期刊文献+
共找到31篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
用氨基修饰的载玻片制作cDNA微阵列 被引量:15
1
作者 朱滨 景奉香 +4 位作者 赵建龙 孙悦 陈继锋 赵新泰 徐元森 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期121-124,共4页
cDNA微阵列已在基因差异表达、寻找新基因等研究方面获得广泛应用 ,但有关cDNA微阵列的制作 ,目前多采用多聚赖氨酸修饰的载玻片为探针固定载体 ,固定效果较差 .用氨基硅烷处理的载玻片为载体制作cDNA微阵列 ,然后考察其固定效率、检测... cDNA微阵列已在基因差异表达、寻找新基因等研究方面获得广泛应用 ,但有关cDNA微阵列的制作 ,目前多采用多聚赖氨酸修饰的载玻片为探针固定载体 ,固定效果较差 .用氨基硅烷处理的载玻片为载体制作cDNA微阵列 ,然后考察其固定效率、检测灵敏度、稳定性、实用性等指标 .结果表明 ,用氨基硅烷处理的载玻片具有比多聚赖氨酸更令人满意的核酸固定效率、检测灵敏度 ,且稳定实用 .因此 ,用氨基硅烷修饰的载玻片为探针固定载体制作cDNA微阵列较为理想 . 展开更多
关键词 微阵列 生物芯片 修饰 Cdna 氨基修饰 载玻片
下载PDF
黑木耳实时荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:10
2
作者 张越 姚方杰 +2 位作者 孙文娟 方明 武春爽 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1510-1519,共10页
黑木耳Auricularia heimuer是我国主要栽培的食用菌之一,具有较高的经济价值和生态价值。本研究以黑木耳不同菌株(A14、A137和A12)和不同生育期的样品(菌丝体、原基和子实体)为实验材料,提取RNA,反转录成cDNA,在全基因组注释结果的基础... 黑木耳Auricularia heimuer是我国主要栽培的食用菌之一,具有较高的经济价值和生态价值。本研究以黑木耳不同菌株(A14、A137和A12)和不同生育期的样品(菌丝体、原基和子实体)为实验材料,提取RNA,反转录成cDNA,在全基因组注释结果的基础上,选择12个候选内参基因(APRTase、β-TUB、RPL2、EF-1a、EF-2、PGI、PGM、H^+-ATPase、Tspd、TUB-1a、18S rRNA和28S rRNA)并设计跨内含子的引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行扩增,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和ΔCt算法以及综合评价软件RefFinder,筛选适宜的内参基因。结果表明18S rRNA、β-TUB、EF1-a和28S rRNA适宜作为不同菌株的内参基因,APRTase、18S rRNA和28S rRNA适宜作为不同生育期的内参基因。 展开更多
关键词 候选内参基因 核糖核酸 互补dna 不同菌株 不同生育期
原文传递
猪瘟病毒石门株基因组cDNA片断的扩增与克隆测序 被引量:5
3
作者 王敏华 江金益 +2 位作者 范必勤 赵启祖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期436-442,共7页
以猪瘟病毒(HCV)中国石门株强毒的血毒、细胞毒及C系兔化弱毒的细胞毒中提取的总RNA为模板,应用逆转录─聚合酶链式反应(RT一PCR),在合成的两对HCV特异引物引导下,扩增出与预计大小一致的441和300bp两个... 以猪瘟病毒(HCV)中国石门株强毒的血毒、细胞毒及C系兔化弱毒的细胞毒中提取的总RNA为模板,应用逆转录─聚合酶链式反应(RT一PCR),在合成的两对HCV特异引物引导下,扩增出与预计大小一致的441和300bp两个核酸片断。寡核苷酸探针杂交证实确为HCVP_80和gp44/48蛋白编码区特异性的cDNA片断。扩增片断克隆入pUC_19和pBSK(+)中,并对HCV石门株P_80区cDNA片断进行测序分析,其与国外Alfort、Brescia株同源性分别为90.6%和94.6%。氨基酸水平上同源性高达98.4%。为抗猪瘟病毒P_80区核酶的设计和应用提供了依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 Cdna 扩增 克隆与测序
下载PDF
DNA可专利性问题在美国的新进展——以介评美国Myriad案为中心 被引量:2
4
作者 宋建宝 《中国基础科学》 2014年第5期52-58,共7页
非自然发生的制造物或者物质合成是可专利主题,但是突破性的、创新性的,甚至重大的发现本身并不能使自然物质成为可专利主题。分离DNA属于自然产物,不能仅仅因为经过分离而成为可专利主题,但是互补DNA不是自然生成的,因此属于可专利主题。
关键词 可专利主题 dna 分离dna 互补dna
原文传递
Neuronal ERCC6 mRNA expression in rat brain induced by a transient focal cerebral ischemia 被引量:3
5
作者 凌祥 张玲妹 +2 位作者 黄娅林 包维丽 孙凤艳 《中国药理学报》 CSCD 1999年第1期15-20,共6页
目的:观察缺血再灌注损伤对转录修复耦联因子(ERCC6)mRNA表达水平的影响.方法:在大鼠大脑中动脉栓塞模型上结合Northern杂交,原位杂交和共聚焦激光扫描显微镜的方法观察脑内ERCC6mRNA的表达,并进行细... 目的:观察缺血再灌注损伤对转录修复耦联因子(ERCC6)mRNA表达水平的影响.方法:在大鼠大脑中动脉栓塞模型上结合Northern杂交,原位杂交和共聚焦激光扫描显微镜的方法观察脑内ERCC6mRNA的表达,并进行细胞定位分析.结果:缺血再灌注损伤后,在缺血中心及边周区的ERCC6mRNA表达,2天时开始增加,3天达峰值,7天开始下降.ERCC6mRNA主要在缺血侧的神经元上表达,少数在星型胶质细胞上表达.结论:缺血侧神经元和神经胶质细胞上ERCC6mRNA表达增加,这提示了损伤后神经细胞的DNA自身修复能力被增强. 展开更多
关键词 MRNA 脑缺血 dna修复 再灌注损伤
原文传递
人细胞色素P450 1A2 cDNA克隆及鉴定 被引量:2
6
作者 诸葛坚 钱羽力 +1 位作者 谢海洋 余应年 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期315-317,共3页
为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相... 为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相比 ,所克隆的 c DNA,codon51 5AAT→ AAC都编码天冬酰胺 ,而 codon 51 0后面插入了一个CTG(亮氨酸 ) ,则与 Quattrochi等报道的相同 .本实验室克隆的 CYP1 A2 c DNA可能是一种新的CYP1 A2 c DNA,有可能来自于一种新的 CYP1 A2等位基因的转录 . 展开更多
关键词 人细胞色素P450 Cdna 克隆 鉴定
下载PDF
人肝细胞癌差异表达基因TCTP的克隆和分析 被引量:2
7
作者 朱武凌 段芳龄 +3 位作者 刘东亮 高天慧 陈香宇 白经修 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第4期328-331,共4页
目的 筛选和鉴定在人肝细胞癌中差异表达的基因。方法 采用抑制性消减杂交技术建立人肝细胞癌cDNA消减文库,通过DNA测序分析、Northern印迹、cDNA末端快速扩增和RT-PCR等方法对其中一个克隆基因加以分析。结果 从所建cDNA消减文库中分... 目的 筛选和鉴定在人肝细胞癌中差异表达的基因。方法 采用抑制性消减杂交技术建立人肝细胞癌cDNA消减文库,通过DNA测序分析、Northern印迹、cDNA末端快速扩增和RT-PCR等方法对其中一个克隆基因加以分析。结果 从所建cDNA消减文库中分离到一个插入子长度为479bp的克隆,该片段含有3’端Poly(A)结构,Northern杂交证明其表达水平在癌组织和肝癌细胞株均显著升高,同时经5’末端快速扩增获得一个长度为865bp的全长cDNA序列,具有一个编码172个氨基酸的完整开放阅读框,与GenBank数据库作同源性分析显示其为已报道的TCTP基因。RT-PCR分析表明TCTP基因在癌组织样本中的扩增水平高于癌旁非癌组织样本。结论 TCTP基因的差异表达可能在肝癌发生机制中扮演重要角色。 展开更多
关键词 人肝细胞癌 TCTP 克隆 基因差异 基因表达 抑制性消减杂交技术
下载PDF
人神经生长因子cDNA的体外扩增和序列测定 被引量:1
8
作者 尹元琴 隋承光 +1 位作者 陈红 任常山 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期404-405,407,共3页
目的 :以人胎盘组织中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并测定核苷酸序列 ,为进一步研究奠定基础。方法 :采用异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT -PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;Sanger双脱氧末端终止法测定核苷酸序列。结果 :从人胎盘组织中提... 目的 :以人胎盘组织中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并测定核苷酸序列 ,为进一步研究奠定基础。方法 :采用异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT -PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;Sanger双脱氧末端终止法测定核苷酸序列。结果 :从人胎盘组织中提取出RNA ,以其中的mRNA为模板 ,扩增出人 βNGFcDNA ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定大小与目的片段相同 ,进一步测定序列证实为目的片段。结论 :运用RT PCR技术扩增出人 βNGFcDNA ,扩增时在 5′端以限制性内切酶酶切位点加以修饰 ,此片段经核苷酸序列测定证实为目的片段 。 展开更多
关键词 神经生长因子 互补dna 体外扩增 序列测定
下载PDF
ASSOCIATION OF DIFFERENTIALLY EXPRESSED cDNA FRAGMENT OF FGG WITH HEPATOCELLULAR CARCINOMA 被引量:1
9
作者 范秉琳 朱武凌 +1 位作者 邹国林 段芳龄 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期141-144,共4页
Objective: To identify a cDNA clone from the subtracted library of human hepatocellular carcinoma (HCC). Methods: Suppression subtractive hybridization was used to isolated a panel of genes that are differentially exp... Objective: To identify a cDNA clone from the subtracted library of human hepatocellular carcinoma (HCC). Methods: Suppression subtractive hybridization was used to isolated a panel of genes that are differentially expressed in hepatocellular carcinoma as compared with cirrhotic liver. T/A cloning method was used to construct a subtracted cDNA library. DNA sequencing analysis and Northern blot analysis were also utilized. Results: The cloned cDNA is 787 nucleotides in length and contains an open reading frame of 230 amino acids, which is a cDNA fragment of reported human fibrinogen, gamma polypeptide (FGG). Northern analysis revealed that this gene was overexpressed in two hepatocellular carcinoma cell lines, SMMC-7721 and HepG2. Conclusion: Sequence identity proved the cDNA clone fragment of as FGG gene. Differential expression of the cDNA fragment in HCC suggested that FGG is related to HCC, indicating a new clue for developing a novel diagnostic and prognostic marker. 展开更多
关键词 Hepatocellular carcinoma complementary dna FIBRINOGEN γ polypeptide Sequencing expression
下载PDF
人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达 被引量:2
10
作者 王水良 贺智敏 陈主初 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第6期511-514,共4页
目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDN... 目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDNA真核表达载体pcDNA3 .1 - 2E1 ,并经脂质体介导转入CNE2细胞 ,通过G41 8筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养。结果 :经Southernblot和Westernblot对一系列抗性克隆细胞进行检测 ,获得 2个具有外源CYP2E1cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2 - 2E1 - 1及CNE2 - 2E1 - 2。结论 :建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制研究的体外模型。 展开更多
关键词 细胞色素P4502E1 Cdna 表达 体外模型 鼻咽癌
下载PDF
β-1,3-葡聚糖酶基因克隆、表达及抗菌活性的研究 被引量:2
11
作者 李镇刚 赵爱春 +3 位作者 王茜龄 金筱耘 李军 余茂德 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第13期191-196,共6页
通过RT-PCR的方法分别从小麦和水稻的cDNA中克隆获得β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu基因),分别命名为TaGlu9507和OsGlu30。它们的序列分析表明这两个克隆均含一个1002bp的开放阅读框(ORF),编码334个氨基酸,各自的N-端含有一个长20和29个氨基... 通过RT-PCR的方法分别从小麦和水稻的cDNA中克隆获得β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu基因),分别命名为TaGlu9507和OsGlu30。它们的序列分析表明这两个克隆均含一个1002bp的开放阅读框(ORF),编码334个氨基酸,各自的N-端含有一个长20和29个氨基酸残基的信号肽序列。将不含信号肽序列的TaGlu9507和OsGlu30编码区DNA片段分别克隆进pET28-a(+)表达载体,并转入大肠杆菌BL21(DE3),经0.5mmol/L IPTG诱导3h后获得了高量表达,表达量分别占大肠杆菌可溶性蛋白的49.7%和26.7%,表达产物对黑曲霉、酵母等真菌生长均有较为明显的抑制作用。本结果更进一步表明β-1,3-葡聚糖酶基因是植物真菌病防治的潜在目的基因群之一。 展开更多
关键词 Glu基因 Cdna 原核表达 植物真菌病 基因克隆
下载PDF
猪垂体总cDNA的合成和编码猪生长激素成熟肽DNA序列的PCR扩增
12
作者 王建荣 杨颐 +3 位作者 龚晓磊 张平 顾朝旭 赵洪兴 《上海农业学报》 CSCD 1994年第2期17-21,共5页
以猪垂体mRNA为模板,Oligo(dT)(12~18)为反转录引物,在AMV-RT的催化下,先合成cDNA第一链,再以RNaseH降解的mRNA小分子为引物、ss-cDNA为模板,在E.coltDNAPol.I的催... 以猪垂体mRNA为模板,Oligo(dT)(12~18)为反转录引物,在AMV-RT的催化下,先合成cDNA第一链,再以RNaseH降解的mRNA小分子为引物、ss-cDNA为模板,在E.coltDNAPol.I的催化下合成cDNA第二链,并用E.coliDNAligase连接缺口和T4DNAPol补齐末端,以获得长度完整的ds-CDNA分子。根据已知的pGH基因序列,设计并合成了一对特异引物分子,以总cDNA为模板,进行PCR扩增,分子杂交证明,获得的扩增片段即为侧翼带有重组位点和附加密码的编码pGH成熟肽的DNA序列。 展开更多
关键词 反转录 dna 生长激素基因
下载PDF
KIR2DL1框架基因cDNA的分子克隆测序及一个新等位基因的鉴定 被引量:1
13
作者 孙革 王畅 +3 位作者 甄建新 张国彬 徐筠娉 邓志辉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期694-697,共4页
目的建立K工R2DLI框架基因cDNA的分子克隆测序方法,并鉴定南方汉族人群一个新的KIR2DL1等位基因。方法对-K豫2DL1框架基因测序分型结果异常的外周血样,提取mRNA,反转录为cDNA,用1对KIR2DLl框架基因特异性PCR引物进行扩增,特异性扩... 目的建立K工R2DLI框架基因cDNA的分子克隆测序方法,并鉴定南方汉族人群一个新的KIR2DL1等位基因。方法对-K豫2DL1框架基因测序分型结果异常的外周血样,提取mRNA,反转录为cDNA,用1对KIR2DLl框架基因特异性PCR引物进行扩增,特异性扩增产物(1.2kb)经切胶回收纯化后,进行分子克隆和单倍型测序。结果KIR2DL1特异性PCR扩增产物,经分子克隆和单倍型测序,检出1个正常的K/R2DL1*00302等位基因和1个新变异的KIR2DL1等位基因。该新等位基因的序列与KIR2DL1*00302最相近,但存在编码区nt 188A〉G点突变、位于第4外显子的第42密码子由GAG变成GGG,导致第42位氨基酸残基发生GIu42Gly改变;其序列提交GenBank(序列号:KP025960)和IPD-KIR数据库(IWS40001982),已被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR2DL1*031。结论我们建立了KIR2DL1框架基因cDNA分子克隆测序方法,在等位基因水平的KIR研究中具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 KIR2DL1框架基因 测序分型 cdna 分子克隆 单倍型测序 新等位基因
原文传递
人脑胶质瘤mRNAs的分离纯化及其cDNAs合成
14
作者 覃文新 王尧 +8 位作者 左剑玲 陈桂林 李斌 韦永新 杜子威 赵涵芳 章有章 程枫 陈诗书 《苏州医学院学报》 1992年第2期87-91,168,共5页
采用异硫氰酸胍/氯化铯超离心法,从人脑恶性胶质瘤手术标本中抽提总 RNA;经两轮Oligo(dT)—cellulose 亲和层析纯化得到 mRNAs。Northern 转移印迹分析表明:mRNAs 无降解,完整性好。以此为模板,经反转录,合成得到双链 cDNAs 分子。cDNA ... 采用异硫氰酸胍/氯化铯超离心法,从人脑恶性胶质瘤手术标本中抽提总 RNA;经两轮Oligo(dT)—cellulose 亲和层析纯化得到 mRNAs。Northern 转移印迹分析表明:mRNAs 无降解,完整性好。以此为模板,经反转录,合成得到双链 cDNAs 分子。cDNA 第1条链的反转录效率为36.4%,第2条链的合成效率为80.8%。 展开更多
关键词 互补dna 脑肿瘤 神经胶质瘤
下载PDF
人神经生长因子cDNA的克隆——人神经生长因子cDNA的体外扩增及纯化
15
作者 尹元琴 石磊 +1 位作者 马萍 任常山 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期169-170,173,共3页
目的 :提取人胎盘组织中RNA ,以其中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并纯化 ,为进一步克隆及表达 βNGFcDNA奠定基础。 方法 :异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;柱离心方法纯化。结果 :从人胎盘组织中提取出RNA ... 目的 :提取人胎盘组织中RNA ,以其中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并纯化 ,为进一步克隆及表达 βNGFcDNA奠定基础。 方法 :异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;柱离心方法纯化。结果 :从人胎盘组织中提取出RNA ,以其中的mRNA为模板 ,扩增出人 βNGFcDNA ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定为目的片段 ,并回收纯化。结论 :以人胎盘组织中的mRNA为模板 ,运用RT PCR技术扩增βNGFcDNA ,同时在 5′端以限制性内切酶酶切位点加以修饰 。 展开更多
关键词 神经生长因子 互补dna 体外扩增 纯化 克隆
下载PDF
虫草棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因克隆及分析
16
作者 何晓红 杨宏国 +5 位作者 伍晓丽 刘飞 谢永芳 蒋龙星 王宇 冉玲芳 《广东农业科学》 CAS 2017年第5期32-36,F0002,共6页
采用逆转录PCR方法克隆获得1个虫草棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因的开放阅读框(ORF)序列,并对其进行生物信息学分析。该基因的开放阅读框全长1 599bp,编码的蛋白质由532个氨基酸组成(包括18个氨基酸的信号肽)。预测蛋白质的等电点和分子... 采用逆转录PCR方法克隆获得1个虫草棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因的开放阅读框(ORF)序列,并对其进行生物信息学分析。该基因的开放阅读框全长1 599bp,编码的蛋白质由532个氨基酸组成(包括18个氨基酸的信号肽)。预测蛋白质的等电点和分子量大小分别为6.256、56.936 ku。进行序列分析和进化树构建,发现该蛋白酶与已知的几个种类枯草杆菌蛋白酶具有很高的同源性,且与虎甲寄生菌的粉拟青霉位于同一进化分支。实验首次鉴定了虫草棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因的编码区序列,为进一步研究虫草棒束孢致死蝙蝠蛾幼虫的作用机理提供理论依据。 展开更多
关键词 虫草棒束孢 虫生真菌 蛋白酶 Edna
下载PDF
植物叶中总poly(A)^+mRNA的分离纯化及性质测定
17
作者 程振起 吕俊宣 +2 位作者 张兰芳 魏西平 赵晜 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS 1984年第1期38-44,共7页
本文以芹菜叶为材料介绍了从植物叶中分离纯化总 poly(A)^+mRNA 的一般方法,并测定了总 poly(A)^+mRNA 体外蛋白合成和逆转录的模板活性。发现不同生长期的芹菜叶中总 poly(A)^+mRNA 及总 RNA 的含量有明显的差别。同时还测定了 mRNA3... 本文以芹菜叶为材料介绍了从植物叶中分离纯化总 poly(A)^+mRNA 的一般方法,并测定了总 poly(A)^+mRNA 体外蛋白合成和逆转录的模板活性。发现不同生长期的芹菜叶中总 poly(A)^+mRNA 及总 RNA 的含量有明显的差别。同时还测定了 mRNA3′端多聚腺嘌呤核苷酸的长度及分布,经测定最长 poly(A)片段为165±5个核苷酸。 展开更多
关键词 信使核糖核酸 互补脱氧核糖核酸 翻译 转录 纯化
原文传递
cDNA分子克隆法鉴定KIR3DL3*064新等位基因
18
作者 聂冬梅 蔡思齐 +1 位作者 张国彬 邓志辉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第8期895-897,共3页
目的:应用cDNA分子克隆测序方法,鉴定中国南方汉族1个KIR3DL3新等位基因。方法:采集1例KIR3DL3基因测序结果异常的无偿志愿捐血者的外周血样,提取mRNA并逆转录为cDNA。设计1对具有KIR3DL3基因特异性的PCR引物对cDNA进行扩增,扩增产物纯... 目的:应用cDNA分子克隆测序方法,鉴定中国南方汉族1个KIR3DL3新等位基因。方法:采集1例KIR3DL3基因测序结果异常的无偿志愿捐血者的外周血样,提取mRNA并逆转录为cDNA。设计1对具有KIR3DL3基因特异性的PCR引物对cDNA进行扩增,扩增产物纯化后进行分子克隆测序。结果:经分子克隆测序,检出1个正常的KIR3DL3*00802等位基因和1个KIR3DL3*064新变异等位基因。KIR3DL3*064与KIR3DL3*00601等位基因的序列最为接近,仅有编码区存在nt1184 C>T错义变异,导致第9外显子中的第374密码子由ACT变为ATT,所编码的苏氨酸(Thr)变为异亮氨酸(Ile)。该等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR3DL3*064。结论:cDNA分子克隆测序法能够鉴别常规测序分型中的异常结果,可用于鉴定KIR3DL3新等位基因。 展开更多
关键词 KIR3DL3基因 Cdna 分子克隆测序 新等位基因
原文传递
中国南方汉族人群KIR2DS4基因的多态性
19
作者 甄建新 张国彬 +4 位作者 喻琼 何柳媚 徐筠娉 邹红岩 邓志辉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期21-25,共5页
目的探讨南方汉族人群KIR2DS4分子遗传多态性。方法应用特异性PCR引物扩增306名无关个体KIR2DS4基因的全部外显子,确定KIR2DS4框架基因的有无。对存在KIR2DS4的样本,对该基因的全部外显子进行双向测序,用Assign3.5分析软件鉴定基因... 目的探讨南方汉族人群KIR2DS4分子遗传多态性。方法应用特异性PCR引物扩增306名无关个体KIR2DS4基因的全部外显子,确定KIR2DS4框架基因的有无。对存在KIR2DS4的样本,对该基因的全部外显子进行双向测序,用Assign3.5分析软件鉴定基因型。在测序分型中出现与国际IPD-KIR数据库不完全匹配结果的样本,进行cDNA分子克隆和单倍型测序。结果306名南方汉族无关个体中,携带KIR2DS4基因的个体为297例,经测序分型,均获得了清晰的序列峰图。共检出了7种等位基因,其中3个新等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名。检出的等位基因及其频率分别为KIR2DS4*00101(78.8%)、*003(10.5%)、*004(16.0%)、*010(23.2%)、*017(0.3%)、*00105(0.3%)和*018(0.7%),未检出KIR2DS4*007等位基因。能正常表达于细胞表面的等位基因(KIR2DS4*00101、*017、*00105)和不能正常表达于细胞表面的等位基因(KIR2DS4*003、*004、*010、*018)的检出比例分别为79.4%及50.4%,约为1.6:1。结论获得了南方汉族人群KIR2DS4等位基因分子遗传多态性,可为移植、疾病关联研究及人类进化等提供基础数据。 展开更多
关键词 KIR2DS4框架基因 测序分型 Cdna 分子克隆 新等位基因
原文传递
中介蝮毒腺C-型凝集素样蛋白基因的cDNA克隆和序列分析
20
作者 陈毓 张卫柱 +2 位作者 刘玲玲 杨玉娥 杨章民 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1129-1136,共8页
C-型凝集素样蛋白是一类钙离子依赖型的具有糖结合活性的非酶蛋白,可结合凝血因子及血小板而影响人体的凝血系统稳态,具有抗凝作用。本研究基于中介蝮(Gloydius intermedius)蛇毒C-型凝集素样蛋白α链和β链的部分核苷酸序列,设计了2对... C-型凝集素样蛋白是一类钙离子依赖型的具有糖结合活性的非酶蛋白,可结合凝血因子及血小板而影响人体的凝血系统稳态,具有抗凝作用。本研究基于中介蝮(Gloydius intermedius)蛇毒C-型凝集素样蛋白α链和β链的部分核苷酸序列,设计了2对PCR引物,通过RT-PCR技术从中介蝮毒腺中克隆出的α和β链(Gi-CTLPα,Gi-CTLPβ)的全长c DNA,克隆入T载体后,对所获克隆进行了测序,并进行了生物信息学分析。结果表明,Gi-CTLPα、Gi-CTLPβ的开放阅读框(ORF)分别为477 bp和462 bp,分别编码158个和153个氨基酸,信号肽分别为21个和23个氨基酸。蛋白质一级结构同源性分析表明,Gi-CTLPα和Gi-CTLPβ之间的序列相似度为29%,Gi-CTLPα和β分别与日本蝮(Gloydius blomhoffi)的Mamushiginα亚基和β亚基的同源性最高(90%和93%),Gi-CTLPα和Mamushigin的α亚基氨基酸序列的差异主要有13个,Gi-CTLPβ和Mamushigin的β亚基氨基酸序列的差异主要有7个。用蛋白功能预测软件SIFT在线分析表明,Gi-CTLPα中第47和136位的氨基酸差异使得Gi-CTLPα与Mamushiginα的功能明显不同,而Gi-CTLPβ和Mamushiginβ亚基的功能没有明显差异。由于Gi-CTLPα和β链会像Mamushigin那样通过二硫键形成异二聚体,这些一级结构的差异会影响其与靶蛋白的结合特性,这一结果为下一步研究Gi-CTLP的功能及利用奠定了理论基础。 展开更多
关键词 中介蝮 蛇毒C-型凝集素样蛋白 Cdna 克隆 生物信息学
原文传递
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部