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Polypropylene crisper and 1-MCP delay the softening,lignification and transcription levels of related enzyme genes of golden needle mushrooms(Flammulina velutipes) 被引量:6
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作者 WANG Wen-jun LI Yao +2 位作者 LI Fu-hua ZENG Kai-fang MING Jian 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第1期249-260,共12页
The fresh postharvest golden needle mushroom(Flammulina velutipes) sporocarp has a high moisture content and crisp texture, but it still has high physiological activity and respiration, leading to senescence and quali... The fresh postharvest golden needle mushroom(Flammulina velutipes) sporocarp has a high moisture content and crisp texture, but it still has high physiological activity and respiration, leading to senescence and quality deterioration.Treatments with 1-methylcyclopropene(1-MCP) and polypropylene(PP) crispers were used to study the changes of lignification and softening of F. velutipes during storage. The main findings were as follows: the crisper packaging could effectively prolong the storage time of F. velutipes;either the 1-MCP treatment, crisper packaging or the combination of the two treatments could significantly inhibit the accumulation of lignin and the decreases in the contents of cellulose and pectin, and had certain inhibitory effects on the activities of enzymes involved in lignification and softening including phenylalanine ammonia-lyase(PAL), cinnamyl alcohol dehydrogenase(CAD), cellulase(Cx), pectin methylesterase(PME) and polygalacturonase(PG). Among them, the inhibitory effect of the crisper packaging was higher than the 1-MCP treatment, while the combination of the two treatments was the best. The results of transmission electron microscopy(TEM) and scanning electron microscopy(SEM) showed that the crisper packaging in combination with the 1-MCP treatment could effectively maintain the integrity and stability of the F. velutipes cellular structure and inhibit the emergence of plasmolysis to prevent cell membrane rupture. The transcription levels showed that the crisper packaging and the combination of the 1-MCP treatment and crisper packing could effectively affect the expression of genes for enzymes related to lignification and softening of F. velutipes. In conclusion, 1-MCP and PP crispers could delay the lignification and softening of F. velutipes during storage. 展开更多
关键词 Flammulina velutipes polypropylene crisper 1-MCP softening and lignification transcription levels
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Emerging approaches and technologies in transplantation:the potential game changers 被引量:4
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作者 Anil Dangi Shuangjin Yu Xunrong Luo 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期334-342,共9页
Newly emerging technologies are rapidly changing conventional approaches to organ transplantation.In the modern era,the key challenges to transplantation include(1)how to best individualize and possibly eliminate the ... Newly emerging technologies are rapidly changing conventional approaches to organ transplantation.In the modern era,the key challenges to transplantation include(1)how to best individualize and possibly eliminate the need for life-long immunosuppression and(2)how to expand the donor pool suitable for human transplantation.This article aims to provide readers with an updated review of three new technologies that address these challenges.First,single-cell RNA sequencing technology is rapidly evolving and has recently been employed in settings related to transplantation.The new sequencing data indicate an unprecedented cellular heterogeneity within organ transplants,as well as exciting new molecular signatures involved in alloimmune responses.Second,sophisticated nanotechnology platforms provide a means of therapeutically delivering immune modulating reagents to promote transplant tolerance.Tolerogenic nanoparticles with regulatory molecules and donor antigens are capable of targeting host immune responses with tremendous precision,which,in some cases,results in donor-specific tolerance.Third,CRISPR/Cas9 gene editing technology has the potential to precisely remove immunogenic molecules while inserting desirable regulatory molecules.This technology is particularly useful in generating genetically modified pigs for xenotransplantation to solve the issue of the shortage of human organs.Collectively,these new technologies are positioning the transplant community for major breakthroughs that will significantly advance transplant medicine. 展开更多
关键词 TRANSPLANTATION Single cell sequencing crisper Cas9 NANOTECHNOLOGY
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基于Crisper的新型冠状病毒核酸检测方法在临床应用中的评价
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作者 裴兵 孙建 +2 位作者 崔倩 戚小艳 张振江 《标记免疫分析与临床》 CAS 2021年第6期1051-1054,共4页
目的建立一种快速、特异性强、灵敏度高的新型冠状病毒核酸检测方法并评价其在临床工作中的应用。方法对2020年2月至5月经过RT-PCR及CT方法临床确诊的新冠患者标本,采用Crisper方法对50例正常标本及12例确诊标本进行检测,用本方法使12... 目的建立一种快速、特异性强、灵敏度高的新型冠状病毒核酸检测方法并评价其在临床工作中的应用。方法对2020年2月至5月经过RT-PCR及CT方法临床确诊的新冠患者标本,采用Crisper方法对50例正常标本及12例确诊标本进行检测,用本方法使12例确诊标本全部进行识别并检出,而用RT-PCR方法仅能检出10例,存在2例漏检的问题。结果Crisper方法特异性为100%;灵敏度为91.3%;精密度为高值批内精密度CV为0.66%,低值批内精密度CV为1.50%,均小于5%,符合试剂批内精密度要求;线性范围的相关系数r=0.9980,符合|r|≥0.980要求;可报告阳性为Ct值<37;验证方法符合要求。结论具有成本低、可多次重复检测、方法简单、检测速度快、灵敏,最低检测极限达到10-2拷贝/μL、特异,可在短时间内通过荧光信号的变化检测到是否含有目标核酸。 展开更多
关键词 crisper RT-PCR方法 新型冠状病毒 特异性强 灵敏度
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金字塔模型在食物保鲜中应用的可行性探索
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作者 张嘉宁 袁鹏举 +2 位作者 于洋 张艺萍 杨帆 《现代食品》 2018年第12期156-160,共5页
以砂糖橘、猪肉、常温奶及熟米饭为研究对象,在石家庄、兰州及泰州3个地区通过感官评定来比较金字塔模型和保鲜盒两种方法保鲜效果的差异,探究金字塔模型保鲜食物的可行性。结果显示:泰州和兰州金字塔模型保鲜猪肉与砂糖橘感官评定分值... 以砂糖橘、猪肉、常温奶及熟米饭为研究对象,在石家庄、兰州及泰州3个地区通过感官评定来比较金字塔模型和保鲜盒两种方法保鲜效果的差异,探究金字塔模型保鲜食物的可行性。结果显示:泰州和兰州金字塔模型保鲜猪肉与砂糖橘感官评定分值高于保鲜盒;兰州金字塔模型对保鲜猪肉和砂糖橘的效果优于保鲜盒,泰州金字塔模型保鲜常温奶感官评定分值高于保鲜盒;石家庄金字塔模型保鲜熟米饭感官评定分值高于保鲜盒。金字塔模型保鲜食物具有一定的可行性,并为食物保鲜提供新思路与参考。 展开更多
关键词 金字塔模型 保鲜 保鲜盒
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Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力 被引量:3
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作者 邱嘉文 何肖龙 +7 位作者 张宝 杜蕾 曾庆 李森 熊欢欢 龙敏 罗军 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期819-823,共5页
目的建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白Muc2在鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)抑制大肠杆菌K1(Escherichia coli,E.coli k1)株E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法设计2个长20~25 bp的sg RNA分别靶向... 目的建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白Muc2在鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)抑制大肠杆菌K1(Escherichia coli,E.coli k1)株E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法设计2个长20~25 bp的sg RNA分别靶向Muc2,合成sg RNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体,转染野生型人结肠癌Ht29细胞,蛋白免疫印迹法检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后,竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠上皮中的作用。结果目的sg RNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确;稳定抑制Muc2表达的细胞株筛选成功;Muc2基因沉默后,与空白对照组相比,其表达水平明显降低,抑制率可达81%(P〈0.01);黏附侵袭实验中E44相对黏附率为72.23%(P〈0.01),相对侵袭率为81.49%(P〈0.01),益生菌LGG的抑制E44黏附和侵袭作用明显下调。结论Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力,提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一,并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。 展开更多
关键词 MUC2 LGG E.COLI K1 crisper/Cas9 HT29 侵袭
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CRISPER/Cas9系统在植物基因组定点修饰及作物遗传育种中的应用研究进展 被引量:2
6
作者 权莹 张晓娟 +2 位作者 赵辉 孙晓敏 马秀奇 《中国农学通报》 2022年第26期9-14,共6页
CRISPR/Cas9系统是一项简单、高效的基因定点编辑技术,在植物遗传改良及作物良种选育等方面具有重要的应用价值。本研究主要介绍了CRISPR/Cas9的原理及构建方法,论述了近年来CRISPR/Cas9技术在植物基因功能及基因表达调控、植物基因组... CRISPR/Cas9系统是一项简单、高效的基因定点编辑技术,在植物遗传改良及作物良种选育等方面具有重要的应用价值。本研究主要介绍了CRISPR/Cas9的原理及构建方法,论述了近年来CRISPR/Cas9技术在植物基因功能及基因表达调控、植物基因组的定向编辑以及作物分子育种中的应用及研究进展,分析了该基因编辑系统的主要影响因素及优化改进方式,探讨了该系统在应用中的问题及解决途径并对今后发展方向进行了展望,为该技术在植物基因组定点编辑及作物遗传育种等领域研究提供参考。 展开更多
关键词 crisper/Cas9 基因编辑 CRISPR/Cas9系统影响因素 分子设计育种 作物遗传育种
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聚丙烯食品保鲜盒中纳米银迁移研究 被引量:4
7
作者 马洁清 徐坚琪 +4 位作者 赵凯 关荣发 吴晓芳 卢伦 郑春翠 《安徽农业科学》 CAS 2016年第32期85-88,163,共5页
[目的]研究不同因素对聚丙烯食品保鲜盒中纳米银迁移的影响。[方法]采用电镜、马尔文粒度分布仪在不同的浸泡基质、时间和温度下对聚丙烯保鲜盒中纳米银的形态和大小分布进行研究,采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定保鲜盒中纳米银... [目的]研究不同因素对聚丙烯食品保鲜盒中纳米银迁移的影响。[方法]采用电镜、马尔文粒度分布仪在不同的浸泡基质、时间和温度下对聚丙烯保鲜盒中纳米银的形态和大小分布进行研究,采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定保鲜盒中纳米银的含量。[结果]聚丙烯保鲜盒中的纳米银在3种不同的浸泡基质(水、4%乙酸、正己烷)中均有一定的迁移量,其中在模拟油类浸泡液中检测到的纳米银含量最高,其次依次为在酸类和水类模拟液中;在相同的浸泡液条件下,保鲜盒中纳米银的迁出浓度与浸泡时间、反应温度均呈正相关。[结论]该研究可为控制食品接触材料中纳米成分的释放对人体的危害和环境的影响提供参考。 展开更多
关键词 纳米银 食品保鲜盒 迁移
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CRISPR/Cas9敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响 被引量:1
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作者 龙黎 罗新华 张茜 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第10期1163-1168,1188,共7页
目的 探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响,分析基因编辑联合传统抗病毒药物或免疫调节剂的抗病毒疗效。方法 根据HBV pre S1段设计特异性干扰片段g RNA(sg RNA-1、sg RNA-2及sg RNA-3)接入表达... 目的 探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响,分析基因编辑联合传统抗病毒药物或免疫调节剂的抗病毒疗效。方法 根据HBV pre S1段设计特异性干扰片段g RNA(sg RNA-1、sg RNA-2及sg RNA-3)接入表达载体进行转化,经DAPI染色鉴定转染、获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞;采用马酸替诺福韦(TDF)和干扰素-α(IFN-α)处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞,取上清液、采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBs Ag、HBcr Ag的含量,RT-PCR方法检测HBV DNA、pg RNA水平。结果 成功构建HBV g RNA,sg RNA-3作用最强;成功获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞,Cas9/sg RNA定位于细胞核;与对照组细胞比较,HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞HBV复制水平降低(P <0.05),TDF或IFN-α处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞能有效增强抗病毒效应(P <0.05),且IFN-α处理的细胞更能抑制HBV RNA和HBs Ag的分泌。结论 Cas9/sg RNA靶向HBV DNA切割能抑制HBV病毒的复制,传统抗病毒药物或免疫调节剂能使该作用增强。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 抗病毒治疗 crisper/Cas9 病毒复制 临床治愈 基因编辑
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Interference with the C-terminal structure of MARF1 causes defective oocyte meiotic division and female infertility in mice 被引量:1
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作者 Guangyi Cao Mingzhe Li +2 位作者 Hao Wang Lanying Shi You-Qiang Su 《The Journal of Biomedical Research》 CAS CSCD 2018年第1期58-67,共10页
Meiosis-arrest female 1(MARF1) is a recently identified key oogenic regulator essential for the maintenance of female fertility and genome integrity in mice. However, the detailed functions and the underlying mechan... Meiosis-arrest female 1(MARF1) is a recently identified key oogenic regulator essential for the maintenance of female fertility and genome integrity in mice. However, the detailed functions and the underlying mechanisms of MARF1 remain elusive. Here, in an attempt to create a mouse model expressing fluorescent protein-tagged MARF1 to facilitate further exploration of the roles of MARF1 in oocytes, we produced a Marf1-eGFP knockin(KI) mouse line in which the C-terminal structure and function of MARF1 were interfered by its fusing eGFP peptide. Using these Marfl-eGFP-KI mice, we revealed, unexpectedly, the functions of MARF1 in the control of oocyte meiotic division.We found that the Marfl-eGFP-KI females ovulated mature oocytes with severe meiotic and developmental defects,and thus were infertile. Moreover, meiotic reinitiation was delayed while meiotic completion was accelerated in the KI-oocytes, which was coincident with the increased incidence of oocyte aneuploidy. Therefore, MARF1 is indispensable for maintaining the fidelity of homolog segregation during oocyte maturation, and this function relies on its C-terminal domains. 展开更多
关键词 MARF1 meiosis oocyte aneuploidy female infertility knock in crisper/Cas9
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ROCK1基因敲除对乳腺癌细胞系迁移及侵袭的影响 被引量:3
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作者 王晓杰 滕宇 +3 位作者 顾勐 王子宇 赵晓婷 岳文涛 《癌变.畸变.突变》 CAS 2019年第3期193-197,202,共6页
目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1 敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:设计并合成靶向ROCK1 的向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列... 目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1 敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:设计并合成靶向ROCK1 的向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR单载体慢病毒上,感染并筛选稳定细胞株,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力。结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的GV392质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ROCK1 敲除的细胞株构建成功;ROCK1 基因敲除后,与对照组细胞相比,其蛋白表达缺失。划痕实验结果显示ROCK1 敲除细胞株24 h划痕愈合度为(60.600±0.047)%,对照组细胞划痕愈合度为(80.404±0.018)%,差异有统计学意义(P=0.003)。Transwell实验结果显示ROCK1 敲除细胞株在24 h的迁移细胞数为(271.3±5.0)个,对照组的迁移细胞数为(448.3±5.5)个;48 h的迁移细胞数在实验组和对照组分别为(1.7±2.9)个和(298.3±5.7)个,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:ROCK1 基因敲除可明显抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力,提示ROCK1 基因在乳腺癌侵袭和转移中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 Rho相关蛋白激酶1 CRISPR/Cas9 迁移 侵袭
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基于CRISPR/Cas9系统构建ARID2基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响 被引量:2
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作者 高庆祝 汪凯 +3 位作者 梁利 张韵致 郑亚秋 唐霓 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期850-855,共6页
目的:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)系统在SK-Hep1肝癌细胞系中构建AT富集作用域2(AT-rich interaction domain 2,ARID2)基因敲除模型,并初步观察A... 目的:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)系统在SK-Hep1肝癌细胞系中构建AT富集作用域2(AT-rich interaction domain 2,ARID2)基因敲除模型,并初步观察ARID2敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:设计并合成靶向ARID2的向导RNA(single guide RNA,sg RNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR表达载体上,转染HEK293T细胞包装慢病毒并筛选稳定细胞株,采用克隆形成、Transwell和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果:目的 sg RNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti CRISPER-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ARID2敲除的细胞株筛选成功;ARID2基因敲除后,与亲本细胞系相比,其蛋白表达缺失;克隆形成实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)培养至10 d时克隆形成数为(125.600±5.131)个,亲本细胞株克隆形成数为(69.000±5.567)个(t=12.962,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)培养至8 d时克隆形成数为(94.000±8.737)个,亲本细胞株克隆形成数为(67.000±5.292)个(t=4.635,P=0.010),差异有统计学意义。Transwell结果示ARID2敲除细胞株(1#6)在24 h的迁移细胞数为(180.000±5.542)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(90.400±5.031)个(t=20.731,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)在24 h的迁移细胞数为(138.600±5.749)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(78.400±5.703)个(t=12.891,P=0.000),差异有统计学意义。划痕实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)16 h划痕愈合度为(88.000±0.011)%,亲本细胞组划痕愈合度为(52.500±0.047)%(t=12.490,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)16 h划痕愈合度为(71.900±0.020)%,亲本细胞组划痕愈合度为(55.200±0.024)%(t=9.190,P=0.001),差异有统计学意义。结论:ARID2敲除可明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,证实ARID2作为抑癌基因参与肝癌的发生和进程。ARID2敲除细胞模型为肝癌的深入研究提供新的手段。 展开更多
关键词 AT富集作用域2 crisper/Cas9 SK-Hep1 增殖 迁移
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Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建 被引量:1
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作者 黄静 高洁 +7 位作者 夏苏苏 金志颖 康琳 高姗 杨浩 辛文文 赵宝华 王景林 《动物医学进展》 北大核心 2019年第5期13-17,共5页
应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中... 应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中,用嘌呤霉素筛选敲除Annexin A2蛋白的MDCK细胞株,并通过测序和Western blot验证敲除效果。通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的Annexin A2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。测序结果和Western blot结果表明,通过Crispr/Cas9技术成功敲除了MDCK细胞的Annexin A2基因,但细胞毒性试验结果表明,敲除Annexin A2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。结果表明,Annexin A2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体,研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法,构建的Annexin A2基因敲除的MDCK细胞也为Annexin A2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Crispr/Cas9技术 基因敲除 ANNEXIN A2 MDCK细胞系
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