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常规和巢式PCR对柑橘黄龙病菌的检测灵敏度比较 被引量:27
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作者 鹿连明 胡秀荣 +2 位作者 张利平 黄振东 陈国庆 《热带作物学报》 CSCD 2010年第8期1280-1287,共8页
根据柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)病菌16SrDNA、16S/23S核糖体基因间隔区(ribosomal intergenic region,RIR)、核糖体蛋白β操纵子(β-operon)和外膜蛋白(out membrane protein,OMP)基因序列设计了8对引物,通过常规和巢式PCR... 根据柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)病菌16SrDNA、16S/23S核糖体基因间隔区(ribosomal intergenic region,RIR)、核糖体蛋白β操纵子(β-operon)和外膜蛋白(out membrane protein,OMP)基因序列设计了8对引物,通过常规和巢式PCR方法对各引物的检测灵敏度进行了比较。结果表明,不同引物的检测灵敏度不同。对于上述任何基因,巢式PCR的灵敏度均比常规PCR至少高103倍;对于同一种基因,扩增短片段的引物比扩增长片段的引物灵敏度高或相当;在扩增产物大小相同时,用以扩增核糖体蛋白β操纵子基因的引物较其他三种稍高。对不同症状柑橘样品的检测进一步验证了该结果。因此,对于柑橘黄龙病的检测,可优先考虑使用巢式PCR方法,若使用常规PCR,则宜选用具有高灵敏度的扩增小片段引物。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 常规pcr 巢式pcr 灵敏度
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菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较 被引量:15
2
作者 徐丽 蔡俊鹏 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期51-55,共5页
为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法 ,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因 ,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株 ,并和常规PCR方法比较 ,初步建立了菌落PCR技术 ;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照 ,以本实... 为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法 ,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因 ,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株 ,并和常规PCR方法比较 ,初步建立了菌落PCR技术 ;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照 ,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象 ,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较 ,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性 .通过比较 ,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致 。 展开更多
关键词 菌落pcr 常规pcr tdh基因 tlh基因
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非洲猪瘟病毒常规PCR及Real-time PCR检测方法的建立 被引量:22
3
作者 张泉 朱鸿飞 孙怀昌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期458-461,共4页
根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因的核苷酸序列,设计并合成引物以及荧光标记的TaqMan探针,以含P72基因的重组质粒作为阳性模板,用于常规PCR和Real-time PCR方法的建立,结果表明常规PCR的检测灵敏度是600个拷贝... 根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因的核苷酸序列,设计并合成引物以及荧光标记的TaqMan探针,以含P72基因的重组质粒作为阳性模板,用于常规PCR和Real-time PCR方法的建立,结果表明常规PCR的检测灵敏度是600个拷贝的病毒核酸分子,Real-time PCR的检测灵敏度是20个拷贝的病毒核酸分子,两种PCR检测方法均具有特异性强、简单快速的优点。可以用于出入境检验检疫部门对非洲猪瘟病毒的快速检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 常规pcr REAL-TIME pcr
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三种呼吸道病毒实验室检测方法比较 被引量:14
4
作者 李爱华 张铁钢 +4 位作者 石伟先 崔淑娟 陈萌 吴疆 黄芳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期541-544,共4页
目的在3种呼吸道多病原检测方法中筛选出敏感的实验室检测方法。方法以73份上呼道感染病例咽拭子标本作为检测对象,利用3种呼吸道多病原病毒检测方法,对17种呼吸道病毒检测指标进行平行检测,根据不同呼吸道病毒检测指标检出率,评价... 目的在3种呼吸道多病原检测方法中筛选出敏感的实验室检测方法。方法以73份上呼道感染病例咽拭子标本作为检测对象,利用3种呼吸道多病原病毒检测方法,对17种呼吸道病毒检测指标进行平行检测,根据不同呼吸道病毒检测指标检出率,评价3种试剂检测效果。结果自建RT—PCR及PCR检测方法共检出56个阳性指标,市售多重RT-PCR检测试剂盒共检出41个阳性指标,市售多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒共检出87个阳性指标。结论多重实时荧光RT—PCR检测试剂盒具有更高的检出率,可用于呼吸道多病原病毒的实验室检测。 展开更多
关键词 呼吸道病毒 普通pcr 多重RT-pcr 多重实时荧光RT-pcr
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利用常规PCR和实时荧光定量PCR检测杨梅凋萎病菌 被引量:15
5
作者 任海英 戚行江 +1 位作者 梁森苗 郑锡良 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-10,共10页
凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspo-ra),本研究开发了常规PCR和SYBRGreen实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.micros-pora(JN... 凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspo-ra),本研究开发了常规PCR和SYBRGreen实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.micros-pora(JN861776)的ITSl-5.8S rDNA-ITS2序列的相同部分设计引物对(PvmlL/PvmlR)。该引物对利用常规PCR技术能特异性扩增出杨梅凋萎病菌188bp的目标产物,而对照菌株则呈阴性。该常规PCR体系能够检测人工接种后21d和田间自然发病的有病症杨梅组织中的凋萎病菌。检测下限是0.6×10^5拷贝数。利用PvmlL/PvmlR进行SYBRGreen实时荧光定量PCR,检测灵敏度是常规PCR的100倍,检测下限是0.6×10^3拷贝数,能够检测出人工接种及田间已经感染但尚未表现症状的杨梅组织中的凋萎病菌。这两项技术,简单、快速、灵敏.特异性强.可以应用于杨梅凋萎病的诊断和苗木检疫。 展开更多
关键词 杨梅 凋萎病菌 常规pcr SYBR Green实时荧光定量pcr 分子检测
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三种分子检测体系的比较及柑橘果园黄龙病监测 被引量:13
6
作者 林亚玉 殷幼平 +1 位作者 陈世钦 王中康 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期503-507,共5页
为了评价3种PCR分子检测体系对柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)大田诊断效果,综合比较了常规PCR、巢式PCR和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(SG Ⅰ-qPCR)方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度、特异性和准确度等参数,并用SYBR Green Ⅰ荧光定... 为了评价3种PCR分子检测体系对柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)大田诊断效果,综合比较了常规PCR、巢式PCR和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(SG Ⅰ-qPCR)方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度、特异性和准确度等参数,并用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和巢式PCR监测广西柑橘园疑似HLB样品425个,比较了2种检测体系的阳性检出率。基于CQULA04F/CQULA04R引物对的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR的灵敏度可达10 ag/μL;而巢式PCR灵敏度为100 ag/μL,巢式PCR较常规PCR检测灵敏度高104倍。疑似样品的HLB病原SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和巢式PCR检出率分别为46.6%、40.0%。各检测体系的灵敏性、特异性、符合度依次为SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR>巢式PCR>常规PCR。研究表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR可作为果园大规模HLB早期诊断和监测的首选,而在缺乏定量检测仪器时,巢式PCR也可用于HLB的检测,但需注意避免空气污染导致的假阳性。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 常规pcr 巢式pcr SYBR Green Ⅰ荧光定量pcr
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三种PCR方法检测柑橘黄龙病菌的效果比较 被引量:11
7
作者 程保平 彭埃天 +2 位作者 宋晓兵 凌金锋 陈霞 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期106-110,共5页
为了比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现:3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PC... 为了比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现:3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。运用3种检测方法对广东5个柑橘品种上的189个黄龙病疑似病样进行检测,结果发现:黄龙病检出率依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。研究表明:常规PCR适合以较低成本大规模检测黄龙病;实时荧光定量PCR具有最大的检测灵敏度;巢式PCR检测技术同时具有前两者的一些优点,但操作较复杂,适合技术熟练的研究者使用。 展开更多
关键词 柑橘黄龙 病常规pcr 巢式pcr 实时荧光定量pcr 比较研究
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实时荧光定量PCR法检测十字花科细菌性黑斑病菌 被引量:11
8
作者 王道泽 张莉丽 +1 位作者 陶中云 谢关林 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期559-566,共8页
为有效防控我国的检疫性有害生物十字花科细菌性黑斑病菌Pseudomonas syringae pv.maculicola在国内的传播与蔓延,通过设计1对特异性引物3539,利用132株靶标和非靶标菌为模板进行PCR扩增,建立了实时荧光定量PCR法,并进行了模拟种子带菌... 为有效防控我国的检疫性有害生物十字花科细菌性黑斑病菌Pseudomonas syringae pv.maculicola在国内的传播与蔓延,通过设计1对特异性引物3539,利用132株靶标和非靶标菌为模板进行PCR扩增,建立了实时荧光定量PCR法,并进行了模拟种子带菌试验。结果显示,引物3539为只针对十字花科细菌性黑斑病菌扩增出的特异性产物;在模拟种子带菌检测中,常规PCR对菌悬液的检测限为10~5CFU/m L,实时荧光定量PCR的检测限为10~3CFU/m L,其中10~8CFU/m L菌液的Ct值最低,为22.90,10~3CFU/m L菌液的Ct值最高,为35.73,且不同浓度菌液间的Ct值均有显著差异;不同带菌率模拟种子的检测结果表明,常规PCR和实时荧光定量PCR能检测到的带菌率分别为0.5%和0.1%。研究表明,实时荧光定量PCR法不仅可用于病种的检测,也可用于病害的早期诊断。 展开更多
关键词 十字花科黑斑病菌 常规pcr 实时荧光定量pcr 种子检测
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转基因植物中标记基因定性PCR检测方法研究 被引量:10
9
作者 岳运锋 吴刚 +1 位作者 武玉花 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期280-289,共10页
为了建立以标记基因为检测靶标的高效定性检测方法,本研究系统地分析了目前申请商业化的转基因植物中标记基因的应用频率,选取了应用频率高或在未来应用潜力大的标记基因neomycin phosphotransferaseII(NPTII)、phosphinothricin acetyl... 为了建立以标记基因为检测靶标的高效定性检测方法,本研究系统地分析了目前申请商业化的转基因植物中标记基因的应用频率,选取了应用频率高或在未来应用潜力大的标记基因neomycin phosphotransferaseII(NPTII)、phosphinothricin acetyltransferase(PAT)、5-enolpyrul-shikimate-3-phosphate synthase(CP4-EPSPS)、phosphinothricin acetyltransferase(bar)、hygromycin phosphotransferase II(HPTII)、β-glucuronidase(GUS)和phospho-mannose isomerase(PMI)作为检测靶标,建立了这七个基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。该研究建立的普通PCR方法和实时荧光PCR方法特异性强、灵敏度高、重现性好,适用于农产品中转基因成分的大规模筛查检测,而且应用实时荧光PCR方法可大大提高检测效率,降低检测过程中样品交叉污染和环境污染的几率。 展开更多
关键词 标记基因 筛查检测 普通pcr 实时荧光pcr
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3种分子生物学方法检测金黄色葡萄球菌的比较研究 被引量:8
10
作者 唐梦君 周倩 +7 位作者 张小燕 张静 唐修君 蒲俊华 陆俊贤 顾荣 陈大伟 高玉时 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第6期2247-2251,共5页
目的比较常规聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对金黄色葡萄球菌的检测效果。方法以金黄色葡萄球... 目的比较常规聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对金黄色葡萄球菌的检测效果。方法以金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)标准菌株(ATCC6538)DNA为模板,以耐热核酸酶(Nuc)基因为靶标,采用常规PCR、qPCR和LAMP对其进行扩增并比较其检测灵敏度,同时对鸡蛋中金黄色葡萄球菌的检出率进行比较。结果常规PCR对S.aureus的检测灵敏度为400个基因拷贝数,低于实时荧光定量PCR和LAMP的40个基因拷贝数的检出限。在实际样品检测中常规PCR对50份鸡蛋外壳样品中S.aureus的检出率为6%,qPCR和LAMP的检出率分别为10%,而在鸡蛋内容物中均未检测到。结论 3种检测方法检测S.aureus均具有较高的灵敏度,但常规PCR的灵敏度低于qPCR和LAMP检测方法,qPCR需要昂贵的仪器,不适合基层现场应用,而LAMP方法简单、快捷,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 常规pcr 实时荧光定量pcr 环介导等温扩增技术
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柑橘多个品种和多个部位中黄龙病菌的检测与调查 被引量:8
11
作者 程保平 鹿连明 +3 位作者 彭埃天 赵弘巍 宋晓兵 陈霞 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期69-72,共4页
探索黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位中的分布情况,可为研究该菌在植株内的侵染扩散奠定基础;调查多个果园的柑橘植株感染黄龙病的情况,可为病害防控提供科学依据。通过常规和巢式PCR检测了黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位... 探索黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位中的分布情况,可为研究该菌在植株内的侵染扩散奠定基础;调查多个果园的柑橘植株感染黄龙病的情况,可为病害防控提供科学依据。通过常规和巢式PCR检测了黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位中的存在情况,并进一步调查了龙门、阳春、肇庆、云浮等地柑橘园中的柑橘植株感染黄龙病的情况。结果发现:在砂糖橘、贡柑、甜橙、脐橙、马水橘和春甜桔中,黄龙病阳性检测率较高,而在佛手和粗柠檬中,黄龙病阳性检测率较低。在染病的植株的根茎花果叶根中均可检测到黄龙病菌,但黄龙病菌在植株内的分布并不均匀。此外,研究发现,失管果园和附近的柑橘植株携菌率很高,而老病树挖除后补栽的一些小柑橘苗的携菌率也很高。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 常规pcr 巢式pcr 不同柑橘品种 植株不同部位 黄龙病发生调查
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美国进境樱桃果实中梨火疫病菌的检测 被引量:6
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作者 尚琳琳 周国梁 +3 位作者 仇书红 陈仲兵 徐殿胜 易建平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期441-446,共6页
为了筛选快速、灵敏的梨火疫病菌检测方法,利用常规PCR、套式PCR和实时荧光PCR方法分别对美国进境的326批樱桃果实中梨火疫病菌进行检测。结果显示,3种PCR方法的检出率不同,不同引物或探针的检出率也存在差异。在常规PCR中,引物Ams3/Am... 为了筛选快速、灵敏的梨火疫病菌检测方法,利用常规PCR、套式PCR和实时荧光PCR方法分别对美国进境的326批樱桃果实中梨火疫病菌进行检测。结果显示,3种PCR方法的检出率不同,不同引物或探针的检出率也存在差异。在常规PCR中,引物Ams3/Ams4c、P29A/P29B和PEANT1/PEANT2的检出率分别为35.28%、24.85%和16.87%;单管套式PCR和套式PCR的检出率分别为23.01%和50.61%;4种实时荧光PCR的检出率分别为17.48%(探针PA)、32.21%(探针Ams)、29.14%(探针ITS)和23.93%(SYBR GreenⅠ)。在所有试验方法中由引物P29A/P29B和PEANT1/PEANT2组成的套式PCR的检出率最高。检测结果证实了进境樱桃果实中存在梨火疫病菌DNA,套式PCR和常规PCR(引物Ams3/4c)可用于进境樱桃样品中梨火疫病菌的常规检测。 展开更多
关键词 梨火疫病菌 樱桃果实 常规pcr 套式pcr 实时荧光pcr
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柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化
13
作者 谢帆 龚顺 +8 位作者 王泽琼 肖玉雄 杜志强 仝铸 何秀娟 邱文明 孙中海 潘志勇 肖翠 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期234-246,共13页
柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害,目前没有可用的有效药剂和抗病品种,分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价,针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因,构建质粒标准品并筛选适用于... 柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害,目前没有可用的有效药剂和抗病品种,分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价,针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因,构建质粒标准品并筛选适用于绝对定量PCR的最佳质粒。结果表明,使用Es Taq MasterMix对感染Candidatus Liberibacter asiaticus(C Las)的柑橘样品进行常规PCR检测时,在评价的16对引物中,OI1/OI2c、Las606/LSS和HLBF468/R877灵敏度最高,推荐同时使用检测黄龙病菌含量低的样品;各组巢式PCR检测引物有其适用扩增体系,部分引物用Es Taq MasterMix扩增时出现非特异性扩增,F1/B1→F3/B3则适用Es Taq MasterMix体系,且最高可稳定特异检出10^(5)倍稀释感染C Las柑橘总DNA样品(2×10^(-3) ng/μL),是灵敏度最高的引物组,OI1/OI2c→S3/S4在Es Taq MasterMix和Ex Taq DNA聚合酶体系中均可稳定特异检出104倍稀释感染C Las柑橘总DNA样品(2×10^(-2) ng/μL),是适用扩增体系最广的引物组;构建的5个绝对定量PCR质粒标准品中,pnrdB83扩增效率最接近100%,且在2次重复试验中波动最小,稳定性最强,并且作为标准品对黄龙病待测样品进行绝对定量时,各样品在2次重复试验中的拷贝数差值最小,是本研究筛选的最佳质粒。本研究的结果将为柑橘黄龙病菌的定性和定量分子检测提供参考。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 常规pcr 巢式pcr 绝对定量pcr 引物评价
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肝素钠中猪、牛及羊源性成分的PCR检测 被引量:8
14
作者 王自强 何素婷 +1 位作者 邵泓 陈钢 《中国药师》 CAS 2015年第9期1506-1511,共6页
目的:采用常规PCR及实时荧光PCR方法检测肝素钠粗品及原料药中的猪、牛、羊源性成分。方法:利用土壤基因组DNA提取纯化试剂盒从肝素钠粗品及原料药中提取残留核酸,以其为模板,通过常规PCR及实时荧光PCR法进行动物源性成分鉴定。以提取... 目的:采用常规PCR及实时荧光PCR方法检测肝素钠粗品及原料药中的猪、牛、羊源性成分。方法:利用土壤基因组DNA提取纯化试剂盒从肝素钠粗品及原料药中提取残留核酸,以其为模板,通过常规PCR及实时荧光PCR法进行动物源性成分鉴定。以提取猪肝、牛心、羊肝的DNA为对照品,验证所建立的常规PCR法及实时荧光PCR法的特异性及灵敏度,并用以上两种方法对3批肝素钠粗品及4批肝素钠原料药进行动物源性成分鉴定。结果:采用的两种PCR方法对猪、牛、羊源性成分的鉴定具有特异性,且灵敏度分别达到pg级及10-1pg级。通过土壤基因组DNA提取纯化试剂盒成功从肝素钠粗品及原料药中提取获得适用于PCR反应的模板DNA,显示7批肝素钠样品均为猪源性产品,且未检出牛、羊源性成分污染。结论:建立了一种快速有效地从肝素钠粗品及原料药中提取DNA的方法,并成功通过两种PCR方法对其猪、牛、羊源性成分进行鉴定,为监督药品规范生产,保证用药安全提供了技术支持。 展开更多
关键词 肝素钠 常规聚合酶链式反应 实时荧光聚合酶链式反应 种属鉴定
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基于兼并引物的PCR扩增特定基因的效果比较 被引量:5
15
作者 李志强 何德 李翠新 《湖北民族学院学报(自然科学版)》 CAS 2015年第2期170-173,共4页
根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR... 根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR和降落PCR,并且巢式PCR的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍以上,更加适合兼并引物扩增.这对利用兼并引物获取特异基因具有指导意义. 展开更多
关键词 兼并引物 常规pcr 降落pcr 巢式pcr
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实时荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌活菌 被引量:5
16
作者 张冲 刘祥 陈计峦 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期91-94,共4页
沙门氏菌是引起食物中毒的最常见致病菌,而基于DNA水平的常规PCR(DNA-PCR)检测法虽然快速、灵敏,但在检测时无法区分死活菌,死亡的细菌会出现假阳性结果,严重影响日常检测结果的判断。提取沙门氏菌总RNA之后,采用一步法逆转录聚合酶链... 沙门氏菌是引起食物中毒的最常见致病菌,而基于DNA水平的常规PCR(DNA-PCR)检测法虽然快速、灵敏,但在检测时无法区分死活菌,死亡的细菌会出现假阳性结果,严重影响日常检测结果的判断。提取沙门氏菌总RNA之后,采用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以沙门氏菌invAmRNA为检测对象,发现只有活的沙门氏菌显阳性,死亡的沙门氏菌呈阴性。而且RT-PCR法的稳定性良好,能够准确定量活的沙门氏菌,在纯培养时,检出限可达1CFU/3mL。实验表明,建立的RT-PCR法是一种能够快速、精确检测沙门氏菌活菌的方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 RT-pcr 死活菌 常规pcr
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猪鼻支原体3种核酸检测方法的临床应用比较 被引量:4
17
作者 武昱孜 张旭 +4 位作者 白方方 刘茂军 华利忠 杜改梅 邵国青 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期985-988,共4页
为研究猪鼻支原体(Mhr)核酸检测方法的优越性及在临床应用中的价值,本实验比较了常规PCR、套式PCR和荧光定量PCR 3种方法的敏感性,并进行了临床样品的检测。常规PCR敏感性为104拷贝/μL,套式PCR和荧光定量PCR敏感性均为10拷贝/μL;对74... 为研究猪鼻支原体(Mhr)核酸检测方法的优越性及在临床应用中的价值,本实验比较了常规PCR、套式PCR和荧光定量PCR 3种方法的敏感性,并进行了临床样品的检测。常规PCR敏感性为104拷贝/μL,套式PCR和荧光定量PCR敏感性均为10拷贝/μL;对74份肺组织、36份气溶胶、99份鼻拭子和47份气管支气管灌洗液样品进行检测,常规PCR、套式PCR、荧光定量PCR检出率分别为18.0%(46/256)、53.9%(138/256)和55.1%(141/256)。常规PCR与套式PCR、荧光定量PCR方法的检出率差异极显著(p<0.01),而套式PCR与荧光定量PCR方法的检出率差异无显著性(p>0.05)。结果表明,套式PCR敏感性高,具有较高的临床实用价值;荧光定量PCR敏感性高,最具有实验室诊断价值,但对操作者要求较高;常规PCR方法敏感性稍低,可能造成漏检,但易于操作,对条件简单的基层实验室仍有一定的实用性。在检测临床样品时,推荐采用套式PCR结合荧光定量PCR,结果更为准确可靠,可以提高Mhr的检出率。 展开更多
关键词 猪鼻支原体 常规pcr 套式pcr 荧光定量pcr 临床应用
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以omp基因为靶标的3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测效果比较 被引量:5
18
作者 程保平 赵弘巍 +3 位作者 彭埃天 陈霞 宋晓兵 凌金锋 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期141-145,共5页
为了比较以omp基因为靶标的常规PCR、LAMP检测方法(Loop-mediated isothermal amplification)和实时荧光定量PCR方法在实际检测中对柑橘黄龙病的检测效果,比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌omp基因检测的灵敏度,并运用3种检测方法对采自... 为了比较以omp基因为靶标的常规PCR、LAMP检测方法(Loop-mediated isothermal amplification)和实时荧光定量PCR方法在实际检测中对柑橘黄龙病的检测效果,比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌omp基因检测的灵敏度,并运用3种检测方法对采自广东省田间11个本地柑橘品种上疑似感染黄龙病的多个病样进行实际检测。结果显示:3种检测方法的灵敏度有所不同,依次为常规PCR<LAMP检测方法=实时荧光定量PCR。3种检测方法对黄龙病田间样品的检出率依次为常规PCR<LAMP检测方法<实时荧光定量PCR。表明3种方法均可很好地检测黄龙病;其中常规PCR和实时荧光定量PCR适合有一定技术基础的农技人员使用,而后者具有最大的检测灵敏度,但成本较高;LAMP技术虽然是一种新技术,使用者较少,但该方法简单、快捷,且不需昂贵的精密仪器,具有很好的推广应用前景。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 常规pcr LAMP 实时荧光定量pcr
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鸭疫里默氏杆菌PCR快速检测方法的建立 被引量:5
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作者 季权安 刘燕 +3 位作者 肖琛闻 韦强 霍翠梅 鲍国连 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期388-391,共4页
鸭疫里默氏杆菌病对养鸭业危害严重,传统及常规检测方法均有不足,因此有必要建立起一种更加快速简捷、敏感实用的菌落PCR法。根据GenBank公布的鸭疫里默氏杆菌ATCC株OMPA基因序列,在基因保守区设计特异性引物,直接挑取单菌落作为模板,... 鸭疫里默氏杆菌病对养鸭业危害严重,传统及常规检测方法均有不足,因此有必要建立起一种更加快速简捷、敏感实用的菌落PCR法。根据GenBank公布的鸭疫里默氏杆菌ATCC株OMPA基因序列,在基因保守区设计特异性引物,直接挑取单菌落作为模板,从分离鉴定的1,2,10,11型15株菌及1,2,10,11型4株参考菌株中均能扩增出大小为670 bp的特异性核酸片段,而对照的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性;将培养菌用TE作10倍梯度稀释,最低检出限量为80个鸭疫里默氏杆菌;建立的菌落PCR与常规PCR法比较,两种方法均能扩增出相同的特异性条带。结果表明,菌落PCR法具有较好的特异性和敏感性,与常规PCR法结果完全一致,且更加快速简捷,在临床应用上具有更好的实用价值。 展开更多
关键词 菌落pcr 常规pcr 鸭疫里默氏杆菌 OMPA基因
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荧光PCR、常规PCR和细胞培养在流感检测中的对比分析 被引量:5
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作者 文奇 付倩 +1 位作者 潘虹 刘琴 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第4期524-525,528,共3页
目的比较当地已有的3种流感病毒检测方法的差异,以确定它们在不同情形下的适用方向。方法通过荧光PCR(聚合酶链反应)、常规PCR和细胞培养3种方法同时检测413份流感样病例(ILI)咽拭子样本,计算出它们的灵敏度和特异度,并进行统计分析。... 目的比较当地已有的3种流感病毒检测方法的差异,以确定它们在不同情形下的适用方向。方法通过荧光PCR(聚合酶链反应)、常规PCR和细胞培养3种方法同时检测413份流感样病例(ILI)咽拭子样本,计算出它们的灵敏度和特异度,并进行统计分析。结果荧光PCR、常规PCR和细胞培养的阳性检测率分别为20.34%、15.25%、11.86%;相对于荧光PCR,常规PCR的灵敏度和特异度分别为75%、100%,细胞培养的灵敏度和特异度分别为56%、99.39%;与常规PCR相比,细胞培养的灵敏度为75%,特异度为99.43%。结论 3种方法在灵敏度方面相差很大,但在特异性上几乎没有差异。由于荧光PCR和常规PCR具有很高的灵敏度,并且检测速度快,适用于暴发疫情的应急诊断;细胞培养作为一种经典的病原学检测方法,可以获得流感毒株,用来开展抗原性、基因特性和耐药性等深入研究。 展开更多
关键词 荧光pcr 常规pcr 细胞培养 流感病毒
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