多糖蛋白结合物的纯化方法及应用

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作者 吕明洋 乔瑞洁 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期100-104,共5页

多糖蛋白结合疫苗相对于多糖疫苗成功的关键是其诱导了对于多糖的免疫记忆,增强了机体对病原菌的免疫应答。而结合物的纯度对结合疫苗的效果起着至关重要的作用。纯化方法的选择对于结合物制备的产率和成本具有重要意义,常用的结合物纯... 多糖蛋白结合疫苗相对于多糖疫苗成功的关键是其诱导了对于多糖的免疫记忆,增强了机体对病原菌的免疫应答。而结合物的纯度对结合疫苗的效果起着至关重要的作用。纯化方法的选择对于结合物制备的产率和成本具有重要意义,常用的结合物纯化方法种类多样,目前主要使用的纯化方法基于被分离物所带电荷、溶解度、分子大小进行分离纯化。现就这3类常用的多糖蛋白结合物的纯化方法及应用作一概述,为今后的研究提供参考。 展开更多

关键词 结合疫苗 多糖 多糖蛋白结合物 纯化方法

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GBSⅢ荚膜多糖-精制破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究 被引量：1

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作者 杨育芳 梁琳琳 +1 位作者 孙雪南 孙述学 《宁夏医学院学报》 2006年第2期103-105,共3页

目的研究和制备B群链球菌Ⅲ荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法用亲和层析法纯化荚膜多糖抗原,用获得的结合疫苗皮下注射免疫小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清内型特异性的IgG抗体。结果结合疫苗在小鼠体内诱... 目的研究和制备B群链球菌Ⅲ荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法用亲和层析法纯化荚膜多糖抗原,用获得的结合疫苗皮下注射免疫小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清内型特异性的IgG抗体。结果结合疫苗在小鼠体内诱导产生的免疫反应远比单纯的荚膜多糖强烈。结论破伤风类毒素作为荚膜多糖抗原的载体,能显著提高荚膜多糖的免疫原性。 展开更多

关键词 B群链球菌 荚膜多糖 结合疫苗 免疫原性 制备

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O2血清型肺炎克雷伯氏菌多糖结合疫苗的生物合成

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作者 张璐璐 潘超 +4 位作者 冯尔玲 华孝挺 俞云松 王恒樑 朱力 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1899-1907,共9页

本研究旨在利用微生物体内合成肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)多糖结合疫苗并研究其保护效果。通过敲除Kp O抗原连接酶基因waaL阻断其LPS合成,再向缺失株中导入糖基工程载体,使细菌能够在体内合成糖蛋白,并将该糖蛋白免疫小... 本研究旨在利用微生物体内合成肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)多糖结合疫苗并研究其保护效果。通过敲除Kp O抗原连接酶基因waaL阻断其LPS合成,再向缺失株中导入糖基工程载体,使细菌能够在体内合成糖蛋白,并将该糖蛋白免疫小鼠后评价其保护效果。结果表明,在构建的KpwaaL缺失株中导入糖基工程载体后,底物蛋白重组霍乱毒素B亚单位rCTB (Recombinant cholera toxin B subunit)能够被O糖化,从而得到糖蛋白;动物实验结果显示该疫苗能刺激小鼠产生较高的抗体效价,试验组小鼠攻毒后一周存活率可达75%。这种生物合成方法制备的多糖结合疫苗有望成为针对肺炎克雷伯氏菌的新型候选疫苗。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯氏菌 生物合成 O-糖基化 多糖结合疫苗 免疫评价

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七价肺炎链球菌结合疫苗预防肺炎链球菌性疾病的成本-效果分析 被引量：15

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作者 符一男 刘国恩 +1 位作者 朱琳 马爱霞 《中国卫生经济》 北大核心 2013年第1期49-52,共4页

目的:对七价肺炎链球菌结合疫苗预防肺炎链球菌性疾病开展药物经济学分析。方法:构建Markov模型,结合北京、广州、深圳和武汉的成本数据和台湾健保局的流行病学数据,对将PCV7纳入国家免疫规划方案进行5年的模拟。结果:成本效果分析得出... 目的:对七价肺炎链球菌结合疫苗预防肺炎链球菌性疾病开展药物经济学分析。方法:构建Markov模型,结合北京、广州、深圳和武汉的成本数据和台湾健保局的流行病学数据,对将PCV7纳入国家免疫规划方案进行5年的模拟。结果:成本效果分析得出,免疫规划方案实施5年内,可避免11 793人死亡、获得42 265.49QALYs,并节约成本1 574.7元/每人。与不实施免疫规划方案相比较,实施规划为绝对优势方案。结论:将PCV7纳入国家免疫规划方案具有成本效果,并且随着接种率的提高,该方案将产生更大的净效益。 展开更多

关键词 七价肺炎链球菌结合疫苗 肺炎链球菌性疾病 成本-效果分析

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细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的研究进展 被引量：8

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作者 程亚慧 沈荣 乔瑞洁 《微生物学免疫学进展》 2018年第4期81-86,共6页

细菌性多糖蛋白结合疫苗是一类重要的、安全有效的预防疫苗。目前该疫苗在控制由流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌等引起的感染性疾病中已取得了巨大的成功,尤其是针对两岁以下的婴幼儿。然而,由于缺乏对其免疫激活机制的了解,... 细菌性多糖蛋白结合疫苗是一类重要的、安全有效的预防疫苗。目前该疫苗在控制由流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌等引起的感染性疾病中已取得了巨大的成功,尤其是针对两岁以下的婴幼儿。然而,由于缺乏对其免疫激活机制的了解,多糖蛋白结合疫苗仍存在一些问题,如在高危人群中免疫原性较低。因此,了解细菌性多糖蛋白结合疫苗在机体内的免疫应答机制至关重要,以便设计更为合理的疫苗。传统的免疫机制认为,T淋巴细胞活化是由提呈的多肽诱导,即多糖蛋白结合物中载体蛋白部分的加工产物。近年来,已发现T细胞识别多糖的新机制,显示多糖蛋白结合疫苗的多糖部分积极参与T细胞活化。现就近年来细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的相关研究作一概述。 展开更多

关键词 多糖蛋白结合疫苗 机制 抗原提呈 细胞免疫应答

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肺炎链球菌糖类疫苗综述 被引量：4

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作者 周子孺 谢昊天 +4 位作者 马贝宁 赵铭 李玲昕 胡静 尹健 《药物生物技术》 CAS 2022年第2期177-181,共5页

肺炎链球菌是一类可诱发侵袭性疾病、严重危害人类健康的机会致病菌。随着各类细菌性疾病造成的医疗负担不断加剧以及细菌对抗生素耐药性的增强,有效防治细菌感染再次受到社会重视。疫苗接种作为一种重要的预防措施,可以有效保护易感人... 肺炎链球菌是一类可诱发侵袭性疾病、严重危害人类健康的机会致病菌。随着各类细菌性疾病造成的医疗负担不断加剧以及细菌对抗生素耐药性的增强,有效防治细菌感染再次受到社会重视。疫苗接种作为一种重要的预防措施,可以有效保护易感人群免于肺炎链球菌的侵袭。荚膜多糖是肺炎链球菌的主要致病物质之一,具有较好的免疫原性,为研发糖类疫苗提供了可能性和重要依据。文章综述了肺炎链球菌的生物学特性与感染机制以及针对肺炎链球菌的糖类疫苗。目前市售的肺炎链球菌疫苗以传统糖类疫苗和结合疫苗为主,随着糖科学快速发展,合成寡糖并结合载体蛋白制备半合成糖缀合物的技术不断成熟,有助于制备诱导特异性抗体反应更快且效果更好的新型半合成结合疫苗。因此半合成结合疫苗有望逐步应用于肺炎链球菌性疾病的临床预防当中,弥补多糖疫苗和结合疫苗临床应用的不足。文章介绍了肺炎链球菌多糖疫苗、结合疫苗和半合成疫苗的免疫特点、发展现况,系统分析了多糖疫苗、结合疫苗在肺炎链球菌性疾病预防上的应用和存在的问题,并重点阐述了现阶段研发半合成结合疫苗所需糖缀合物的免疫原性与抗原性检测,为相关研究提供参考。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 感染机制 荚膜多糖 肺炎链球菌多糖疫苗 肺炎链球菌结合疫苗 半合成肺炎链球菌结合疫苗

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全球脑膜炎球菌多糖结合疫苗研究进展 被引量：2

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作者 徐娟 严冬山 +2 位作者 徐丽 李杰 邵祝军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期304-316,共13页

流行性脑脊髓膜炎(流脑)是由脑膜炎球菌感染引起的急性中枢神经系统性疾病,具有发病不确定性、起病急、进展快、致死和致残率均较高等特点,疾病负担重。脑膜炎球菌常定植在人的鼻咽部,国际上通常将脑膜炎球菌引起的一系列疾病,如败血症... 流行性脑脊髓膜炎(流脑)是由脑膜炎球菌感染引起的急性中枢神经系统性疾病,具有发病不确定性、起病急、进展快、致死和致残率均较高等特点,疾病负担重。脑膜炎球菌常定植在人的鼻咽部,国际上通常将脑膜炎球菌引起的一系列疾病,如败血症、关节炎、脑膜炎、肺炎和心包炎等疾病统称为脑膜炎球菌病(meningococcal diseases)。至今接种疫苗是控制和预防该病最经济有效的措施之一。脑膜炎球菌分为12种血清群,目前全球均面临多菌群流行和变迁的威胁,为给人群提供更广更全的保护,多联多价脑膜炎球菌疫苗已成为研发和使用主力军。脑膜炎球菌疫苗的研发先后经历从单价到多价,从多糖到多糖结合疫苗的过程。脑膜炎球菌多糖结合疫苗在提升免疫原性、诱导免疫记忆和降低带菌率等方面具有明显优势。国际上首款四价和五价脑膜炎球菌多糖结合疫苗分别于2005年和2023年上市,我国首款四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2021年底获批上市。本综述将系统梳理脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研究进展,以期为我国脑膜炎球菌多糖结合疫苗的应用、脑膜炎球菌病的防控策略制定提供参考。 展开更多

关键词 脑膜炎球菌病 多糖结合疫苗 安全性 免疫原性 持久性

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生物法制备细菌多糖结合疫苗的研究进展 被引量：4

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作者 潘超 朱力 王恒樑 《中国科学基金》 CSCD 北大核心 2020年第5期594-601,共8页

多糖结合疫苗被认为是目前最为成功的细菌性疫苗形式之一,在人类传染病防控方面发挥了巨大作用。然而,目前多糖结合疫苗的制备所采用的化学偶联方法生产成本高、产品均一性低、环保压力大,制约着这种疫苗的进一步发展。近年来逐渐兴起... 多糖结合疫苗被认为是目前最为成功的细菌性疫苗形式之一,在人类传染病防控方面发挥了巨大作用。然而,目前多糖结合疫苗的制备所采用的化学偶联方法生产成本高、产品均一性低、环保压力大,制约着这种疫苗的进一步发展。近年来逐渐兴起的生物法制备策略主要利用细菌中蛋白糖基化系统,采用全生物合成的方法只需一步即可高效制备多糖结合疫苗,很好地解决了化学法的不足,并且使新一代疫苗具备了更大的定向设计空间和发展潜力。本文梳理了生物法制备多糖结合疫苗的研究成果及最新进展,明确了生物制备方法中的关键环节,并对多糖结合疫苗的进一步优化提出了建议。 展开更多

关键词 多糖结合疫苗 生物合成 蛋白糖基化 病原细菌

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基于连续流动注射安培法定量检测多糖蛋白结合疫苗中氰化物的残留量

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作者 张姮婕 唐瑶 +4 位作者 蒋佳兴 马晶 李炎 王叔桥 杨蕾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期352-356,362,共6页

目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法,并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后,采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量,进样时间为:35 s;进样体积为:200μL;泵速为:40%;样品周期... 目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法,并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后,采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量,进样时间为:35 s;进样体积为:200μL;泵速为:40%;样品周期时间为:140 s;紫外波长为:312 nm;安培检测器。验证方法的专属性、基质效应、线性范围、检出限、定量限、准确性、精密性及稳定性。采用建立的方法检测5个厂家生产的b型流感嗜血杆菌结合疫苗及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物原液(13批)、结合物原液(21批)中氰化物残留量。结果 空白样品对检测无干扰;b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液基质效应溶液的回收率分别为97.4%、102.4%、96.8%、99.8%,CV均<15%;氰基浓度在0.312 5~80 ng/mL范围内,与峰高呈良好的线性关系,回归方程为:y=133.13 x+57.556,R^(2)=0.999 1;检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.6 ng/mL;加入氰基浓度为5、10、20 ng/mL对照溶液样品的回收率均值分别为108.9%、106.5%、103.5%,RSD为6.4%;精密性验证的CV均<15%;氰基浓度为80、40、20、5 ng/mL的对照溶液连续进样20针的平均浓度分别为76、38、18、5 ng/mL,CV均<15%。13批多糖衍生物原液样品均有检出氰化物残留,21批结合物原液样品中2批未检出,其他均有检出。结论 本研究建立的方法具有良好的准确性、精密性及稳定性,可应用于多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的定量检测。 展开更多

关键词 连续流动注射安培法 多糖蛋白结合疫苗 氰化物 A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗 B型流感嗜血杆菌结合疫苗

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用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究 被引量：2

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作者 徐敏锐 孙鹏 +2 位作者 张部昌 刘波 吴军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期598-603,共6页

目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌... 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。 展开更多

关键词 奈瑟球菌 脑膜炎 O-糖基化修饰系统 PILE PglL 大肠杆菌 O157型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗

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DTaP-Hib联合疫苗中Hib-TT免疫原性研究 被引量：1

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作者 刘梅影 王建华 +1 位作者 陈芸 许正莉 《微生物学免疫学进展》 2008年第4期27-30,共4页

考查DTaP-Hib联合疫苗中Hib-TT的免疫原性，对其剂量、免疫持久性和抗原相容性进行分析。将不同剂量的Hib-TT、DTaP-Hib联合疫苗分别免疫小鼠，设单价的Hib-TT结合疫苗为对照，末次免疫后1、2、4、6、8、10w分别采集血清测定血清中Hib... 考查DTaP-Hib联合疫苗中Hib-TT的免疫原性，对其剂量、免疫持久性和抗原相容性进行分析。将不同剂量的Hib-TT、DTaP-Hib联合疫苗分别免疫小鼠，设单价的Hib-TT结合疫苗为对照，末次免疫后1、2、4、6、8、10w分别采集血清测定血清中Hib多糖抗体滴度。结果显示，不同剂量的Hib-TT和DTaP疫苗联合后均具有较好的免疫原性，血清中Hib多糖抗体阳转率达100％，并具有剂量效应和较好的免疫持久性。2．5μg剂量Hib-TT的DTaP—Hib联合疫苗免疫小鼠后1～2w诱导产生的Hib多糖抗体水平显著性地低于单价Hib-TT（P〈0．05），4～10w，二者的Hib多糖抗体水平无显著性差异（P〉0．05）。5μg剂量Hib-TT的DTaP-Hib联合疫苗在免疫小鼠后1w诱导产生的Hib多糖抗体水平与单价2．5μg剂量Hib-TT无显著性差异（P〉0．05），免后2—10w则显著性地高于单价2．5μg剂量Hib-TT（P〈0．001）。Hib-TT和DTaP疫苗联合后，仍然具有较好的免疫原性、剂量效应和免疫持久性；其抗原性干扰只是暂时的。 展开更多

关键词 b型流感嗜血杆菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗(Hib—TT) 无细胞百白破疫苗(DTaP) DTaP-Hib联合疫苗 免疫原性 免疫持久性 抗原性干扰

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