期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建 被引量：5
1
作者 李朝睿 杜立新 +4 位作者 彭琦 梁影屏 高继国 张杰 宋福平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期350-361,共12页
【目的】通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体。【方法】利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录... 【目的】通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体。【方法】利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性。通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证。【结果】构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E 4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体,经β-半乳糖苷酶活性分析得知,启动子活性从高到低依次为Pcry8E>Pcry1A>Pcry4A>Pcry3A。选取cry8E启动子,以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b,将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上,分别转入无晶体突变株HD-73?,获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac。扫描电子显微镜观察显示,HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体,说明正确表达了cry1Ac基因。SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b。对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性,且菌株活性高于HD-422-1Ac。【结论】利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b,该载体可正确表达cry1Ac基因,其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry8E启动子 cry3A启动子 表达载体
原文传递
绿色荧光蛋白基因原核表达载体的构建及其在昆虫肠道短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中的表达 被引量：2
2
作者 殷幼平 李强 +1 位作者 袁训娥 王中康 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期614-620,共7页
【目的】构建带有苏云金芽孢杆菌cry3a基因非芽孢依赖启动子和绿色荧光蛋白基因gfp(Green Fluorescent Protein)的原核表达载体,并转化从桑粒肩天牛幼虫肠道分离的两株常驻细菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt,以检测cry3a启动... 【目的】构建带有苏云金芽孢杆菌cry3a基因非芽孢依赖启动子和绿色荧光蛋白基因gfp(Green Fluorescent Protein)的原核表达载体,并转化从桑粒肩天牛幼虫肠道分离的两株常驻细菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt,以检测cry3a启动子在昆虫肠道常驻菌中的启动子活性,获得GFP标记菌株,为常驻菌在昆虫幼虫肠道中的定殖情况和杀虫工程菌的构建奠定基础。【方法】采用重叠延伸PCR将cry3a基因启动子和gfp基因进行融合,并与pHT304载体连接构建重组质粒pHT3AG,获得的重组质粒以电脉冲转化肠道常驻菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt,于可见光和荧光显微镜下观察荧光并通过SDS-PAGE分析重组菌株的蛋白表达情况,然后对重组菌株进行生长动力学分析和稳定性测试。【结果】重组菌在营养期大量组成型表达GFP,经电泳分离在凝胶上出现约29kDa的特异蛋白条带;重组菌生长曲线与出发菌没有显著差异,说明外源质粒未对宿主菌的生长带来明显不利影响;抗性条件下传代30次后两菌株外源质粒稳定性仍可达95%、67%;两个菌株比较,CQUBb比CQUBt质粒转化率高、重组菌GFP表达时间长、表达量大,并且重组菌株稳定性好。【结论】成功地将cry3a基因核心启动子和gfp基因转入桑粒肩天牛幼虫肠道常驻菌,实现了该启动子在Bt之外的菌株中发挥作用,构建了两个GFP标记菌株;重组基因工程菌株表达量大,稳定性好,可以用作昆虫肠道内微生态研究和芽孢杆菌表达系统以及杀虫菌株的构建。 展开更多
关键词 cry3a启动子 绿色荧光蛋白(Green FLUORESCENT Protein GFP) 肠道常驻菌 短短芽孢杆菌 苏云金芽孢杆菌
原文传递
枯草芽孢杆菌蛋白酶np基因在苏云金芽孢杆菌BMB171中的表达 被引量：1
3
作者 望慧星 雷珍珍 +1 位作者 许克静 乐超银 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第12期2926-2928,2933,共4页
为研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLYS_1蛋白酶np基因在苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)BMB171中的表达情况,从苏云金芽孢杆菌T6中克隆了cry3A启动子的两个片段,分别命名为pro3Aa和pro3Ab,并与pHT304质粒构建重组质粒pHT304-3Aa... 为研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLYS_1蛋白酶np基因在苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)BMB171中的表达情况,从苏云金芽孢杆菌T6中克隆了cry3A启动子的两个片段,分别命名为pro3Aa和pro3Ab,并与pHT304质粒构建重组质粒pHT304-3Aa-np和pHT304-3Ab-np,分别转化苏云金芽孢杆菌BMB171,得到重组菌BLYS-3Aa-np和BLYS-3Ab-np。结果表明,重组菌BLYS-3Ab-np发酵液中约110 ku的蛋白酶条带亮度明显高于重组菌BLYS-3Aa-np发酵液中对应条带亮度,BLYS-3Ab-np产蛋白酶能力明显高于BLYS-3Aa-np,随着发酵时间延长到60 h,对应条带的亮度均比45 h条带弱,与发酵上清液中水解干酪素结果变化一致。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) cry3A启动子 蛋白酶
下载PDF
带cry3 Aa启动子的aiiA基因在苏云金芽胞杆菌中的表达 被引量：21
4
作者 朱晨光 孙明 喻子牛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期397-401,共5页
N 乙酰高丝氨酸内酯 (N acyl homoserinelactones,AHLs) ,是一类数量感知 (Quorum sensing)系统中的信号分子 ,它参与诱导调控许多植物病原菌致病基因的表达。苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白能降解这类AHLs分子 ,进而可减弱病原菌致病基因表... N 乙酰高丝氨酸内酯 (N acyl homoserinelactones,AHLs) ,是一类数量感知 (Quorum sensing)系统中的信号分子 ,它参与诱导调控许多植物病原菌致病基因的表达。苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白能降解这类AHLs分子 ,进而可减弱病原菌致病基因表达产生的病害。苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa的启动子是一种不依赖芽胞形成的启动子 ,它相对于其它cry类基因的启动子有启动基因转录时间早 ,转录时间长的优点。通过重叠延伸PCR ,用杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子替换编码AiiA蛋白的基因aiiA自身的启动子 ,构建了融合基因pro3A aiiA。将融合基因装入穿梭载体pHT3 0 4的BamHI SphI位点 ,得到重组质粒pBMB686并转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,重组菌株BMB686的AiiA蛋白表达量在各个生长时期均高于对照菌株 。 展开更多
关键词 cry3Aa启动子 AIIA基因 苏云金芽胞杆菌 表达 N-乙酰高丝氨酸内酯 杀虫晶体蛋白
下载PDF
苏云金芽胞杆菌sigK基因插入失活突变体的特点及其对cry3A基因启动子活性的影响 被引量：3
5
作者 杜立新 魏娟 +4 位作者 韩丽丽 陈榛 张杰 宋福平 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1177-1184,共8页
【目的】构建苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)sigK基因插入失活突变体,分析突变体特点并明确其对cry3A基因启动子的影响。【方法】采用同源重组技术在苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigK基因中插入卡那霉素抗性基因,构建了sig... 【目的】构建苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)sigK基因插入失活突变体,分析突变体特点并明确其对cry3A基因启动子的影响。【方法】采用同源重组技术在苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigK基因中插入卡那霉素抗性基因,构建了sigK基因插入失活突变体。通过生长曲线测定、扫描电子显微镜观察晶体、芽胞形成情况和芽胞计数及SDS-PAGE等方法分析了突变体的特点;构建了遗传恢复菌株对上述性状进行了功能验证;利用启动子融合lacZ技术检测了cry3A基因启动子的转录活性。【结果】获得了苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigK基因突变体,生长曲线测定表明,突变体较出发菌株在稳定期后期生长较慢;扫描电子显微镜观察和芽胞计数分析显示,突变体丧失了形成芽胞和晶体的能力;SDS-PAGE分析表明突变体中伴胞晶体蛋白的表达量明显低于出发菌株和恢复菌株。利用载体pHT315携带sigK基因及其启动子在突变株中表达,所获得的遗传恢复菌株恢复了突变株产生芽胞和晶体的能力;sigK基因的突变可以提高cry3A基因启动子在产胞后期的转录活性,对cry3A启动子指导的Cry蛋白表达量没有显著影响。【结论】本研究证明sigK基因为苏云金芽胞杆菌芽胞形成所必需,并影响伴胞晶体蛋白的产量;sigK基因功能的丧失有利于cry3A基因启动子在产胞后期的转录。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 sigK基因突变体 cry3A基因启动子 芽胞形成
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部