5°～25°坡耕地径流小区产流产沙规律 被引量：14

1

作者 杨建霞 雷孝章 +1 位作者 邱景 陈平安 《中国水土保持科学》 CSCD 2008年第z1期30-34,53,共6页

基于四川省遂宁水土保持试验站坡耕地水土流失的观测数据统计,通过探讨降雨产生的地表径流深及冲刷量随坡度的变化,以及耕作措施和植被对坡面侵蚀的影响,提出坡耕地在降雨时的产流产沙规律:相同前提下,产流产沙量随坡度增加而增加;横坡... 基于四川省遂宁水土保持试验站坡耕地水土流失的观测数据统计,通过探讨降雨产生的地表径流深及冲刷量随坡度的变化,以及耕作措施和植被对坡面侵蚀的影响,提出坡耕地在降雨时的产流产沙规律:相同前提下,产流产沙量随坡度增加而增加;横坡耕作时,产流产沙量剧减,而顺坡耕作时产流产沙增加;种植农作物时,较之坡面植草,产流量减少,但产沙量增加。同时用灰色关联系数法确定各因子对坡耕地水土流失的影响序列为:产流时,坡度>耕作措施>植被;产沙时,耕作措施>坡度>植被。 展开更多

关键词 径流深 冲刷量 坡度 耕作方式 植被 因子组合 曲线突变

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用于函数式自动生成的改进遗传算法 被引量：1

2

作者 蔡钧 《计算机工程与设计》 CSCD 北大核心 2006年第9期1660-1662,共3页

针对编码和优化对象的特点,提出了一种改进的遗传算法。算法中采用了基于最优保持的父子竞争的选择和交叉机制;提出了对整个种群进行自适应变异和对优良个体大变异的双变异法;引入了滤除相似个体的过滤操作。通过对测试函数的拟合试验,... 针对编码和优化对象的特点,提出了一种改进的遗传算法。算法中采用了基于最优保持的父子竞争的选择和交叉机制;提出了对整个种群进行自适应变异和对优良个体大变异的双变异法;引入了滤除相似个体的过滤操作。通过对测试函数的拟合试验,算法的收敛频率和收敛速度都好于其它的改进遗传算法。与其它拟合方法的拟合结果比较,用该算法拟合得到的拟合函数有着较高的拟合精度,说明该方法有着较高的拟合效率。 展开更多

关键词 改进遗传算法 函数式自动生成 传感器 曲线拟合 二步变异法

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ROC曲线在河源市新生儿G6PD缺乏症筛查截断值中的应用

3

作者 刘运华 吴坤 刘晓燕 《分子诊断与治疗杂志》 2021年第7期1166-1170,共5页

目的建立河源地区新生儿G6PD缺乏症筛查截断值。方法取新生儿足跟血滤纸干血斑以荧光免疫分析法测定G6PD活性,取外周血以比值法进行验证,部分新生儿进行G6PD基因突变分析,应用MedCalc软件制作受试者工作特征曲线确定G6PD筛查截断值。结... 目的建立河源地区新生儿G6PD缺乏症筛查截断值。方法取新生儿足跟血滤纸干血斑以荧光免疫分析法测定G6PD活性,取外周血以比值法进行验证,部分新生儿进行G6PD基因突变分析,应用MedCalc软件制作受试者工作特征曲线确定G6PD筛查截断值。结果在男性中,筛查截断值为3.00 U/gHb、4.50 U/gHb和4.42 U/gHb时,灵敏度分别为96.38%、98.84%、98.84%,特异度分别为99.83%、99.61%和99.62%,约登指数分别为0.962、0.985和0.985,阳性似然比分别为566.94、253.44和260.11,阴性似然比分别为0.04、0.01、0.01。在女性中,筛查截断值为3.00 U/gHb、4.50 U/gHb和4.42 U/gHb时,灵敏度分别为62.69%、92.84%和92.84%,特异度分别为99.10%、93.72%和94.32%,约登指数分别为0.618、0.866和0.872,阳性似然比分别为69.66、14.78和16.34,阴性似然比分别为0.38、0.08和0.08。不同基因突变位点导致不同程度的G6PD活性下降,以3.00 U/gHb为截断值将会漏诊部分G6PD杂合突变女性新生儿。评估近五年河源辖区内分娩新生儿筛查情况,以4.50 U/gHb为截断值可避免漏诊4 078例可疑G6PD缺乏症者。结论综合各评价指标,本实验室仍采用4.50 U/gHb作为G6PD缺乏症筛查截断值。新生儿G6PD缺乏症筛查截断值的建立,可为河源地区今后的筛查工作提供依据与参考。 展开更多

关键词 ROC曲线 荧光免疫分析法 截断值 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变

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温州地区新生儿G6PD缺乏症基因突变分析 被引量：14

4

作者 朱丽丹 丁红香 +3 位作者 倪莉 余坚 徐晓媛 杨啸 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期509-513,共5页

目的分析温州地区出生新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,G6PD)缺乏症发生率及基因突变特点。方法收集温州医科大学附属第二医院新生儿20 412例,应用滤纸荧光斑点法对新生儿进行G6PD缺乏症筛查... 目的分析温州地区出生新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,G6PD)缺乏症发生率及基因突变特点。方法收集温州医科大学附属第二医院新生儿20 412例,应用滤纸荧光斑点法对新生儿进行G6PD缺乏症筛查、酶法复诊;复诊阳性病例用MMCA法检测基因突变,MMCA法检测基因突变为阴性的再用二代基因测序;另筛查时间段内初筛阴性的女性样本G6PD活性值最低的53例用MMCA法检测基因突变。结果20 412例新生儿G6PD缺乏症纸片荧光法筛查阳性率为0.30%(62/20 412),其中男性59例,占95.16%(59/62);62例筛查阳性的病例酶法复诊均阳性,而MMCA法测基因突变阳性为60例,2例酶法复诊阳性而MMCA法检测阴性的样本通过二代测序均为c.1311C>T突变;MMCA法基因突变以c.1376G>T、c.1388G>A、c.1024C>T最为常见;初筛阴性的女性样本G6PD活性值最低的53例用MMCA法检测出基因突变8例。温州地区患儿母亲籍贯最多为泰顺县,占32.50%(13/40),而非温州地区广西壮族自治区、贵州、江西为高发地带,占63.33%(19/30)。结论温州地区新生儿中G6PD缺乏症男性患者多于女性。随着外来人口的流入和通婚的增多,温州地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 新生儿G6PD筛查 发生率 多色荧光PCR溶解曲线法 基因突变 分布特点

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荧光PCR溶解曲线法快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变 被引量：13

5

作者 徐费凡 顾德林 +1 位作者 瞿梅 施军卫 《热带医学杂志》 CAS 2016年第6期722-724,736,F0003,共5页

目的运用荧光PCR溶解曲线法快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变,并将其与传统药敏试验进行比较,从而评价其敏感性、特异性及应用价值。方法收集南通市第六人民医院2014年45株结核分枝杆菌临床分离株,运用荧光PCR溶解曲线... 目的运用荧光PCR溶解曲线法快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变,并将其与传统药敏试验进行比较,从而评价其敏感性、特异性及应用价值。方法收集南通市第六人民医院2014年45株结核分枝杆菌临床分离株,运用荧光PCR溶解曲线法和传统药敏法分别检测其对利福平和异烟肼的耐药性,评价两种方法检测的一致性。结果以传统药敏试验为金标准,荧光PCR溶解曲线法检测利福平耐药突变的灵敏度90.0%(9/10)、特异度93.9%(31/33)、阳性预测值81.8%(9/11)、阴性预测值96.9%(31/32)、符合率93.0%(40/43),其中有2例出现不均一突变,判为敏感;检测异烟肼耐药突变的灵敏度80.0%(12/15)、特异度96.4%(27/28)、阳性预测值92.3%(12/13)、阴性预测值90.0%(27/30)、符合率90.7%(39/43)。与传统药敏有很好的一致性。传统药敏试验和荣光PCR溶解曲线不符合的12株菌株经测序分析,结果荧光PCR溶解曲线法与测序结果保持高度一致性(除20、21号)。结论荧光PCR溶解曲线法能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变,并且有很好的灵敏性和特异性,可用于耐药结核分枝杆菌临床快速筛查。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 荧光PCR溶解曲线法 耐药突变 利福平 异烟肼

原文传递

荧光PCR溶解曲线法在耐药肺结核快速诊断中临床价值的探讨 被引量：11

6

作者 邹远妩 王婷 +4 位作者 王智存 梁亚萍 王卓 屈少毅 李静 《临床肺科杂志》 2019年第10期1882-1885,共4页

目的评价荧光PCR溶解曲线法(溶解曲线法)检测结核分枝杆菌耐药突变的效果。方法用液体传统药敏与溶解曲线法同时检测121株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素(Streptomycin,SM)、异烟肼(Isoniazid,INH)、利福平(Rifampicin,RFP)、乙胺丁醇(... 目的评价荧光PCR溶解曲线法(溶解曲线法)检测结核分枝杆菌耐药突变的效果。方法用液体传统药敏与溶解曲线法同时检测121株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素(Streptomycin,SM)、异烟肼(Isoniazid,INH)、利福平(Rifampicin,RFP)、乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)4种一线抗结核药物的耐药突变,罗氏传统药敏检测菌株对左氧氟沙星(Levofloxacin,LFX)和莫西沙星(MoxifLoxacin,MFX)的耐药性与溶解曲线法检测菌株氟喹诺酮类耐药突变,并进行比较。结果传统药敏与溶解曲线法检测,5种抗结核药物耐药性差异无统计学意义(P>0.05),而氟喹诺酮类中莫西沙星耐药性差异有统计学意义(P<0.05)。同一菌株,以传统药敏法为标准,溶解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB、氟喹诺酮类中左氧氟沙星耐药的敏感度分别为84.84%、72.73%、93.75%、80.00%、92.31%,特异度分别为93.18%、98.86%、97.75%、93.40%、90.74%,两种方检测法的一致性分析Kappa值分别为0.7803、0.7159、0.9150、0.7340、0.8305,表明两者一致性好;两种方法对氟喹诺酮类中莫西沙星(MFX)耐药检测敏感度、特异度、约登指数分别为21.74%,99.01%,0.2075,表明两种方法一致性差。结论熔解曲线法与传统法对SM、INH、RFP、EMB、LFX耐药性检测效果一致,且快速,敏感度、特异度较高,可明显缩短结核诊疗时间;而熔解曲线法对MFX检测效果一般,敏感性、一致性较低。溶解曲线法在耐药结核病诊断、治疗上有较好指导意义。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 溶解曲线法 耐药突变 耐药结核

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上海地区幽门螺杆菌对克拉霉素耐药的相关基因检测 被引量：11

7

作者 黄声雷 郭玮 +2 位作者 胡必杰 周春妹 潘柏申 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期548-552,共5页

目的通过荧光PCR熔解曲线方法直接检测临床样本中幽门螺杆菌(Hp)对克拉霉素耐药基因,了解上海地区Hp耐克拉霉素基因的分布特征,并为临床快速检测Hp对克拉霉素耐药性提供一种有效的方案。方法收集2017年9-12月复旦大学附属中山医院消化... 目的通过荧光PCR熔解曲线方法直接检测临床样本中幽门螺杆菌(Hp)对克拉霉素耐药基因,了解上海地区Hp耐克拉霉素基因的分布特征,并为临床快速检测Hp对克拉霉素耐药性提供一种有效的方案。方法收集2017年9-12月复旦大学附属中山医院消化科就诊并接受胃镜检查的快速尿素酶试验Hp阳性患者的胃黏膜组织标本80份,使用荧光PCR熔解曲线法直接检测黏膜样本中Hp种特异性23SrRNA的区域并对扩增的核酸进行荧光标记,通过检测荧光变化绘制其熔解曲线,以确定Hp的23SrRNA突变情况;采用DNA测序技术直接检测标本中Hp克拉霉素23SrRNA耐药基因突变位点。并对两种方法的结果进行Kappa检验统计学比较。结果80份胃黏膜组织标本使用荧光PCR熔解曲线法共检测69份Hp阳性,11份Hp阴性,阳性率为86.2%。在69份Hp阳性标本中24份标本存在23SrRNA第2142或2143位点的变异,突变率34.8%。使用DNA测序法共检测出64份Hp阳性,阳性率为80.0%。其中23例患者的标本检测到23SrDNA耐药基因的突变,突变率35.9%。两种方法检测Hp耐药基因突变的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为87.0%、95.1%和92.2%,Kappa系数为0.829,两者一致性较好。结论上海地区克拉霉素耐药Hp菌株基因型以23SrRNA基因的A2143G突变占主导。荧光PCR熔解曲线法可直接检测胃黏膜活检组织中Hp及其23SrRNA突变基因,该方法结果准确可靠。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 克拉霉素耐药 荧光PCR熔解曲线法 DNA测序法 23SrRNA突变

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荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值 被引量：10

8

作者 阳央 冯智 +1 位作者 侯欢 李芳芹 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期405-409,共5页

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值。方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲... 目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值。方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法进行MTBC和异烟肼耐药突变检测,对检出MTBC的差异进行分析,以培养法药敏为金标准,评估熔解曲线法耐药突变检测的灵敏度、特异度、一致性等。结果370例患者培养法检出MTBC175株,阳性率47.3%,熔解曲线法检出157株,阳性率42.4%,两种方法检测的结果差异无统计学意义(P=0.073),一致性中等(Kappa=0.510);同时与有异烟肼药敏结果的115株进行比较,熔解曲线法灵敏度95.0%,特异度93.7%,与培养法结果比较差异无统计学意义(P=0.125),具有高度一致性(Kappa=0.807)。结论熔解曲线法试剂盒可用于结核菌快速筛查及耐药突变检测,对异烟肼耐药突变检测具有高灵敏度和特异度,有助于缩短耐药结核病诊断时间。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 熔解曲线法 快速检测 异烟肼耐药突变

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高分辨率熔解曲线分析技术及其应用进展 被引量：10

9

作者 李潇 卢瑶 《中国医学装备》 2010年第8期57-60,共4页

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异,并且成本低、通量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限,实... 高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异,并且成本低、通量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限,实现了真正的闭管操作。在突变扫描、单核苷酸多态性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面HRM分析技术发挥着重要作用。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 基因 突变

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荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值评估 被引量：7

10

作者 包晶晶 宋怡蒙 +4 位作者 贺文从 刘春法 刘东鑫 赵雁林 高飞 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2020年第2期147-153,共7页

目的:分析评价荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药耐药性的临床应用价值.方法:收集2013年黑龙江省耐药监测结核分枝杆菌临床分离株215例,运用荧光PCR熔解曲线法检测其对异烟肼、利福平、氟... 目的:分析评价荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药耐药性的临床应用价值.方法:收集2013年黑龙江省耐药监测结核分枝杆菌临床分离株215例,运用荧光PCR熔解曲线法检测其对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药物的耐药性,以微孔板药敏试验结果为金标准,评估熔解曲线快速检测耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率.结果:荧光PCR熔解曲线法检测利福平的灵敏度90.9%(20/22)、特异度95.85%(185/193)、阳性预测值71.42%(20/28)、阴性预测值98.93(185/187)、符合率95.34%(205/215);检测异烟肼的灵敏度为83.33%(35/42)、特异度91.9%(159/173)、阳性预测值71.42%(35/49)、阴性预测值95.78%(159/166)、符合率90.23%(194/215);检测氧氟沙星的灵敏度为90%(9/10)、特异度100%(205/205)、阳性预测值100%(9/9)、阴性预测值99.51%(205/206)、符合率99.53%(214/215);检测莫西沙星的灵敏度为88.88%(8/9)、特异度100%(206/206)、阳性预测值100%(8/8)、阴性预测值99.51%(206/207)、符合率99.51%(214/215);检测阿米卡星的灵敏度100%(3/3)、特异度100%(212/212)、阳性预测值100%(3/3)、阴性预测值100%(212/212)、符合率100%(215/215);检测卡那霉素的灵敏度80%(4/5)、特异度100%(210/210)、阳性预测值100%(4/4)、阴性预测值99.52%(210/211)、符合率99.53%(214/215).结论:荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药的耐药性有较好的灵敏性、特异性,检测时间短,可用于辅助耐药结核分枝杆菌快速诊断筛查. 展开更多

关键词 分枝杆菌 荧光PCR熔解曲线法 耐药突变 异烟肼 利福平 氟喹诺酮类 注射类二线药

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荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星耐药性的诊断价值 被引量：5

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作者 史剑权 高珊 王隽 《中国医药导报》 CAS 2022年第4期37-40,44,共5页

目的评价荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年12月首都医科大学附属北京胸科医院收治的肺结核患者170例,对表型药物敏感性试验(DST)和荧光PCR熔解曲线法对抗... 目的评价荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年12月首都医科大学附属北京胸科医院收治的肺结核患者170例,对表型药物敏感性试验(DST)和荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物耐药性进行比较。以表型DST结果为金标准,分析荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物耐药性的诊断价值。评价指标包括:敏感度、特异度、符合率、Kappa值、曲线下面积(AUC)值。同时进一步比较喹诺酮类药物(左氧氟沙星和莫西沙星)的耐药性。结果荧光PCR熔解曲线法DST敏感而表型DST耐药的例数,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为5、5、3例。荧光PCR熔解曲线法DST耐药而表型DST敏感的例数,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为9、16、24例。两种方法的总体不一致率,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为8.24%、12.35%、15.88%。荧光PCR熔解曲线法检测异烟肼耐药性的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是91.53%、91.89%、91.76%、0.821、0.917;对乙胺丁醇的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是77.27%、89.19%、87.65%、0.548、0.832;对左氧氟沙星的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是89.66%、82.98%、84.12%、0.564、0.863。莫西沙星对结核杆菌的耐药率为2.94%,明显低于左氧氟沙星的17.06%(P<0.01)。结论荧光PCR溶解曲线法对异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星的耐药性有较好的辅助诊断价值。 展开更多

关键词 荧光PCR熔解曲线 药物敏感性试验 结核 耐药 同义突变 异质性耐药

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荧光定量法与G6PD/6PGD比值法在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症诊断中的临床价值及基因突变分析 被引量：5

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作者 张潇分 田国力 +3 位作者 纪伟 周卓 郭静 王燕敏 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期522-527,共6页

目的探讨荧光定量法与G6PD/6PGD比值法在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症诊断的临床价值及基因突变类型分析。方法选择2018年6月至2021年3月就诊于上海市儿童医院疑似G6PD缺乏症的1201例(男711例,女490例)患儿,采用荧光定量法、G6PD/6... 目的探讨荧光定量法与G6PD/6PGD比值法在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症诊断的临床价值及基因突变类型分析。方法选择2018年6月至2021年3月就诊于上海市儿童医院疑似G6PD缺乏症的1201例(男711例,女490例)患儿,采用荧光定量法、G6PD/6PGD比值法和多色熔解曲线分析法对酶活性、比值和基因突变类型进行检测。分析酶活性、比值与基因突变类型的关系,将荧光定量法和G6PD/6PGD比值法的结果与基因突变结果对比分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断效能。结果1201份可疑标本中,检出163份(男135份,女28份),其中荧光定量法检出156例,检出率95.71%,G6PD/6PGD比值法检出140例,检出率85.89%。男性患儿酶活性及比值明显低于女性患儿,差异均具有统计学意义(U=642.5、734.5,P均<0.001)。112例接受基因检测,检出92例,其中半合子突变74例,纯合突变1例,杂合突变15例,复合杂合突变2例。15例杂合突变中,荧光定量法检出11例,检出率73.33%,G6PD/6PGD比值法检出4例,检出率26.67%。基因共检出7个突变位点,所占比例分别为c.1388G>A型32.22%、c.1376G>T型30.00%、c.871G>A型13.33%、c.1024C>T型11.11%、c.95A>G型7.78%、c.487G>A型4.44%、c.392G>T型1.11%。c.1376G>T和c.1024C>T、c.487G>A酶活性差异有统计学意义(P<0.001、0.015);c.1024C>T和c.1388G>A、c.1376G>T、c.871G>A、c.95A>G比值差异均有统计学意义(P=0.017、0.002、0.011、0.013)。ROC曲线分析荧光定量法敏感度100%,特异度95.65%,曲线下面积(AUC)0.972。G6PD/6PGD比值法敏感度100%,特异度94.57%,AUC 0.979。荧光定量法和G6PD/6PGD比值法联合检测时敏感度最高96.7%,特异度最高100%,AUC 0.992。结论与荧光定量法相比,G6PD/6PGD比值法可能无法有效检出女性杂合子;G6PD荧光定量法结合G6PD/6PGD比值法检测有利于减少漏诊,结合基因突变分析,可能提高G6PD患儿诊断率。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 荧光定量法 G6PD/6PGD比值法 多色熔解曲线分析法 基因突变

原文传递

昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分析

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作者 陈国祺 朱宝生 +6 位作者 贺静 赵苑村 镡颖 林军岳 周笑颜 陈红 章印红 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期293-300,共8页

目的分析昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的基因突变特点。方法选取2018年1月1日至2020年12月31日在昆明市出生的15533例(男7994例,女7539例)婴幼儿,年龄5(4,9)d,采用荧光定量法、多色熔解曲线分析法(MMCA)和Sanger测序... 目的分析昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的基因突变特点。方法选取2018年1月1日至2020年12月31日在昆明市出生的15533例(男7994例,女7539例)婴幼儿,年龄5(4,9)d,采用荧光定量法、多色熔解曲线分析法(MMCA)和Sanger测序对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性和基因突变类型进行检测。采用微滴式数字PCR技术(ddPCR)对一例新发变异家系进行定量分析,确定家系成员体细胞突变嵌合比例,同时对新发变异进行蛋白结构模型分析和致病性预测。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析,不同性别间G6PD酶活性和基因突变阳性检出率采用χ^(2)检验,G6PD基因突变组间酶活性的比较采用单因素方差分析。结果15533例婴幼儿中G6PD酶活性检出阳性143例(男129例,女14例),检出率为0.92%(143/15533),男女检出率差异具有统计学意义(χ^(2)=96.76,P<0.001)。89例酶活性阳性患儿(男83例,女6例)接受了基因检测,MMCA法检出77例(男72例,女5例),12份阴性样本进一步行Sanger测序,检出突变6份,均为男性。83例基因突变者中半合子突变78例,纯合突变1例,杂合突变4例。共检出12种突变类型,以G6PD c.487G>A、c.1024C>T、c.1388G>A和c.1376G>T 4种突变类型最为常见,占全部突变类型的74.70%(62/83)。c.1376G>T的平均酶活性最低,与另外3种突变的平均酶活性相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。检出一例G6PD c.242G>C新发变异男性患儿,预测为致病性变异。ddPCR证明患儿母亲为c.242G>C变异嵌合体,嵌合比例为6.66%。结论昆明地区G6PD缺乏症基因突变以c.487G>A为主,检出一例G6PD c.242G>C新发变异。ddPCR技术可辅助用于突变嵌合体比例检测。 展开更多

关键词 葡糖磷酸脱氢酶缺乏 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 G6PD活性 荧光定量法 多色熔解曲线分析 微滴式数字PCR 基因突变

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高分辨率熔解曲线分析技术在非缺失型α-地中海贫血新生儿筛查中的前瞻性应用 被引量：5

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作者 陆林苑 唐海深 李东至 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2013年第1期156-159,共4页

目的:验证高分辨率熔解曲线分析技术(HRM技术)用于筛查非缺失型α-地中海贫血的可行性。方法:应用全自动毛细管电泳技术对6 525例新生儿脐血进行血红蛋白定量分析,将Hb Bart's含量在0.1%～2.5%的样本挑出,排除3种常见缺失型α-地贫... 目的:验证高分辨率熔解曲线分析技术(HRM技术)用于筛查非缺失型α-地中海贫血的可行性。方法:应用全自动毛细管电泳技术对6 525例新生儿脐血进行血红蛋白定量分析,将Hb Bart's含量在0.1%～2.5%的样本挑出,排除3种常见缺失型α-地贫基因(--SEA、-α3.7、-α4.2)后剩下的样本,用HRM技术分别对α-基因的3个外显子进行扫描后对这些样本进行基因确诊。结果:所有28例非缺失型α-地中海贫血全部被检出。结论:HRM技术可作为非缺失型α-地中海贫血的一种筛查方法,且具有准确、高效、低成本的优点。 展开更多

关键词 非缺失型α-地中海贫血 HB Bart's 高分辨熔解曲线技术 突变

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延安市结核分枝杆菌耐药性与耐药基因检测结果分析 被引量：4

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作者 阳央 侯欢 +3 位作者 王东 李慧 冯智 李芳芹 《检验医学与临床》 CAS 2020年第22期3263-3266,共4页

目的探讨延安市结核分枝杆菌耐药性及相关耐药基因突变特征,为临床治疗及结核防控提供参考。方法将延安市第二人民医院2018年1月至2019年8月住院的肺结核患者共302例纳入研究,采用微孔板最低抑菌浓度(MIC)法对一线及部分二线抗结核药物... 目的探讨延安市结核分枝杆菌耐药性及相关耐药基因突变特征,为临床治疗及结核防控提供参考。方法将延安市第二人民医院2018年1月至2019年8月住院的肺结核患者共302例纳入研究,采用微孔板最低抑菌浓度(MIC)法对一线及部分二线抗结核药物进行药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法对利福平(RIF)及异烟肼(INH)表型耐药菌株进行耐药基因突变检测。结果302例患者中男性181例,女性121例,男女比为1.49∶1,总体耐药率为24.5%(74/302),单耐药率为13.6%,多耐药率为5.0%,耐多药率为6.0%,且男性耐药率高于女性(28.7%vs.18.2%,P=0.037);一线药物耐药率:INH(17.2%)>链霉素(SM)(11.3%)>RIF(7.6%)>乙胺丁醇(EMB)(1.3%),二线药物耐药率均较低;耐药模式主要以INH耐药但RIF敏感结核(INHR-TB)为主,占46.0%(34/74),耐多药以耐SM+RIF+INH模式常见,占66.7%(12/18)。RIF耐药菌株中87.0%存在rpoB基因突变,Kat G315和inhA突变介导了88.5%的INH耐药。结论该地区以药物敏感结核和INHR-TB为主,INH耐药和耐多药结核的出现应引起重视,进行耐药基因突变的快速检测有助于结核的治疗和防控。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 耐药性 耐药模式 熔解曲线法 耐药突变

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T-ARMS PCR多重检测方法研究 被引量：2

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作者 陶明丽 李莹雪 +4 位作者 李豪 张威 李传宇 周连群 李金泽 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第22期2689-2694,共6页

目的 建立有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(T-ARMS PCR)多重检测的方法,实现针对肝细胞癌常见基因突变位点TP53 R249S、TP53 R273H、CTNNB1 S45F的多重检测。方法 针对3个基因突变位点进行引物设计,每个基因突变位点所... 目的 建立有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(T-ARMS PCR)多重检测的方法,实现针对肝细胞癌常见基因突变位点TP53 R249S、TP53 R273H、CTNNB1 S45F的多重检测。方法 针对3个基因突变位点进行引物设计,每个基因突变位点所设计引物序列的5′端不加一段DNA序列(Tail Free Primer)或者所设计的引物序列5′端加一段相同的DNA序列(Tailed Primer),利用实时荧光定量PCR仪分别检测并比较3个基因突变位点的不同引物序列形成的单重体系、三重体系的扩增结果,研究T-AMRS PCR方法对突变型基因位点突变负荷的检测限、特异性和多靶标检测能力。结果 3个基因突变位点Tailed Primer单重体系扩增结果显示,突变型质粒的扩增均优于野生型质粒,野生型质粒的扩增均被有效抑制,突变负荷检测限低至0.10%,特异性良好。Tailed Primer三重体系减少了引物二聚体的产生,调控CTNNB1 S45F、TP53 R249S、TP53 R273H的解链温度分别为81.11℃、82.36℃、86.35℃,实现不同突变位点的显著区分。与Taqman探针基因分型方法相比,T-AMRS PCR方法野生型和突变型基因的Ct值差异更显著,单荧光通道即可实现突变基因检测。结论 运用T-ARMS PCR进行一管三重检测,分析熔解曲线,能有效检测到目的基因突变,抑制野生型模板的扩增,并区分不同的基因突变位点;同时,Tailed Primer设计减少了多重情况下引物二聚体的产生。该方法可为临床中肝细胞癌的早期筛查、预后预测、病情监测提供理论依据。 展开更多

关键词 有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应 多重检测 熔解曲线分析 基因突变 肝细胞癌

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东莞地区新生儿G6PD缺乏症发生率及基因突变分析 被引量：4

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作者 叶立新 黄锐华 +2 位作者 莫润旺 谢彩连 蔡小娟 《中国医学创新》 CAS 2020年第20期77-81,共5页

目的:了解东莞地区出生人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症发生率及其基因突变情况.方法:选择2016年9月1日-2019年12月31日东莞市送检的新生儿疾病筛查标本,共432820例,其中男232254例,女200566例,出生后72 h采集足跟血制作成干血斑,... 目的:了解东莞地区出生人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症发生率及其基因突变情况.方法:选择2016年9月1日-2019年12月31日东莞市送检的新生儿疾病筛查标本,共432820例,其中男232254例,女200566例,出生后72 h采集足跟血制作成干血斑,采用荧光定量法进行G6PD缺乏症筛查,对筛查阳性者召回采集静脉血采用G6PD/6PGD比值法进行确诊,对部分确诊者采用荧光定量PCR多色熔解曲线法(MMCA)进行G6PD基因突变分析.结果:东莞地区新生儿G6PD缺乏症筛查总体阳性率为3.60%(15588/432820),其中男、女阳性率分别为5.06%(11750/232254)和1.91%(3838/200566),两者筛查阳性率比较,差异有统计学意义(x^2=3067.24,P<0.001);本市户籍、本省户籍、外省户籍新生儿筛查阳性率分别为3.50%(4684/133719)、5.79%(5303/91553)、2.70%(5601/207548),本市户籍新生儿筛查阳性率与本省户籍、外省户籍比较,差异均有统计学意义(x^2=672.31、179.95,P<0.001).筛查阳性新生儿召回7044例,召回率45.19%,确诊5907例,确诊符合率83.86%,推算东莞地区新生儿G6PD缺乏症总体发生率为3.02%;男女的确诊符合率比较,差异有统计学意义(x^2=1164.83,P<0.001).219例确诊G6PD缺乏症新生儿中,检测出基因突变216例,共检出10种突变类型:67例(31.02%)c.1376G>T、67例(31.02%)c.1388G>A、26例(12.04%)c.871G>A、25例(11.57%)c.95A>G、7例(3.24%)c.1024C>T、7例(3.24%)c.392G>T、3例(1.39%)c.517T>C、2例(0.93%)c.1004C>A、1例(0.46%)c.1360C>T、1例(0.46%)c.592C>T和7种复合突变.结论:东莞地区是G6PD缺乏症的高发区,最常见的三种基因突变类型为c.1376G>T、c.1388G>A、c.871G>A,积极扎实开展新生儿G6PD缺乏症筛查具有重要意义. 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 新生儿疾病筛查 多色熔解曲线法 基因突变

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荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性价值及耐药特征分析 被引量：2

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作者 徐丽霞 雷永良 +3 位作者 吴燕飞 王炜 赖聪娟 许河南 《中国卫生检验杂志》 CAS 2022年第11期1318-1321,共4页

目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物... 目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物耐药情况,并对2种检测方案结果进行比较。结果 与液体药敏检测相比,熔解曲线法对5种抗结核药物耐药性检测结果差异无统计学意义(P> 0.05),以液体药敏检测为金标准,熔解曲线法检测RFP、INH、EMB、SM以及氟喹诺酮类药物耐药性的灵敏度分别为100.00%、75.86%、61.54%、75.00%、90.00%,特异度分别为97.10%、95.28%、99.30%、96.21%、100.00%,Kappa值分别为0.885、0.721、0.707、0.724、0.944,表明2种检测方法一致性好。结论 荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物RFP、INH、EMB、SM及氟喹诺酮类的耐药性与液体药敏法检测效果一致,灵敏度、特异度均较高,具有较好的临床应用价值。 展开更多

关键词 荧光PCR熔解曲线法 结核分枝杆菌 耐药性 突变特征

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高分辨熔解曲线分析慢性骨髓增殖性疾病JAK2V617F基因突变 被引量：3

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作者 谢健晋 周薇 +4 位作者 王汉平 应逸 杜庆华 陈晓燕 陈小卫 《中国热带医学》 CAS 2011年第4期464-465,共2页

目的研究慢性骨髓增殖性疾病(CMPDs)获得性JAK2V617F突变检测方法。方法应用高分辨熔解曲线分析技术(HRM),对前期经等位基因特异性PCR法(AS-PCR)分析过的36例CMPDs样本进行JAK2V617F基因突变检测,并与AS-PCR检测情况进行比较分析,结果... 目的研究慢性骨髓增殖性疾病(CMPDs)获得性JAK2V617F突变检测方法。方法应用高分辨熔解曲线分析技术(HRM),对前期经等位基因特异性PCR法(AS-PCR)分析过的36例CMPDs样本进行JAK2V617F基因突变检测,并与AS-PCR检测情况进行比较分析,结果经测序验证。结果 36例CMPDs样本均得到可供分析的JAK2V617F基因突变HRM检测结果,与AS-PCR法相比较,二者的符合率为97%(35/36);只有一份样本结果不相符,经测序验证,结果与HRM检测相一致;HRM检测的敏感性和特异性均达100%。结论应用HRM技术检测JAK2V617F突变快速简便、而且敏感,是一项适合临床开展的新方法,可用于临床辅助CMPDs的诊断。 展开更多

关键词 高分辨熔解曲线分析 JAK2V617F 突变 慢性骨髓增殖性疾病 等位基因 特异性PCR

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TILLING技术的最新进展及其在辐射诱变育种中的应用前景 被引量：3

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作者 杜艳 余丽霞 +2 位作者 刘青芳 周利斌 李文建 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期343-348,共6页

定向诱导基因组局部突变技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes,简称TILLINC)是一种全新的、高通量和低成本反向遗传学研究方法。近年来,随着突变筛选技术的革新,TILLING技术平台日趋多元化,使得TILLING技术的操作更为简单... 定向诱导基因组局部突变技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes,简称TILLINC)是一种全新的、高通量和低成本反向遗传学研究方法。近年来,随着突变筛选技术的革新,TILLING技术平台日趋多元化,使得TILLING技术的操作更为简单、快速,并广泛应用于作物育种研究领域。简要介绍了TILLING技术平台的最新发展动态,并初步探讨了将辐射诱变处理与TILLING高通量筛选相结合在诱变育种中的应用前景。 展开更多

关键词 定向诱导基因组局部突变技术 高分辨率溶解曲线 辐射 诱变育种

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