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肺复康方对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡及其蛋白影响 被引量:3
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作者 眭庆梅 刘波 +1 位作者 王慧 王云启 《湖南师范大学学报(医学版)》 2019年第5期15-18,共4页
目的:探讨中药肺复康方对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,及其相关基因表达蛋白的影响,为肺腺癌的药物治疗提供理论依据.方法:体外培养的人肺腺癌A549细胞中加入不同浓度的肺复康方含药血清,MTT比色法测定细胞抑制率,Annexin... 目的:探讨中药肺复康方对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,及其相关基因表达蛋白的影响,为肺腺癌的药物治疗提供理论依据.方法:体外培养的人肺腺癌A549细胞中加入不同浓度的肺复康方含药血清,MTT比色法测定细胞抑制率,Annexin V/IP双染色流式法测定细胞凋亡率,使用定量蛋白质组学串联质谱标签(TMT)联合液相色谱串联质谱(LTQ Orbitrap Velospro)对蛋白质进行定量分析.结果:(1)MTT结果提示含药血清对A549有抑制作用,并存在效应-剂量依赖关系.(2)流式细胞检测结果显示肺复康方低、中、高剂量组的早期凋亡率分别为3.7%、5.3%、12.6%,较空白对照组早期凋亡率为1.3%,组间比较有统计学差异.中药复方低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为7.4%、8.7%、19.4%,与空白对照组比较有统计学差异.提示肺复康方能够诱导A549 细胞的凋亡.(3)TMT标记蛋白结果分析:共找到2008个蛋白,其中A126(高浓度)/127(空白对照组),上调大于1.5倍的74个,下调小于0.67倍的26个;A129(中浓度)/127(空白对照组),上调大于1.5倍的38个,下调小于0.67倍的3个;A128(低浓度)/127(空白对照组),上调大于1.5倍的6个,下调小于0.67倍的3个;A130(顺铂组)/127(空白对照组),上调大于1.5倍的2个,下调小于0.67倍的2个;发现肺能够复康方提高细胞中Bax和Bak蛋白的表达,并降低Bcl-2,Bcl-xl蛋白的表达,提示肺复康方主要影响与细胞周期相关的信号通路.结论:肺复康方可抑制肺腺癌A549细胞的增殖和诱导肿瘤诱导凋亡,主要通过提高细胞中Bax和Bak蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-xl蛋白的表达. 展开更多
关键词 肺复康方 含药血清 A549细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量:47
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作者 陈云刚 谭国庆 +1 位作者 任维龙 徐展望 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期830-836,共7页
目的研究骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用,探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度含药血清干预BMSCs,CCK-8法分别检测血清干预BMSCs 3、5、7、9 d ... 目的研究骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用,探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度含药血清干预BMSCs,CCK-8法分别检测血清干预BMSCs 3、5、7、9 d BMSCs的增殖能力,连续诱导7、10、14 d并进行ALP活性检测,诱导21 d后茜素红染色评价BMSCs的矿化能力,RT-PCR法检测β-catenin、LRP5、GSK-3β、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;ELISA法检测细胞内β-catenin、LRP5蛋白表达量。结果骨碎补含药血清具有明显的促进BMSCs增殖的作用,在一定的时间段提高了ALP活性,促进钙化结节形成;上调wnt/β-catenin信号通路β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;下调GSK-3βmRNA表达,上调β-catenin、LRP5蛋白表达。结论骨碎补含药血清可以促进BMSCs的增殖及成骨分化,其机制与激活wnt/β-catenin信号通路,上调β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达,下调GSK-3βmRNA表达及上调β-catenin、LRP5蛋白表达密切相关。 展开更多
关键词 骨碎补 含药血清 骨髓间充质干细胞 WNT/Β-CATENIN 增殖 碱性磷酸酶 成骨分化
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半枝莲含药血清对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用 被引量:25
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作者 代志军 刘小旭 +6 位作者 薛茜 纪宗正 王西京 康华峰 管海涛 马小斌 任宏涛 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期550-553,共4页
目的:探讨中药半枝莲提取物(ESB)对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。方法:体外培养小鼠H22肝癌细胞,以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞,并设立空白血清及5-氟尿嘧啶组。应用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;Hoe... 目的:探讨中药半枝莲提取物(ESB)对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。方法:体外培养小鼠H22肝癌细胞,以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞,并设立空白血清及5-氟尿嘧啶组。应用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡情况。结果:ESB高、中剂量含药血清组有一定的抑制H22肝癌细胞增殖的作用,且呈明显的时效关系。荧光显微镜下可见部分细胞呈典型凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示:细胞周期各时相中,ESB高、中、剂量含药血清组S期细胞所占的比例明显减少,G1期细胞增多,有明显的诱导凋亡作用。其中空白对照、ESB低、中、高剂量组、5-氟尿嘧啶组H22细胞凋亡率分别为0.51%、1.07%、3.15%、7.83%、11.26%。结论:ESB含药血清不仅可直接抑制小鼠H22肝癌细胞生长,而且可有效诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 半枝莲 肝癌 含药血清 凋亡
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加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响 被引量:14
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作者 施胜英 林海桢 +2 位作者 周溦 王素丽 林敬明 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期88-93,共6页
目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋... 目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。 展开更多
关键词 加味四君子汤 含药血清 肝癌HEPG2细胞 增殖 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路
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皂角刺含药血清诱导直肠癌细胞SW-480凋亡及其对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响 被引量:11
5
作者 何峰 何光志 +5 位作者 张利新 王琴 李志 王开平 邓文玲 符中柱 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第19期217-221,共5页
目的:采用血清药理学方法探讨皂角刺含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:制备皂角刺药液,50只健康SD大鼠分为皂角刺高中低剂量组(每1 mL分别含有生药2 000,1 000,500 mg),环磷酰胺阳性对照组(50 mg·kg-1)和生理盐水空白对照... 目的:采用血清药理学方法探讨皂角刺含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:制备皂角刺药液,50只健康SD大鼠分为皂角刺高中低剂量组(每1 mL分别含有生药2 000,1 000,500 mg),环磷酰胺阳性对照组(50 mg·kg-1)和生理盐水空白对照组5个组,按20 mL·kg-1大鼠体质量给药,以制备含药血清。取含药血清培养液在体外作用于SW-480细胞(密度为1×106/mL),分别在24,48,72 h后,采用MTT法检测含药血清对SW-480增殖的影响;加入药物血清培养液处理细胞24 h后,采用流式细胞仪检测SW-480凋亡率,RT-PCR检测各组含药血清对细胞B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)/Bel-2相关x蛋白(Bax)基因表达的影响。结果:与空白对照组比较,皂角刺含药血清培养液作用细胞的吸光度(A)在20,40,60 h均明显低于空白组(0.370±0.005)%,(0.624±008)%,(1.078±0.038)%(P<0.01);皂角刺高、中、低剂量含药血清培养液诱导SW-480凋亡依次为(37.386±0.163)%,(35.834±0.092 3)%,(27.572±1.193)%显著高于空白对照(5.036±0.378)%(P<0.01);皂角刺含药血清培养液对SW-480细胞的Bcl-2表达(0.258±0.037,0.442±0.024和0.652±0.072)明显低于空白对照组(0.936±0.047)(P<0.01),随灌胃给药的药物剂量增加Bcl-2表达而增加,而Bax表达(1.946±0.017,1.810±0.023和1.810±0.023)明显高于空白对照组(1.260±0.029)(P<0.01),Bax表达反而减少。结论:皂角刺含药血清对能抑制SW-480生长和诱导其凋亡,Bcl-2 mRNA基因表达减少与Bax mRNA基因表达增多可能是皂角刺诱导肠癌细胞凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 皂角刺含药血清 SW-480 抑瘤作用 凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病2基因/Bel-2相关x蛋白基因
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葛根黄连有效成分降糖作用对比及其血清化学研究 被引量:10
6
作者 王霜 赵兴冉 +2 位作者 章雷 谭睿 顾健 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期165-168,共4页
目的:对比葛根有效成分异黄酮和黄连有效成分总生物碱单用及配比后降糖作用及其血清化学成分差异。方法:灌胃给以葛根异黄酮800mg/kg、黄连总生物碱60mg/kg和葛根异黄酮黄连总生物碱8:3配比860mg/kg,比较灌胃葛根异黄酮组、黄连总生物... 目的:对比葛根有效成分异黄酮和黄连有效成分总生物碱单用及配比后降糖作用及其血清化学成分差异。方法:灌胃给以葛根异黄酮800mg/kg、黄连总生物碱60mg/kg和葛根异黄酮黄连总生物碱8:3配比860mg/kg,比较灌胃葛根异黄酮组、黄连总生物碱组和葛根异黄酮黄连总生物碱配比组降糖作用;采用HPLC梯度洗脱方法对比葛根异黄酮和黄连总生物碱配比与含药血清化学成分的差异。结果:葛根异黄酮与黄连总生物碱单用及合用均能明显降低四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖,改善血清甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),葛根异黄酮黄连总生物碱配比组优于葛根异黄酮组和黄连总生物碱组;葛根异黄酮黄连总生物碱配比组血清中有12个成分来源于原配比组,包括有葛根素、大豆苷、黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱,有22个成分来源于代谢产物,其中6个代谢产物由葛根异黄酮代谢,5个代谢产物由黄连生物碱代谢,11个代谢产物来源于葛根异黄酮和黄连总生物碱的相互作用,同时2个原配比组中成分未在血清中检出。结论:葛根异黄酮与黄连总生物碱合用降糖效果优于其有效成分单用,原因可能因为主要有效成分入血后相互作用引起含量变化、新生有效代谢中间体造成。 展开更多
关键词 葛根异黄酮 黄连总生物碱 含药血清 降糖作用
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基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响 被引量:9
7
作者 俞琦 王文佳 +2 位作者 王平 韩洁 何光志 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第1期183-185,共3页
目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,... 目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。 展开更多
关键词 血竭 含药血清 成纤维细胞 TGF—β/Smad3信号通路
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银黄清肺胶囊含药血清体外抗流感病毒实验研究 被引量:9
8
作者 李湘兰 卢芳国 +4 位作者 易登峰 李玲 范伏元 葛资宇 彭志 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第5期1107-1109,共3页
目的:检测银黄清肺胶囊含药血清体外对A型流感病毒的抑制作用。方法:通过体外培养技术进行MDCK细胞培养,以A型流感病毒株感染狗肾细胞(MDCK细胞),采用中药血清学药理方法[1]及MTT[2-3]法,分预防给药(先加药物)、治疗给药(先加病毒)、及... 目的:检测银黄清肺胶囊含药血清体外对A型流感病毒的抑制作用。方法:通过体外培养技术进行MDCK细胞培养,以A型流感病毒株感染狗肾细胞(MDCK细胞),采用中药血清学药理方法[1]及MTT[2-3]法,分预防给药(先加药物)、治疗给药(先加病毒)、及直接抑制给药(药物病毒同时加入)3种方式测定银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞病变的作用。结果:与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清与利巴韦林片含药血清组,预防、治疗、直接抑制3种给药方式中,A型流感病毒感染MDCK细胞OD值均明显增高(P<0.05);与相应浓度利巴韦林片含药血清组比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞OD值无明显差别(P>0.05)。结论:银黄清肺胶囊含药血清体外可以抑制流感病毒在细胞内增殖。 展开更多
关键词 流感病毒 银黄清肺胶囊 含药血清 MDCK细胞 MTT法
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益气养阴祛瘀方对干燥综合征颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响 被引量:9
9
作者 秦源 林崇泽 +2 位作者 孙晗 李志宇 王新昌 《中国中医急症》 2017年第1期5-8,共4页
目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(SS)患者颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响。方法制备不同剂量SD大鼠益气养阴祛瘀方含药血清,再分别给予以下处理:空白组(仅含RPMI1640培养液),空白血清组(10%空白血清+RPMI1640培养液),分别予... 目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(SS)患者颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响。方法制备不同剂量SD大鼠益气养阴祛瘀方含药血清,再分别给予以下处理:空白组(仅含RPMI1640培养液),空白血清组(10%空白血清+RPMI1640培养液),分别予含5%、10%、15%、20%不同浓度的含药血清+RPMI1640培养液组,共6组。培养细胞24 h后,分别以倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜观察细胞,Western blot检测细胞中AQP5及M3R蛋白表达水平。结果益气养阴祛瘀方含药血清作用后,激光共聚焦显微镜观察抗体标记细胞的荧光强度明显增强。Western blot检测AQP5与M3R的蛋白表达均有上调。含药血清组中的AQP5及M3R蛋白的表达明显高于空白血清组,且10%、15%含药血清组高于5%含药血清组(P<0.05),但与20%相差不大(P>0.05)。结论益气养阴祛瘀方可以上调颌下腺细胞中AQP5及M3R蛋白的表达,而且与之成一定的剂量依赖关系。 展开更多
关键词 干燥综合征 益气养阴祛瘀方 含药血清 水通道蛋白 AQP5 M3R
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旋覆代赭汤含药血清对胃窦平滑肌细胞IP_3受体及钙离子浓度影响的实验研究 被引量:7
10
作者 林丽莉 时昭红 +3 位作者 石拓 陶春晖 王湘宁 韦秀明 《甘肃中医》 2010年第3期34-36,共3页
目的:观察旋覆代赭汤含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞(SMC)IP3受体(IP3R)及钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法:分离大鼠胃窦SMC,加入IP3受体拮抗剂肝素后,镜下观察含药血清对胃窦SMC收缩作用;检测细胞Ca2+总浓度。结果:IP3受体拮抗剂肝素可抑... 目的:观察旋覆代赭汤含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞(SMC)IP3受体(IP3R)及钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法:分离大鼠胃窦SMC,加入IP3受体拮抗剂肝素后,镜下观察含药血清对胃窦SMC收缩作用;检测细胞Ca2+总浓度。结果:IP3受体拮抗剂肝素可抑制旋覆代赭汤含药血清对胃窦SMC的收缩作用;各剂量组与无钙缓冲液组的细胞内钙离子总浓度相比较无明显差异。结论:旋覆代赭汤含药血清可使胃窦SMC收缩,其机制可能是通过IP3通路作用于细胞,引起细胞内质网释放Ca2+使胃窦SMCCa2+升高。 展开更多
关键词 旋覆代赭汤 含药血清 胃窦平滑肌细胞 IP3受体 钙离子
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大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响 被引量:6
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作者 周倍伊 吴亚姗 +5 位作者 周围 谢金玲 钟卫干 杨力强 黄正团 黄铠琴 《广西中医药》 2020年第2期56-61,共6页
目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分... 目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BM SCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1~7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3~7 d,高于10%的空白血清组(P<0.05);5%的含药血清组与5%的空白血清组比较无明显差异(P>0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离、培养BM SCs,操作简单,方法稳定,可大量扩增BMSCs。扩增后的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能。复方扶芳藤合剂含药血清干预后的BMSCs增殖能力增强,其中20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清在本实验中为最佳干预浓度。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 原代培养 干细胞鉴定 复方扶芳藤合剂 含药血清 CCK-8法
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龙鳖胶囊含药血清对YAP抑制剂诱导人软骨细胞凋亡的保护作用及机制研究 被引量:6
12
作者 梁桂洪 黄和涛 +8 位作者 潘建科 曾令烽 杨伟毅 罗明辉 杨园 陈红云 韩燕鸿 赵金龙 刘军 《中国药房》 CAS 北大核心 2021年第12期1442-1448,共7页
目的:探索龙鳖胶囊含药血清(后文简写为"LBJN")对Yes结构结合蛋白(YAP)抑制剂维替泊芬(verteporfin)诱导软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法:通过两步酶消化法提取原代人膝骨性关节炎软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原... 目的:探索龙鳖胶囊含药血清(后文简写为"LBJN")对Yes结构结合蛋白(YAP)抑制剂维替泊芬(verteporfin)诱导软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法:通过两步酶消化法提取原代人膝骨性关节炎软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。采用流式细胞术检测2、5μmol/L verteporfin单用和分别与5%LBJN联用48 h后对细胞凋亡的影响,并设置溶剂对照[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]和5%LBJN对照。采用Western blot法检测0.1%DMSO(溶剂对照)、2μmol/L verteporfin、2μmol/L verteporfin+5%LBJN和0(空白对照)、2.5%LBJN、5%LBJN处理48 h后细胞中凋亡相关蛋白[YAP、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)]的表达水平;采用Western blot法检测0(空白对照)、2.5%、5%LBJN处理48h后细胞中自噬相关蛋白[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、Beclin-1、LC3A/B]的表达水平。结果:分离出的细胞符合软骨细胞的特征。与0.1%DMSO比较,2、5μmol/L verteporfin作用后细胞的凋亡率均显著升高(P<0.05),且两个浓度的作用效果相当(P>0.05);与单用verteporfin比较,2、5μmol/L verteporfin与5%LBJN联用后细胞的凋亡率均显著降低(P<0.05)。与0.1%DMSO比较,2μmol/L verteporfin作用后细胞中YAP、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与2μmol/L verteporfin比较,2μmol/L verteporfin+5%LBJN作用后细胞中YAP、Bcl-2蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05),而cleaved-caspase-3蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。与空白对照比较,2.5%、5%LBJN作用后细胞中YAP、Bcl-2、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ比值均显著升高(P<0.05),而cleaved-caspase-3、mTOR蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:LBJN具有阻断YAP抑制剂verteporfin诱导的软骨细胞凋亡的作用,其机制可能与调节软骨细胞中凋亡相关蛋白的表达和增强软骨细胞的自噬有� 展开更多
关键词 龙鳖胶囊 含药血清 骨性关节炎 软骨细胞 Yes结构结合蛋白抑制剂 凋亡 自噬
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大鼠含药血清中芍药苷的含量测定 被引量:6
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作者 闫寒 付衍 +5 位作者 彭娟 郭娜 聂颖兰 范斌 高冬 宋军 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第14期89-91,共3页
目的:建立大鼠含药血清中芍药苷的含量测定方法。方法:采用HPLC测定血府逐瘀胶囊中芍药苷含量,HPLC-MS-MS测定血清中芍药苷含量。结果:血府逐瘀胶囊中芍药苷含量1.68 mg/粒,符合2010年版《中国药典》规定;血清中芍药苷质量浓度在4.57~... 目的:建立大鼠含药血清中芍药苷的含量测定方法。方法:采用HPLC测定血府逐瘀胶囊中芍药苷含量,HPLC-MS-MS测定血清中芍药苷含量。结果:血府逐瘀胶囊中芍药苷含量1.68 mg/粒,符合2010年版《中国药典》规定;血清中芍药苷质量浓度在4.57~585μg.L-1线性关系良好,r=0.998 3,高、中、低质量浓度的绝对回收率101.7%~115.5%。结论:HPLC-MS-MS测定大鼠含药血清中芍药苷含量的方法稳定、重复性好,可作为血府逐瘀胶囊在大鼠血清中质量控制方法。 展开更多
关键词 血府逐瘀胶囊 含药血清 芍药苷 HPLC-MS-MS 含量测定
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狼毒大戟配伍大枣水煎液体外抗乳腺癌作用及机制研究 被引量:1
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作者 马立威 陈哲 +4 位作者 陈颂 倪世宇 李京 葛鹏玲 刘吉成 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期66-75,共10页
目的探讨狼毒大戟配伍大枣水煎液(decoction of Euphorbia fischeriana Steud.and jujuba,DEFSJ)体外抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡的可能分子机制。方法通过血清药理学方法制备DEFSJ载药血清(containing serum,CS);光镜及电镜... 目的探讨狼毒大戟配伍大枣水煎液(decoction of Euphorbia fischeriana Steud.and jujuba,DEFSJ)体外抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡的可能分子机制。方法通过血清药理学方法制备DEFSJ载药血清(containing serum,CS);光镜及电镜下观察细胞形态学变化;DEFSJ-CS联合LY294002(PI3k信号通路抑制剂)作用后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况,流式细胞仪结合免疫染色检测PI3k/Akt转导途径及Bcl-2家族相关蛋白的表达变化。结果光镜及电镜下可见细胞形态学变化及典型的细胞凋亡形态学特征;与阴性对照组比较,DEFSJ-CS对MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用,联合LY294002后抑制作用更加显著(P<0.01);Annexin V-FITC/PI染色结果显示,与阴性对照组比较,随着DEFSJ-CS含量的增加,细胞凋亡率明显增加,联合LY294002后凋亡作用更加显著(P<0.05,P<0.01);免疫染色检测结果显示,PI3k、p-Akt、p-FoxO3a、Bcl-2蛋白表达下调,Bax、Bim蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01),联合LY294002后p-Akt、p-FoxO3a蛋白表达下调更加显著。结论PI3k/Akt转导途径参与了DEFSJ-CS抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡作用的调控。 展开更多
关键词 狼毒大戟配伍大枣水煎液 载药血清 MCF-7细胞 凋亡 PI3K/AKT途径
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补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用 被引量:5
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作者 郭咏霞 吴正治 +1 位作者 张继平 廖一平 《中医药导报》 2010年第10期80-83,共4页
目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用。方法:应用中药复方血清药理学研究方法,制备家兔补阳还五汤含药血清,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响。结果:PC12细胞缺氧造模后,... 目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用。方法:应用中药复方血清药理学研究方法,制备家兔补阳还五汤含药血清,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响。结果:PC12细胞缺氧造模后,出现急性损伤,形态变异,补阳还五汤含药血清组表现为自我修复,形态与正常细胞组相似;补阳还五汤含药血清组能提高细胞存活力,降低凋亡率及降低细胞上清PAF含量(P<0.05)。结论:补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞有明显的保护作用,其机制与降低缺氧损伤细胞PAF含量释放、保护细胞形态和提高存活力有关。 展开更多
关键词 补阳还五汤 含药血清 PC12细胞 凋亡 PAF
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不同煎煮方法麻杏石甘汤含药血清体外抗A型流感病毒实验研究 被引量:5
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作者 童骄 葛资宇 +7 位作者 王小玉 戴冰 李玲 张波 肖子曾 那婧婧 邹莉 卢芳国 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2017年第4期14-17,共4页
目的:探讨不同煎煮方法的麻杏石甘汤含药血清体外抗A型流感病毒的作用。方法:应用体外细胞培养技术进行狗肾细胞(MDCK)培养,通过3种不同的加药方式,检测不同煎煮方法的麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒直接灭活、干预吸附、抑制增殖的... 目的:探讨不同煎煮方法的麻杏石甘汤含药血清体外抗A型流感病毒的作用。方法:应用体外细胞培养技术进行狗肾细胞(MDCK)培养,通过3种不同的加药方式,检测不同煎煮方法的麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒直接灭活、干预吸附、抑制增殖的作用。结果:在直接灭活作用中,浓度为12.5%的麻黄先煎30 min组、先煎35 min组、先煎40 min组比同浓度四药同煎组具有更强的灭活流感病毒作用(P<0.05),其中麻黄先煎30 min组灭活能力最强(P<0.01);在干预吸附作用中,浓度为12.5%的麻黄先煎20、30、35 min组比四药同煎组对病毒吸附的干预作用强(P<0.05),其中麻黄先煎20、30 min组效果突出(P<0.01);在抑制增殖作用中,浓度为25%的麻黄先煎10 min组、20 min组、25 min组、30 min组、40 min组与四药同煎组相比较,对流感病毒的增殖抑制效果明显(P<0.05),其中先煎10、20、30 min效果突出(P<0.01)。上述3种作用都未体现出量效关系。结论:麻杏石甘汤煎煮方法的不同可以导致其抗流感病毒效果的差异。 展开更多
关键词 煎煮方法 麻杏石甘汤 含药血清 流感病毒
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化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo增殖侵袭迁移及FGA、ITGB3表达的影响
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作者 黄艳茜 陈思 邓高丕 《环球中医药》 CAS 2023年第12期2414-2420,共7页
目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细... 目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细胞的增殖情况;Transwell、细胞划痕分别检测化瘀消癥颗粒含药血清(低、中、高浓度组)对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测FGA、ITGB3 mRNA表达;Western blot检测FGA、ITGB3蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清高、中、低浓度组对HTR-8/SVneo细胞活性具有明显抑制作用。与对照组相比,各剂量化瘀消癥颗粒含药血清组对HTR-8/SVneo细胞增殖活性均有不同程度的抑制作用(P<0.05);不同剂量HTR-8/SVneo细胞穿过Transwell小室滤过膜数量均低于空白组,其中低剂量组HTR-8/SVneo细胞穿膜率最低(P<0.05)。化瘀消癥颗粒含药血清组FGA、ITGB3蛋白表达下调;低浓度化瘀消癥颗粒含药血清组FGA和ITGB3 mRNA表达下调,中、高浓度化瘀消癥颗粒含药血清组ITGB3 mRNA表达下调。结论化瘀消癥颗粒可能通过调控FGA/ITGB3通路抑制HTR-8/SVneo细胞粘附力,从而达到降低细胞活性的目的。 展开更多
关键词 化瘀消癥颗粒 含药血清 侵袭迁移 HTR-8/SVneo细胞 FGA/ITGB3通路
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复方参鹿颗粒含药血清对较低危骨髓增生异常综合征p38MAPK磷酸化的抑制作用 被引量:4
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作者 张文君 赵琳 +2 位作者 赵艺涵 徐培 王子元 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期82-87,共6页
目的观察复方参鹿颗粒(CSG)含药血清对较低危骨髓增生异常综合征(lower-risk MDS)骨髓单个核细胞(BMMNC)p38MAPK磷酸化、CD34^+细胞凋亡和正常造血干/祖细胞集落(CFU-HSPC)形成的影响。方法 16只清洁级Wistar大鼠,随机分为空白血清组、... 目的观察复方参鹿颗粒(CSG)含药血清对较低危骨髓增生异常综合征(lower-risk MDS)骨髓单个核细胞(BMMNC)p38MAPK磷酸化、CD34^+细胞凋亡和正常造血干/祖细胞集落(CFU-HSPC)形成的影响。方法 16只清洁级Wistar大鼠,随机分为空白血清组、CSG组,每组8只,制备空白血清和CSG含药血清。体外骨髓细胞培养分为空白血清组、CSG组、SB203580组和SB202474组。分离lower-risk MDS患者BMMNC,与10%各组血清或p38抑制剂共培养,Annexin V/PI双染流式细胞术检测CD34^+细胞凋亡率, Western Blot检测p38、p-p38蛋白表达。MACS分离骨髓CD34^+细胞,用半固体甲基纤维素与10%各组血清或p38抑制剂共培养,观察CFU-HSPC形成,FISH检测集落中异常克隆细胞群体的比例。结果与空白血清和SB202474组比较,CSG、SB203580组的凋亡率、p-p38蛋白表达减少(P<0.05);CFU-HSPC形成数增加(P<0.01);形成的集落中异常克隆细胞比例降低(P<0.05)。CSG和SB203580组的p-p38蛋白表达和异常克隆细胞比例呈正相关(P<0.01)。结论 CSG含药血清能改善lower-risk MDS骨髓无效造血,其机制可能与抑制p38蛋白磷酸化,减少骨髓CD34^+细胞凋亡,并恢复骨髓正常造血细胞的优势生长有关。 展开更多
关键词 复方参鹿颗粒 含药血清 骨髓增生异常综合征 P38丝裂原活化蛋白激酶
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温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响 被引量:4
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作者 刘丹丹 魏妍妍 +3 位作者 熊怀亮 戎文娟 朱金华 万红娇 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期5-9,共5页
目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig... 目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平组ig 20 mg/kg,ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度。星形胶质细胞在谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下经含药血清处理,即谷氨酸对照组、正常血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组,处理24h、36h和48h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;ELISA法检测P38MAPK磷酸化和非磷酸化及PKC蛋白表达的影响。结果:培养的星形胶质细胞纯度在95%以上。谷氨酸(0μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg含药血清组在3个时间段不同程度增加星形胶质细胞存活率;谷氨酸(5、10μmol/ml)条件下,温胆汤含药血清处理24h、36h后,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组不同程度增加的细胞存活率;48h后,温胆汤40g/kg含药血清组增加的细胞存活率。谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下,氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤30g/kg含药血清组能显著上调星形胶质细胞P38MAPK蛋白磷酸化和非磷酸化的表达。谷氨酸(0、5μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达;谷氨酸(10μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达。结论:一定谷氨酸环境下温胆汤能不同程度的增加星形胶质细胞的存活率,能上调P38MAPK磷酸化和非磷酸化的表达及降低PKC蛋白的表达,从而间接反映出温胆汤能调节星形胶质细胞GJIC(细胞缝隙连接)的功能。 展开更多
关键词 温胆汤 含药血清 星形胶质细胞 细胞缝隙连接
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开心散含药血清对皮质酮所致CTX TNA2细胞损伤的保护作用 被引量:4
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作者 温智林 王真真 +1 位作者 贺文彬 陈乃宏 《神经药理学报》 2014年第6期1-5,共5页
目的:观察开心散含药血清对皮质酮(corticosterone)损伤大鼠大脑皮质星形胶质细胞CTX TNA2的影响。方法:制备开心散含药血清(500 mg·kg-1)、阳性药氟西汀含药血清(10 mg·kg-1)、普通大鼠血清。细胞实验中采用皮质酮损伤CTX T... 目的:观察开心散含药血清对皮质酮(corticosterone)损伤大鼠大脑皮质星形胶质细胞CTX TNA2的影响。方法:制备开心散含药血清(500 mg·kg-1)、阳性药氟西汀含药血清(10 mg·kg-1)、普通大鼠血清。细胞实验中采用皮质酮损伤CTX TNA2细胞建立体外抑郁模型,MTT法检测开心散对皮质酮所致细胞损伤的影响以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路抑制剂的干预作用;采用Western Blotting法检验相关信号通路蛋白表达变化情况。结果:皮质酮浓度为200μmol·L-1时,细胞活力抑制率可稳定在60%,浓度依赖性较好;开心散含药血清均能够显著提高皮质酮损伤细胞的存活率,而给予PI3K相关通路的抑制剂后,开心散保护作用被逆转,Western Blotting结果显示给予开心散含药血清能够逆转皮质酮损伤后PI3K及蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)1/2蛋白表达下降的趋势。结论:开心散含药血清对皮质酮所致的CTX TNA2细胞损伤具有明显保护作用,其保护机制可能与PI3K信号通路有关。 展开更多
关键词 开心散 含药血清 皮质酮 PI3K CTX TNA2
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