人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定 被引量：91

1

作者 朱学军 曹雪涛 +5 位作者 于益芝 陈国友 万涛 马施华 唐华 章卫平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第4期302-306,共5页

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng... 树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础. 展开更多

关键词 树突状细胞 单核细胞 体外扩增 鉴定 外周血

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人外周血树突状细胞的诱导与鉴定 被引量：7

2

作者 侯治富 郭楠 +4 位作者 高申 郑德明 卜丽莎 高嵩 才华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期657-660,F0002,共5页

目的:体外诱导、培养人外周血单核细胞获得不同成熟阶段的树突状细胞(DCs)。方法:用贴壁法从健康人外周血浓缩白细胞获取单核细胞,第一阶段在GM-CSF+IL-4存在的条件下培养7 d,获得未成熟DCs;第二阶段在GM-CSF+TNF-α联合诱导下培养至14... 目的:体外诱导、培养人外周血单核细胞获得不同成熟阶段的树突状细胞(DCs)。方法:用贴壁法从健康人外周血浓缩白细胞获取单核细胞,第一阶段在GM-CSF+IL-4存在的条件下培养7 d,获得未成熟DCs;第二阶段在GM-CSF+TNF-α联合诱导下培养至14 d,获得成熟的DCs。对DCs的形态进行显微镜下观察,用流式细胞仪检测其表型,用MTT的方法对DCs的功能进行检测。结果:获得的未成熟DCs中度表达CD1a、共刺激分子,高表达HLA-DR分子,在DCs的成熟期共刺激分子、HLA-DR及CD83、CD25分子均高度表达,刺激同种异型T淋巴细胞增殖的能力强。结论:成功地建立了诱导人外周血单核细胞获得不同发育阶段DCs的方法,并获得了大量纯度较高的DCs。 展开更多

关键词 树突细胞 细胞 培养的 诱导 共刺激分子

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人外周血未成熟树突状细胞的体外扩增和鉴定及抗成熟特性的研究 被引量：7

3

作者 姜艳 彭毅志 袁志强 《中国医师杂志》 CAS 2005年第3期289-292,共4页

目的　建立体外诱导、扩增具有抗成熟特性的未成熟树突状细胞 (DC)的方法。方法　从健康成人外周血分离单个核细胞 (PBMC) ,以rhGM -CSF和rhIL -4体外培养 9d ,于第 7d加入rhIL -10 ,收集悬浮细胞 ,电镜观察形态 ,流式细胞仪测定细胞表... 目的　建立体外诱导、扩增具有抗成熟特性的未成熟树突状细胞 (DC)的方法。方法　从健康成人外周血分离单个核细胞 (PBMC) ,以rhGM -CSF和rhIL -4体外培养 9d ,于第 7d加入rhIL -10 ,收集悬浮细胞 ,电镜观察形态 ,流式细胞仪测定细胞表型 ,并进行混合淋巴细胞反应 (MLR) ,观察其刺激同种异体未致敏T淋巴细胞增殖的能力。将培养的细胞分别用LPS、TNF -α继续刺激 2d ,再进行MLR ,观察结果。结果　PBMC经rhGM -CSF +rhIL -4诱导并经rhIL -10处理后获得的细胞具有典型的DC形态特征 ,表达DC的特异性标志CD1a ,不表达DC的成熟标志CD83 ,与对照组相比其共刺激分子CD86、CD40 的表达显著下降 ,MLR示不能刺激同种异体T细胞增殖。经LPS、TNF -α刺激后亦不能刺激T细胞增殖。结论　与rhIL -10联合培养可获得具有抗成熟特性的未成熟DC ,这对于诱导大面积深度烧伤病人的异体皮移植免疫耐受具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 人外周血 未成熟树突状细胞 DC 刺激 表达 PBMC GM—CSF 成熟特性 悬浮细胞 体外扩增

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人外周血中树突状细胞的诱导及鉴定 被引量：13

4

作者 郭建巍 蔡美英 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期68-71,150,共5页

目的　从健康人外周血中诱导高纯度树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法　用贴壁法从健康人外周血获取单核细胞 ,对传统的诱导方法加以改进 ,经 GM- CSF(10 0 ng/ ml)和 IL- 4(5 0 0 U/ m l)持续诱导 7天 ,在此期间不再补充新的细胞... 目的　从健康人外周血中诱导高纯度树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法　用贴壁法从健康人外周血获取单核细胞 ,对传统的诱导方法加以改进 ,经 GM- CSF(10 0 ng/ ml)和 IL- 4(5 0 0 U/ m l)持续诱导 7天 ,在此期间不再补充新的细胞因子、新鲜培养基和促成熟因子 ,以获取高纯度 DC。结果　经上述方法处理后 ,从健康人外周血中诱导出了大量高纯度 DC,其能高表达 HL A- 、 类分子、共刺激分子和粘附分子 ,显示出成熟 DC的特征。这些 DC能强烈诱导同种异体淋巴细胞的增埴 ,其内吞能力在第 3天达最高 ,之后明显下降。结论　本研究所建立的从外周血获取大量成熟 DC的方法经济、简便 ,为 展开更多

关键词 树突状细胞 单核细胞 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 人白细胞介素4 HLA-I HLA-Ⅱ类分子 共刺激分子 外周血

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协同刺激分子PD-L1、B7-H3与B7-H4在卵巢癌中的表达及其意义 被引量：8

5

作者 王丽 吴昌平 蒋敬庭 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2013年第7期663-667,共5页

协同刺激分子PD-L1、B7-H3与B7-H4可与T细胞及其受体结合并抑制T细胞的增殖和过度活化,在细胞免疫应答过程中起重要的调控作用,已被多项研究证明与肿瘤的免疫原性及肿瘤的发生、发展密切相关。这3种分子在正常卵巢组织中均不表达,而在... 协同刺激分子PD-L1、B7-H3与B7-H4可与T细胞及其受体结合并抑制T细胞的增殖和过度活化,在细胞免疫应答过程中起重要的调控作用,已被多项研究证明与肿瘤的免疫原性及肿瘤的发生、发展密切相关。这3种分子在正常卵巢组织中均不表达,而在卵巢癌组织中呈不同程度的高表达,它们可能在促进卵巢癌的发生、转变及病情进展过程中起重要作用,研究其作用机制对卵巢癌的早期诊断及靶向治疗有一定的意义。 展开更多

关键词 卵巢癌 协同刺激分子 PD-L1 B7-H3 B7-H4

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共刺激因子B7同源体4在肺腺癌组织中的表达及临床意义 被引量：4

6

作者 杨成轩 贾良 +2 位作者 孙艳霞 秦琛 原翔 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第9期833-836,共4页

目的分析共刺激因子B7同源体4(B7H4)在肺腺癌组织中的表达及临床意义。方法选择2012年1月至2012年12月河南科技大学第一附属医院手术切除的100例肺腺癌患者癌组织及配对的癌旁组织(距肿瘤组织边缘>5cm)石蜡包埋标本为观察对象,采用... 目的分析共刺激因子B7同源体4(B7H4)在肺腺癌组织中的表达及临床意义。方法选择2012年1月至2012年12月河南科技大学第一附属医院手术切除的100例肺腺癌患者癌组织及配对的癌旁组织(距肿瘤组织边缘>5cm)石蜡包埋标本为观察对象,采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织及癌旁组织中B7H4蛋白表达,分析B7H4蛋白表达与肺腺癌患者临床病理特征的关系;采用COX回归分析各因素对肺腺癌患者预后的影响,采用Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验分析B7H4蛋白表达与患者生存时间的关系。结果肺腺癌组织及癌旁组织中均可见细胞膜及细胞质出现棕黄色颗粒,B7H4蛋白呈阳性表达。肺腺癌组织中B7H4蛋白表达免疫组织化学总评分及高、中、低分化癌组织B7H4表达免疫组织化学评分均显著高于癌旁组织(P<0.05);随着癌组织分化程度的降低,B7H4蛋白表达免疫组织化学评分逐渐升高(P<0.05)。B7H4蛋白表达与肺腺癌患者分化程度、淋巴结转移、TNM分期和5a生存情况有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、吸烟及饮酒无关(P>0.05)。淋巴结转移、TNM分期及B7H4蛋白表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。B7H4蛋白表达阳性和B7H4蛋白表达阴性患者5a生存率分别为2.17%和27.78%,B7H4蛋白表达阳性患者5a生存率低于B7H4蛋白表达阴性患者(χ^2=31.020,P<0.05)。结论B7H4蛋白高表达可能促进了肺腺癌的发生、发展,抑制B7H4蛋白表达可能是肺腺癌靶向治疗的潜在靶点之一。 展开更多

关键词 肺腺癌 共刺激分子 B7同源体4 预后

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共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建 被引量：2

7

作者 冯洁 王光凤 +2 位作者 孙强 邢华 李厚达 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期17-20,共4页

以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B 7-H 1基因。按常规方法克隆进pEF 6V 5H is A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48 h后进行间接免疫荧光试验,72 h后用B lastic id in进行筛选,... 以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B 7-H 1基因。按常规方法克隆进pEF 6V 5H is A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48 h后进行间接免疫荧光试验,72 h后用B lastic id in进行筛选,挑选出能稳定表达B 7-H 1的细胞株。结果表明:成功地克隆小鼠B 7-H 1基因并构建了用于表达B 7-H 1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经W estern-b lotting检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B 7-H 1基因。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 共刺激分子 B7-H1基因 真核表达

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人4-1BBL基因重组腺病毒载体的构建及其在HEK293细胞的表达

8

作者 杨明花 王帅 +2 位作者 田昕 王扬 隋承光 《解剖科学进展》 CAS 2011年第5期445-449,共5页

目的体外构建含有人4-1BBL基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法设计一对含有SfiI酶切位点的4-1BBL基因上下游引物,以质粒pCR4-TOPO-4-1BBL为模板,通过PCR扩增获得4-1BBL基因全序列。片段回收后经酶切处理,连接到... 目的体外构建含有人4-1BBL基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法设计一对含有SfiI酶切位点的4-1BBL基因上下游引物,以质粒pCR4-TOPO-4-1BBL为模板,通过PCR扩增获得4-1BBL基因全序列。片段回收后经酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-4-1BBL。经SfiI酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-4-1BBL病毒质粒,PCR鉴定正确后,经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-4-1BBL,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测目的基因人4-1BBL的表达。结果酶切鉴定和序列分析证实,重组腺病毒质粒含有人4-1BBL全长cDNA编码序列,病毒滴度为1.2×1010pfu/mL。转染HEK293细胞后荧光显微镜下观察到GFP的表达,Western blot检测可见4-1BBL蛋白的正确表达。结论人4-1BBL基因重组腺病毒载体的成功构建和在HEK293细胞中的表达,为下一步将其应用于前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 4-1BBL 腺病毒 基因表达 共刺激分子

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慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86及其受体CD28的表达

9

作者 周永列 邱莲女 +3 位作者 陈永健 李洪波 林惠君 刘建栋 《检验医学》 CAS 北大核心 2008年第3期263-267,共5页

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86及其受体CD28与其病情状态、乙型肝炎病毒复制的关系。方法用流式细胞术检测了24名健康体检者和92例慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86、CD28的表达和CD8+CD28+、CD8+CD28-亚群淋巴细胞,并与... 目的研究慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86及其受体CD28与其病情状态、乙型肝炎病毒复制的关系。方法用流式细胞术检测了24名健康体检者和92例慢性乙型肝炎患者外周血CD80、CD86、CD28的表达和CD8+CD28+、CD8+CD28-亚群淋巴细胞,并与病毒载量和乙型肝炎e抗原(HBeAg)进行相关分析。结果慢性乙型肝炎CD80和CD86表达明显高于正常对照组和乙型肝炎病毒携带组(P<0.01);肝炎后肝硬化组明显高于慢性乙型肝炎组(P<0.05);慢性乙型肝炎轻、中、重度3组间差异也有统计学意义。慢性乙型肝炎组CD28的表达明显低于正常对照组和乙型肝炎病毒携带组(P<0.05)。病毒载量高低和HBeAg是否阳性与外周血CD80、CD86、CD28及CD8+CD28+和CD8+CD28-亚群淋巴细胞差异无统计学意义。结论CD80、CD86及受体CD28可能在慢性乙型肝炎免疫损伤过程中起重要作用,但与血清中病毒载量的变化和HBeAg阳性与否无关。 展开更多

关键词 CD80 CD86 CD28 共刺激分子 慢性乙型肝炎

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共刺激分子配体B7-DC基因真核表达载体和转基因细胞的构建

10

作者 岳挺 孙强 +4 位作者 章蓉 曹慧 刘进 董娟 李厚达 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期933-936,共4页

目的:克隆小鼠B7-DC基因,并构建含该基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,证明该基因在CHO细胞中的表达方式,为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础。方法:从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-DC编码区片段。按常规方法... 目的:克隆小鼠B7-DC基因,并构建含该基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,证明该基因在CHO细胞中的表达方式,为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础。方法:从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-DC编码区片段。按常规方法克隆进pEF6V5His载体中,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48小时后进行间接免疫荧光实验,72小时后用blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-DC的细胞株。结果:已成功克隆小鼠B7-DC基因并构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体,经间接免疫荧光实验(IFA)证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经Western blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-DC基因。结论:构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,并能在CHO细胞中稳定表达目的基因,为该基因功能的后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 共刺激分子 B7-DC 真核表达

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小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究 被引量：4

11

作者 张颖 徐开林 +1 位作者 潘秀英 鹿群先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期25-29,共5页

目的 :为了探讨体外转录法合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)对人淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因表达和功能的影响。方法 :设计并合成 3条siRNA(siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3) ,在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞。于转染后 2 ... 目的 :为了探讨体外转录法合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)对人淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因表达和功能的影响。方法 :设计并合成 3条siRNA(siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3) ,在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞。于转染后 2 4、4 8、72小时收集细胞 ,用半定量RT PCR方法检测CD2 8mRNA的变化 ;流式细胞仪检测CD2 8表达的变化。结果 :体外合成的 3条siRNA通过脂质体转染淋巴细胞后 ,均能不同程度地抑制共刺激分子CD2 8的表达。转染后 4 8小时的流式细胞仪检测显示siRNA 1、siRNA 2和siRNA 3组的CD2 8表达抑制率分别为 2 2 10 %± 1 6 3%、73 5 0 %± 1 0 2 %和 4 2 90 %± 0 89% ,以siRNA 2的CD2 8抑制作用最强。半定量RT PCR检测显示siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3转染后淋巴细胞的CD2 8mRNA均受到不同程度的抑制 ,其中siRNA 2组的抑制作用最明显 (74 10 %± 1 6 5 % )。结论 :siRNA可特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因的转录和表达 ,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受及防治GVHD方面的应用提供了理论和实验基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 小干扰RNA 淋巴细胞 CD28共刺激分子

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B7H3和c-Cbl基因在多发性骨髓瘤中的表达水平及临床意义 被引量：1

12

作者 王珏 徐桂珍 熊暮珺 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第20期2535-2540,共6页

目的探讨共刺激因子B7同源体3(B7H3)和泛素连接酶c(c-Cbl)在多发性骨髓瘤(MM)中的表达水平及临床意义。方法选取该院2017年1月至2018年9月收治的92例MM患者纳入MM组。选取90例同期同年龄层来该院体检的健康者纳入对照组。采用实时荧光... 目的探讨共刺激因子B7同源体3(B7H3)和泛素连接酶c(c-Cbl)在多发性骨髓瘤(MM)中的表达水平及临床意义。方法选取该院2017年1月至2018年9月收治的92例MM患者纳入MM组。选取90例同期同年龄层来该院体检的健康者纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应测定MM组和对照组血清B7H3和c-Cbl的表达水平。通过Pearson相关分析B7H3和c-Cbl的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同B7H3和c-Cbl表达水平患者的生存情况。通过Cox回归模型分析患者预后的影响因素。结果MM组血清B7H3表达水平较对照组升高,而c-Cbl表达水平较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。MM患者血清B7H3表达水平与c-Cbl表达水平呈负相关(r=-0.818,P<0.05)。不同分化程度和国际分期系统(ISS)分期MM患者血清B7H3、c-Cbl表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B7H3高表达组治疗有效率较B7H3低表达组降低,而c-Cbl高表达组治疗有效率较c-Cbl低表达组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。B7H3高表达组3年总生存率较B7H3低表达组降低,而c-Cbl高表达组3年总生存率较c-Cbl低表达组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,ISS分期为Ⅱ、Ⅲ期,分化程度为中、高分化,B7H3≥3.52,以及c-Cbl≤0.73是影响MM患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论MM患者血清B7H3水平升高、c-Cbl水平降低,且均与分化程度和ISS分期有关。B7H3水平升高和c-Cbl水平降低时,不仅降低了MM患者的治疗有效率,更降低了MM患者的生存率,对临床进行针对性干预治疗具有重要指导意义。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 共刺激因子B7同源体3 泛素连接酶c 预后

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小干扰RNA对淋巴细胞CD40表达的抑制作用

13

作者 张震宇 张志春 +1 位作者 刘伟 毕郑钢 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期148-151,共4页

目的探讨体内转录法合成的小干扰RNA（siRNA）对淋巴细胞共刺激分子CD40基因表达的影响。方法设计并合成4条siRNA（si40-1、si40-2、si40-3、si40-4），在阳离子脂质体的介导下转染SD大鼠淋巴细胞。于转染48h收集细胞，半定量RT-PCR方... 目的探讨体内转录法合成的小干扰RNA（siRNA）对淋巴细胞共刺激分子CD40基因表达的影响。方法设计并合成4条siRNA（si40-1、si40-2、si40-3、si40-4），在阳离子脂质体的介导下转染SD大鼠淋巴细胞。于转染48h收集细胞，半定量RT-PCR方法检测CD40mRNA，流式细胞仪检测CD40表达。结果流式细胞仪检测显示，si40-1、si40-2、si40-3、si40-4组的CD40表达抑制率分别为（21．10±1．54）％、（74．40±1．03）％、（41．80±0．86）％、（36．02±0．76）％，均明显高于空白对照组[（3．01±0．82）%]（P〈0．01），其中以si40-2的CD40抑制作用最强。半定量RT-PCR检测显示，与空白对照组比较．4组siRNA转染后淋巴细胞CD40mRNA均受到明显抑制伊〈0．01）．其中si40-2组的抑制作用最明显。结论sIRNA可特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD40基因的转录和表达，从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受及防治移植物抗宿主疾病（GVHD）方面的应用提供了理论和实验基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 淋巴细胞 CD40共刺激分子

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