 菠菜叶片 MTDNA 差速离心 RAPD

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血清替代培养法使血清外泌体干扰最小化

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作者 王丹 韩晓梅 +1 位作者 张超 周越 《生物医学工程学进展》 CAS 2023年第1期42-49,共8页

外泌体是细胞之间及细胞和细胞外基质之间信号交流的途径之一。近年来,对外泌体的研究呈现显著增长的态势。在体外细胞培养系统中,为保证细胞正常的生理状态,血清是培养液中必须添加的成分。随之而来的问题是,由于血清中含有大量外泌体... 外泌体是细胞之间及细胞和细胞外基质之间信号交流的途径之一。近年来,对外泌体的研究呈现显著增长的态势。在体外细胞培养系统中,为保证细胞正常的生理状态,血清是培养液中必须添加的成分。随之而来的问题是,由于血清中含有大量外泌体,其数量数倍于研究中需要进行针对性研究的特定外泌体,从而对特定外泌体的定量和分析造成了干扰。为了去除培养液血清中的外泌体,很多研究者采用差速离心法、密度梯度离心法等进行处理。该研究通过流式细胞分析对外泌体定量后发现,加入2%血清的培养液在进行差速离心处理后,外泌体数量减少了30.6%;而加入5%的血清培养液,外泌体数量下降了32.4%。由此可见,差速离心处理对不同浓度血清的培养液结果类似,只能去除约30%的血清外泌体,留下约70%的血清外泌体,仍然会对实验数据造成干扰。因此,在人脐静脉内皮细胞体外培养系统中,该研究探索了一种新型血清替代培养法,即以无生物成分的血清替代物XerumFree替代培养液中的大部分血清,经过对一系列配比进行探索发现,当XerumFree与胎牛血清FBS体积比为15:1时,细胞既可以正常生长,又可以分泌外泌体,而背景中外泌体干扰程度降低到2%,从而较好地解决了外源性外泌体形成的背景干扰问题,为体外研究外泌体提供了明确的参考方案。 展开更多

关键词 外泌体 细胞培养 差速离心 血清

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海苔和茶叶中铝的亚细胞分布及风险评估 被引量：2

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作者 宋政 马丽霞 +2 位作者 彭青枝 黄徽 程银琪 《食品与机械》 北大核心 2021年第3期46-50,63,共6页

以海苔和茶叶为研究对象,采用差速离心法结合微波消解—电感耦合等离子体质谱法分析茶叶和海苔中铝的亚细胞分布,结果表明,茶叶中铝在细胞壁、细胞器、细胞质中占比分别为78.4%,11.2%,9.5%,海苔中铝在细胞壁、细胞器、细胞质中占比分别... 以海苔和茶叶为研究对象,采用差速离心法结合微波消解—电感耦合等离子体质谱法分析茶叶和海苔中铝的亚细胞分布,结果表明,茶叶中铝在细胞壁、细胞器、细胞质中占比分别为78.4%,11.2%,9.5%,海苔中铝在细胞壁、细胞器、细胞质中占比分别为91.60%,6.95%,1.33%。结合透射电子显微镜—能谱法对茶叶和海苔中铝的分布在单细胞范围内进行面扫分析,直观地揭示了茶叶和海苔中铝主要分布在细胞壁中。人工模拟胃液提取茶叶和海苔及其亚细胞组分中的铝,直接提取茶叶中铝的提取率为9.0%左右,其亚细胞组分提取率均不足3.0%;海苔及其亚细胞组分中铝的提取率均低于1.5%,提示茶叶和海苔中铝摄入的食品安全风险较低。 展开更多

关键词 铝 茶叶 海苔 差速离心法 透射电子显微镜—能谱法

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小麦蓝矮植原体染色体DNA的分离 被引量：2

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作者 陈旺 李艳 吴云锋 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期706-710,共5页

【目的】分离小麦蓝矮(WBD)植原体染色体DNA,并建立WBD植原体染色体分离纯化体系。【方法】采用差速离心和脉冲电泳(PFGE)方法富集纯化WBD植原体染色体DNA,并通过PCR和Southern blot进行检测验证,实时荧光定量PCR方法对分离纯化效果进... 【目的】分离小麦蓝矮(WBD)植原体染色体DNA,并建立WBD植原体染色体分离纯化体系。【方法】采用差速离心和脉冲电泳(PFGE)方法富集纯化WBD植原体染色体DNA,并通过PCR和Southern blot进行检测验证,实时荧光定量PCR方法对分离纯化效果进行定量检测。【结果】脉冲电泳凝胶中出现一条大小约为650 kb的条带,经PCR检测和Southern blot分析表明该条带为WBD植原体的染色体DNA。实时荧光定量PCR检测结果表明采用差速离心与脉冲电泳结合的方法可以将WBD植原体基因组的相对拷贝数提高436.5倍。【结论】采用差速离心与脉冲电泳法结合可以有效地从感染WBD长春花中分离到纯的WBD植原体染色体DNA,WBD植原体染色体DNA大小约为650 kb。 展开更多

关键词 小麦蓝矮(WBD)植原体 染色体DNA 分离纯化 差速离心 脉冲电泳

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蒙药孟根乌苏中HgS微-纳米颗粒的提取、分离及体外溶出研究 被引量：2

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作者 王敏杰 陈朝军 +2 位作者 周南 曹群 武世奎 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期4513-4519,共7页

目的对蒙药孟根乌苏中HgS微-纳米颗粒的提取、分离及体外溶出进行研究。方法采用索氏提取法去除单质硫,确定孟根乌苏提取的最佳时间。采用差速离心法分离HgS颗粒;通过控制PVP浓度、投料比、离心机转速等因素获得不同粒径的HgS微-纳米颗... 目的对蒙药孟根乌苏中HgS微-纳米颗粒的提取、分离及体外溶出进行研究。方法采用索氏提取法去除单质硫,确定孟根乌苏提取的最佳时间。采用差速离心法分离HgS颗粒;通过控制PVP浓度、投料比、离心机转速等因素获得不同粒径的HgS微-纳米颗粒;利用扫描电镜(SEM)及X-射线衍射法(XRD)分析颗粒形貌和结构组成;采用双硫腙比色法对比研究不同粒径范围的HgS颗粒、孟根乌苏原药材及孟根乌苏-18味丸在模拟人工胃液、人工肠液中的溶出情况。结果分离得到的6个HgS颗粒样品的粒径分布较均匀,粒径分别为2 000～4 000、800～2 000、200～800、80～200、50～80、20～50 nm。提取后样品中主要成分为α-HgS及β-HgS。体外溶出结果表明,随着HgS颗粒粒径变小,汞的溶出度增大,表明汞的溶出与HgS颗粒粒径大小呈反比关系。同时汞的溶出度也受硫、p H值及复方的影响。结论该法可简单、高效地分离HgS颗粒。为不同粒径HgS微-纳米颗粒的药动学和药理学研究提供了基础。 展开更多

关键词 孟根乌苏 HgS微-纳米颗粒 差速离心法 扫描电子显微镜 提取分离 体外溶出

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