转化cry1C基因对苏云金芽胞杆菌杀虫活性的影响 被引量：3

1

作者 乐超银 鲁松清 +1 位作者 刘子铎 喻子牛 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期17-20,共4页

将含基因cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1Ab、Cry1Ac和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT 80 3 1中 ,得到转化子BMBY 0 0 3。PCR和SDS PAGE分析显示 ,Cry1C可在其中... 将含基因cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1C的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因Cry1Ab、Cry1Ac和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT 80 3 1中 ,得到转化子BMBY 0 0 3。PCR和SDS PAGE分析显示 ,Cry1C可在其中正常复制、表达 ,但使受体菌部分内源质粒发生丢失。生物测定结果表明 ,转化子BMBY 0 0 3既对甜菜夜蛾有毒力 ,LC50 值为 1 1 78μL/mL ,高于出发菌株YBT 80 3 1 (LC50 1 879μL/mL) ,也对小菜蛾有毒力 ,LC50 值为 1 96 8μL/mL ,低于YBT 80 3 1 ((LC50 1 1 43 μL/mL)。表明cry1C转入后 ,提高了野生菌株YBT 80 3 1对甜菜夜蛾的毒力 ,却降低了对小菜蛾的毒力。 展开更多

关键词 cry1c基因 苏云金芽胞杆菌 杀虫活性 甜菜夜蛾 小菜蛾 基因转化

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苏云金芽孢杆菌菌株YBT1535转cry1C基因菌的构建 被引量：2

2

作者 鲁松清 刘子铎 喻子牛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期587-590,共4页

利用电脉冲将cry1C基因转入苏云金芽孢杆菌野生菌株YBT15 35 ,筛选得到 3个转化子。质粒电泳、PCR扩增及Southern杂交结果均证明 ,基因cry1C已转入菌株YBT15 35。生物测定结果表明 ,3个转化子对甜菜夜蛾的毒力比出发菌YBT15 35均有显著... 利用电脉冲将cry1C基因转入苏云金芽孢杆菌野生菌株YBT15 35 ,筛选得到 3个转化子。质粒电泳、PCR扩增及Southern杂交结果均证明 ,基因cry1C已转入菌株YBT15 35。生物测定结果表明 ,3个转化子对甜菜夜蛾的毒力比出发菌YBT15 35均有显著的提高 ,转化子YBT15 35 1和YBT15 35 3对小菜蛾和棉铃虫的生物活性与出发菌YBT15 35相近 ,而转化子YBT15 35 2则有一定幅度的提高。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 电脉冲转化 cry1c基因 杀虫剂

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B.thuringiensis穿梭载体的构建及cry1C基因的表达 被引量：2

3

作者 何翔 刘坤 +3 位作者 李冬颖 马明 耿运琪 陈启民 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第7期647-653,共7页

以pUC19为母体，克隆了Btken－Ag（B.thuringiensissubsp.kenyaeAg）的复制起始区（～1．6kb）和pUC4K的aphⅠ基因，构建成穿梭载体pHV－1。pHV－1在E.coli中经100个世代，质粒保持率在80％以上；5在Bti4Q8（B．thuringiensissubsp.isra... 以pUC19为母体，克隆了Btken－Ag（B.thuringiensissubsp.kenyaeAg）的复制起始区（～1．6kb）和pUC4K的aphⅠ基因，构建成穿梭载体pHV－1。pHV－1在E.coli中经100个世代，质粒保持率在80％以上；5在Bti4Q8（B．thuringiensissubsp.israelensis4Q8）中经40个世代，质粒保持率在80％以上。将B．licheniformis热稳定α－淀粉酶基因启动子控制下的Bt9510（B．thuringiensis9510）的crylC结构基因插入pHV－1，构建成重组质粒pHV－crylC，电激转化导入Bit4Q8。光学显微镜下观察，Bit4Q8无晶体产生；而Bit4Q8（pHV－crylC）则出现典型的菱形晶体，其晶体略小于Bt9510。生物测定结果表明表达的Cry1C蛋白对甜菜夜蛾具有一定的毒杀活性。 展开更多

关键词 穿梭载体 BT cry1c基因 生物杀虫剂 遗传改良

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抗虫基因Cry1C转化大豆的研究 被引量：3

4

作者 姚瑶 钱雪艳 +5 位作者 李闯 邢国杰 杨向东 郭东全 李启云 董英山 《安徽农业科学》 CAS 2014年第35期12461-12463,共3页

[目的]将对鳞翅目害虫具有抗性的抗虫基因Cry1C转入大豆中,获得对田间鳞翅目害虫具有抗性的大豆材料。[方法]利用农杆菌介导法将抗虫基因Cry1C转入大豆品种Williams82中,并通过Bar试纸条及PCR方法对所获得的转化苗进行鉴定。[结果]获得2... [目的]将对鳞翅目害虫具有抗性的抗虫基因Cry1C转入大豆中,获得对田间鳞翅目害虫具有抗性的大豆材料。[方法]利用农杆菌介导法将抗虫基因Cry1C转入大豆品种Williams82中,并通过Bar试纸条及PCR方法对所获得的转化苗进行鉴定。[结果]获得28株阳性大豆转化植株。[结论]初步认定Cry1C基因已整合到大豆基因组中。 展开更多

关键词 大豆 cry1c基因 农杆菌介导 抗虫

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转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测 被引量：4

5

作者 金永梅 马瑞 +1 位作者 于志晶 林秀峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期6-12,共7页

利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对... 利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对分析确定其插入位点,发现T-DNA在水稻基因组(日本晴)2号染色体上的基因间区2790685-2790589位点(GenBank登记号:NC_029257.1)。根据T-DNA插入位点,在插入位点两侧基因组区域和T-DNA左边界设计特异性引物,建立了吉生粳3号事件特异性PCR检测方法,为吉生粳3号的身份识别提供了准确、快速的检测技术手段。 展开更多

关键词 转cry1c基因抗虫水稻 旁侧序列 插入位点 事件特异性检测

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转cry1C基因抗虫稻谷对黄粉虫生长发育的影响

6

作者 王加美 葛东华 +2 位作者 陈秀萍 丁家桐 彭于发 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1190-1196,共7页

【目的】研究转cry1C基因抗虫水稻(T1C-19)稻谷对黄粉虫生长发育的影响,为转Bt基因水稻的推广和应用提供理论支持。【方法】在试验室条件下,分别用100%T1C-19稻谷、100%明恢63(MH63)稻谷、62%T1C-19稻谷、62%MH63稻谷和正常饲料饲喂黄... 【目的】研究转cry1C基因抗虫水稻(T1C-19)稻谷对黄粉虫生长发育的影响,为转Bt基因水稻的推广和应用提供理论支持。【方法】在试验室条件下,分别用100%T1C-19稻谷、100%明恢63(MH63)稻谷、62%T1C-19稻谷、62%MH63稻谷和正常饲料饲喂黄粉虫幼虫直至其化蛹,比较各处理组体重、存活率、幼虫历期、化蛹率和羽化率等检测指标。【结果】正常饲料组、62%T1C-19稻谷组和62%MH63稻谷组的黄粉虫幼虫体重几乎都显著高于100%T1C-19稻谷组和100%MH63稻谷组,但T1C-19和MH63组间差异不显著;此外,5组间的存活率、幼虫历期、化蛹率及羽化率差异均不显著。【结论】黄粉虫可通过取食转cry1C基因稻谷暴露于Cry1C蛋白中,但黄粉虫的生长发育没有受到明显的负面影响;转cry1C基因稻谷可作为饲料原料用于黄粉虫养殖。 展开更多

关键词 转cry1c基因水稻 黄粉虫 非靶标效应 安全评价

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重组酶聚合酶扩增技术检测转基因水稻中的Cry1Ab/c基因 被引量：27

7

作者 邓婷婷 黄文胜 +2 位作者 程奇 李新实 陈颖 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期187-193,共7页

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是利用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引物与模板的特异结合,以代替传统PCR热循环中的变性和复性过程的新型恒温体外核酸扩增技术。本研究基于RPA技术建立了转基因水稻Cry1Ab/c基因的检测方法,可在37... 重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是利用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引物与模板的特异结合,以代替传统PCR热循环中的变性和复性过程的新型恒温体外核酸扩增技术。本研究基于RPA技术建立了转基因水稻Cry1Ab/c基因的检测方法,可在37℃恒温条件下快速检测到转基因水稻中的Cry1Ab/c基因,具有较好的特异性,其绝对及相对检测灵敏度分别达到100个拷贝和0.1%(质量分数),适用于基层实验室及现场快速检测转Cry1Ab/c基因水稻及其制品。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增(RPA) 转基因水稻 cry1Ab/c基因 检测

原文传递

转Cry1C*基因抗虫水稻的培育 被引量：15

8

作者 于志晶 刘丽 +3 位作者 李淑芳 蔡勤安 林秀峰 马瑞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第6期702-708,共7页

水稻害虫是影响吉林省水稻产量的主要限制因素,为培育抗虫转基因水稻新品种,本研究采用农杆菌介导的遗传转化法,将人工合成的Cry1C*基因导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉利518中,共获得410个独立转化株。通过对转基因植株PCR检测,阳性... 水稻害虫是影响吉林省水稻产量的主要限制因素,为培育抗虫转基因水稻新品种,本研究采用农杆菌介导的遗传转化法,将人工合成的Cry1C*基因导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉利518中,共获得410个独立转化株。通过对转基因植株PCR检测,阳性率为67.2%;ELISA检测结果表明:不同株系Bt毒蛋白含量变化较大,变幅为0.40～4.86μg/g鲜叶重;田间抗性鉴定结果表明:2个株系表现高度抗性,且农艺性状与原品种没有显著差异。这两个高抗转基因水稻株系的获得,为进一步培育适宜于吉林省抗虫转基因新品种奠定了基础。 展开更多

关键词 cry1c＊基因 抗虫性 水稻 农杆菌介导的遗传转化

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转cry1C~*及cry2A~*基因早粳稻Bt蛋白的时空表达和抗螟虫性 被引量：8

9

作者 李荣田 王新宇 +2 位作者 田崇兵 周青 刘长华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1829-1836,共8页

早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系... 早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系种植于田间,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测转基因水稻不同生长发育阶段不同器官的、以及成熟期糙米的Bt蛋白量,采用室内离体茎秆法接虫鉴定转基因水稻的抗螟虫性。结果显示,转基因早粳稻不同抗虫基因Bt蛋白量不同, cry1C*基因总是低于cry2A*基因的蛋白质表达量;不同生长发育时期Bt蛋白量不同,叶片和茎鞘等器官的Bt蛋白量为分蘖期<抽穗期<灌浆期,幼穗或糙米等器官的Bt蛋白量为抽穗期幼穗>灌浆期幼穗>成熟期糙米;不同器官Bt蛋白量不同,高低次序在分蘖期为叶片、茎鞘,抽穗期为叶片、幼穗和茎鞘,灌浆及成熟期为叶片、茎鞘、幼穗和糙米;同一抗虫基因不同转基因品系间抽穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官Bt蛋白量及抗螟虫性、糙米Bt蛋白量等性状存在差异,抽穗期各器官Bt蛋白量与抗螟虫性及成熟期糙米Bt蛋白量之间相关不显著,不论Bt蛋白量高或低的品系均表现为高抗螟虫。转基因早粳稻营养器官生长发育前期Bt蛋白量较低、后期较高,繁殖器官生长发育早期Bt蛋白量较高、晚期较低,营养器官通常比繁殖器官的Bt蛋白量高。在本研究范围内,不同基因及不同转化事件培育的转基因水稻Bt蛋白表达量高低不同,但所有的转基因早粳稻品系均表现高抗螟虫。 展开更多

关键词 cry1c^*基因 cry2A^*基因 转基因早粳稻 BT蛋白 时空表达 抗螟虫性

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转cry1C~*基因抗虫超级粳稻田间目的基因表达及抗螟虫性研究 被引量：2

10

作者 李冬雪 田崇兵 +1 位作者 刘长华 李荣田 《中国农学通报》 2017年第36期131-138,共8页

为了研究转基因抗虫超级粳稻田间目的基因表达及抗螟虫性,将10个来自于不同独立抗性愈伤组织的转cry1C*基因抗虫超级粳稻品系种植于田间,利用实时荧光定量PCR方法检测孕穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官目的基因mRNA,利用酶联免疫吸附(ELISA... 为了研究转基因抗虫超级粳稻田间目的基因表达及抗螟虫性,将10个来自于不同独立抗性愈伤组织的转cry1C*基因抗虫超级粳稻品系种植于田间,利用实时荧光定量PCR方法检测孕穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官目的基因mRNA,利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测孕穗期叶片、茎鞘和幼穗及收获后糙米的Cry1C蛋白,利用田间目测调查二化螟危害的白穗率。结果显示,转基因超级粳稻不同品系及不同器官cry1C*基因田间表达量明显不同,cry1C*基因mRNA表达量:叶片>茎鞘>幼穗,蛋白质表达量:叶片>茎鞘>幼穗>糙米。转基因超级粳稻田间目的基因表达,在mRNA水平和蛋白质水平,不同器官间存在正相关关系,各器官Cry1C蛋白质含量和糙米Bt蛋白质含量呈正相关。在本研究范围内,不论转基因粳稻植株Cry1C蛋白质含量高或低的品系,田间均表现为高抗二化螟。培育转基因抗虫粳稻品种时,应注意对目的基因适量表达的抗虫基因型的选择。 展开更多

关键词 抗虫超级粳稻 cry1c＊基因 目的基因 基因表达 抗螟虫性 田间

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转基因抗虫水稻HD1不同生长发育阶段cry1C*基因表达量 被引量：1

11

作者 孔梦莹 张佳琦 +2 位作者 于晓晨 刘长华 李荣田 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第11期3603-3611,共9页

以水稻‘空育131’为受体,利用根瘤农杆菌介导法,创制了转cry1C*基因的抗虫水稻HD1-1等独立系。为了研究水稻HD1-1等在田间生长发育过程中cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量,将水稻HD1-1等独立系种植在田间,利用RT-qPCR方法检测分蘖期... 以水稻‘空育131’为受体,利用根瘤农杆菌介导法,创制了转cry1C*基因的抗虫水稻HD1-1等独立系。为了研究水稻HD1-1等在田间生长发育过程中cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量,将水稻HD1-1等独立系种植在田间,利用RT-qPCR方法检测分蘖期、抽穗期和灌浆期叶片、茎鞘及幼穗的cry1C*基因mRNA表达量,同时利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各器官及糙米Bt蛋白含量。分析cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间的关系,分析糙米Bt蛋白含量与生长发育时cry1C*基因表达量的关系。结果显示,不同水稻独立系cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量明显不同,叶片、茎鞘及幼穗中cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间往往呈正相关,cry1C*基因mRNA表达量和对应的Bt蛋白含量呈极显著的正相关,糙米Bt蛋白含量和各生长发育阶段各器官cry1C*基因表达量存在正相关趋势。水稻HD1 cry1C*基因表达量在不同生长发育阶段间及其和糙米Bt蛋白含量间呈正相关或正相关趋势。cry1C*基因转录水平越高,Bt蛋白含量越高。 展开更多

关键词 转基因抗虫水稻 空育131 生长发育阶段 cry1c*基因表达量 Bt蛋白含量

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农作物中Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分双重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：1

12

作者 罗建兴 刘国强 +1 位作者 其勒木格 郭梁 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第5期23-28,共6页

采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光PCR检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性。特异性检测试验中仅转基因作物(转... 采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光PCR检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性。特异性检测试验中仅转基因作物(转基因棉花、转基因水稻、转基因大豆)和阳性质粒检测出相应转基因成分,其余样品均未出现明显PCR扩增曲线;检出限结果表明,双重实时荧光PCR方法对Cry1A(c)、CP4-EPSPS基因的检出限分别为1、0.1 ng,所建立的标准曲线r^(2)值均大于0.98,具有对农作物中的转基因成分进行定量检测的能力;模拟掺假检测显示此方法可检测到1%的Cry1A(c)和5%的CP4-EPSPS转基因成分。综上所述,本试验建立的双重实时荧光PCR法适用于对Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分的快速检测和定量分析。 展开更多

关键词 转基因 cry1A(c)基因 cP4-EPSPS基因 双重实时荧光PcR 特异性 检出限 模拟掺假

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