猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立 被引量：11

1

作者 马震原 王淑娟 +5 位作者 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王华俊 王东方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期574-583,共10页

为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备... 为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争化学发光酶联免疫 定量

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竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗 被引量：3

2

作者 王毅谦 陆慧媛 +4 位作者 袁芳 徐恒 方云涛 沈伟健 于洋 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第11期4518-4524,共7页

目的：建立一种检测盐酸克伦特罗（clenbuterol, CLB）的竞争化学发光酶免疫测定法（chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA）。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）,通过优化反应... 目的：建立一种检测盐酸克伦特罗（clenbuterol, CLB）的竞争化学发光酶免疫测定法（chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA）。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）,通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系pH建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的 CLEIA 法与 LC-MS 法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。 展开更多

关键词 竞争化学发光酶免疫测定法 竞争酶联免疫吸附测定法 盐酸克伦特罗

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直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物 被引量：6

3

作者 李亚楠 王瑞 +2 位作者 李涛 王云贵 黄登宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第8期231-235,共5页

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度... 建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1%牛血清白蛋白,竞争反应1h。该方法的线性检测范围为0.030~10.595 ng/m L,IC_（50）为0.559 ng/m L;加标回收率为84.9%~103.4%,批内变异系数为3.4%~7.8%,批间变异系数为4.7%~11.8%;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查。 展开更多

关键词 呋喃妥因 1-氨基-乙内酰脲 直接竞争化学发光酶免疫检测 动物组织

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酱油与白酒中邻苯二甲酸二甲酯的化学发光酶免疫分析方法研究 被引量：6

4

作者 朱彬 朱帆 +6 位作者 徐振林 杨金易 柳春红 孙远明 王弘 雷红涛 沈玉栋 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1027-1032,共6页

本研究以邻苯二甲酸二甲酯（ DMP）为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二甲酯为半抗原,通过重氮化法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DMP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被原浓度为50μg/L,一抗... 本研究以邻苯二甲酸二甲酯（ DMP）为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二甲酯为半抗原,通过重氮化法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DMP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被原浓度为50μg/L,一抗浓度为92.5μg/L,二抗浓度为1μg/mL,药物稀释液为pH 6.0的纯水,竞争反应时间为40 min,基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫分析法检测DMP。本方法对DMP的检出限为0.29μg/L,线性检测范围为0.74-30.32μg/L,与13种结构和功能类似物的交叉反应率均〈5%,通过倍比稀释降低白酒、酱油样品基质干扰,对样品的平均回收率在80.2%-116.0%之间,平均相对标准偏差〈3.6%,结果与GC-MS法的测定结果相符。本方法适用于食品样品中DMP的快速检测。 展开更多

关键词 邻苯二甲酸二甲酯 化学发光酶免疫分析 白酒 酱油

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直接竞争化学发光酶免疫法检测氟喹诺酮类药物方法的建立 被引量：1

5

作者 曹敬政 安静 +5 位作者 蒋蔚 辛思培 宋斌 李思 王权 孙卫东 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期48-58,共11页

建立一种能够快速检测动物源性食品中多种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争化学发光酶免疫法。用诺氟沙星(NOR)分子修饰后制备的完全抗原免疫小鼠,获得对10种氟喹诺酮类药物具有广谱特异性的单克隆抗体,采用二因子交叉试验确定包被原与酶... 建立一种能够快速检测动物源性食品中多种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争化学发光酶免疫法。用诺氟沙星(NOR)分子修饰后制备的完全抗原免疫小鼠,获得对10种氟喹诺酮类药物具有广谱特异性的单克隆抗体,采用二因子交叉试验确定包被原与酶标抗体的最佳稀释度,通过单因素试验优化最佳包被条件、封闭液种类、竞争反应时间,从而建立反应过程的最佳条件,并对方法的灵敏度、交叉反应率、精密度进行评价。结果表明:NOR-1-OVA包被浓度0.3μg/mL,酶标抗体的稀释倍数为1∶8000时为最佳稀释浓度;4℃包被过夜,封闭液为1%BSA,竞争时间为1 h时为最优反应条件。对10种氟喹诺酮类药物的灵敏度(IC50)为1.46~11.57 ng/mL,交叉反应率为12.6%~118.9%,并且与其他非喹诺酮类药物无交叉反应率;检出限为0.07~0.27 ng/mL,且批内差异和批间差异均低于10%;加标回收率为73.3%~103.1%,变异系数为1.9%~11.8%。以上结果表明,该方法可作为动物源性食品中10种FQs残留检测的常规方法。 展开更多

关键词 氟喹诺酮类药物 直接竞争化学发光酶免疫反应 药物检测

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竞争化学发光酶免疫分析检测血清透明质酸方法的建立 被引量：2

6

作者 刘爱霞 侯俊 +5 位作者 刘佳 徐军 赵静 郭静霞 闫静肖 李伯安 《中国医药导报》 CAS 2013年第24期162-163,165,共3页

目的建立人血清透明质酸(HA)化学发光酶免疫定量检测分析方法。方法以偶联了牛血清白蛋白的透明质酸包被,以辣根过氧化物酶标记透明质酸结合蛋白(HABP),以过氧化氢(H2O2)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用竞争法的反应模式... 目的建立人血清透明质酸(HA)化学发光酶免疫定量检测分析方法。方法以偶联了牛血清白蛋白的透明质酸包被,以辣根过氧化物酶标记透明质酸结合蛋白(HABP),以过氧化氢(H2O2)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用竞争法的反应模式,优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等条件。同时进行回收实验、热稳定性等实验,并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的检出限为6.12μg/L,批内和批间变异均小于10%。检测HA的临床高、中、低值血清回收率为分别为93.5%、95.6%和101.2%;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7 d的稳定性考察,线性相关系数均>0.98,标准偏差<9%。比对实验分析证明2种方法差异无统计学意义(P=0.62>0.05)。结论成功建立定量HA微孔板化学发光酶免疫分析方法,该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性,并与进口试剂检测结果一致。 展开更多

关键词 透明质酸 竞争化学发光酶免疫分析 肝纤维化

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虾肉中呋喃它酮代谢物化学发光酶免疫分析方法的建立 被引量：12

7

作者 杨武英 董洁娴 +5 位作者 沈玉栋 杨金易 王弘 徐振林 杨星星 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1816-1821,共6页

采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,建立了虾肉中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)残留的间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法。检测所用抗体是基因重组的抗AMOZ衍生物单链抗体。优化的icCLEI... 采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,建立了虾肉中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)残留的间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法。检测所用抗体是基因重组的抗AMOZ衍生物单链抗体。优化的icCLEIA最佳工作条件为:AMOZA-OVA包被浓度62.5μg/L,抗AMOZ衍生物单链抗体最佳稀释度为1∶10,竞争免疫反应时间45 min,HRP酶标记羊抗鼠抗体最佳稀释度为1∶10000,孵育时间50 min。本方法的IC50为1.38μg/L;灵敏度为0.09μg/L;线性范围为0.26～9.08μg/L(IC20～IC80);批内和批间相对标准偏差均小于15%;抗AMOZ衍生物单链抗体与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物均没有交叉反应,特异性良好。4个不同添加量的AMOZ加标样品的平均回收率分别为72.2%,73.4%,72.6%和78.6%。与HPLC-MS/MS法测定值进行比较发现,两种方法相关性良好(R2=0.9997)。本方法可用于水产品中AMOZ残留的快速检测。 展开更多

关键词 呋喃它酮代谢物AMOZ 刀额新对虾 间接竞争化学发光酶免疫分析 辣根过氧化物酶

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家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：9

8

作者 熊挺 蒋蔚 +4 位作者 韩阳瑞 龙梦瑶 凌娇 王权 孙卫东 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第2期122-130,共9页

为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法（ic-CLEIA）与直接竞争化学发光酶联免疫分析法（dc-CLEIA）检测家禽饲料中玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）的方法,采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和... 为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法（ic-CLEIA）与直接竞争化学发光酶联免疫分析法（dc-CLEIA）检测家禽饲料中玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）的方法,采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和dc-CLEIA。结果显示：icCLEIA在0.05-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.383 5x＋0.417 9（R^2=0.994 6）,灵敏度（IC50）为0.611 ng/m L,检出限（LOD）为15 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.79%和1.02%,家禽饲料添加样品回收率为91.9%-112.1%,变异系数小于10.5%;dcCLEIA在0.025-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.386 5x＋0.334 1（R^2=0.991 8）,灵敏度（IC50）为0.372 ng/m L,检出限（LOD）为3 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.16%和1.20%,添加样品回收率为87.3%-119.3%,变异系数小于9.8%。结果表明：两种方法精确,灵敏度高,均可作为定量检测ZEN的有效手段;与ic-CLEIA相比,dc-CLEIA更适用于检测家禽饲料中的ZEN。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 间接竞争化学发光酶联分析法 直接竞争化学发光酶联分析法 家禽饲料

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直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶 被引量：7

9

作者 楚金申 许杨 +2 位作者 何庆华 王刘花 卢江 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第10期124-129,共6页

建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为:利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质... 建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为:利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。 展开更多

关键词 磺胺嘧啶 直接竞争化学发光酶免疫法 辣根过氧化物酶 猪肉

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重金属铜化学发光酶联免疫快速检测方法的建立 被引量：4

10

作者 杨浩 程龙球 +3 位作者 黄建芳 朱柳蓉 刘洋 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期584-590,共7页

目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原... 目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原,建立铜间接竞争CLEIA法,并对其准确度、精密度、特异性和稳定性进行评价;采集植物中草药和土壤样品共31份,通过微波消解联合沉淀法进行前处理并制备待测样,由间接竞争CLEIA法进行铜含量测定,以ICP-AES仪器法所测结果为对照评价其可靠性。结果:该方法检测灵敏度为17. 9 ng/ml,检测限为1. 9 ng/ml,线性范围为3. 0～200 ng/ml;准确度试验回收率为98. 8%～105. 5%,精密度试验RSD≤5. 0%;特异性试验仅与Mg^(2+)、Zn^(2+)有13. 3%、3. 3%的交叉反应;酶标板置-20℃避光保存6周内其检测结果准确性未出现明显改变。对植物中草药和土壤样品进行前处理并制样检测,对比ICP-AES法检测结果,相关系数分别为0. 972和0. 989,两种方法具有较好相关性,表明间接竞争CLEIA法可应用于一般环境样品中铜的简便快速定量测定。结论:成功建立铜间接竞争CLEIA检测法,其灵敏度及各参数均符合国家法定相关样品铜离子检测技术指标的要求,可应用于一般环境样品中铜含量的快速测定。 展开更多

关键词 铜离子 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫

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呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立 被引量：1

11

作者 黄登宇 高文静 +3 位作者 黄种乾 高丽霞 冯敏 杨秀松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期294-299,共6页

建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度... 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075~7.396 ng/m L,半抑制浓度IC_(50)为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。 展开更多

关键词 呋喃唑酮 间接竞争化学发光酶免疫法 动物源性食品 快速检测

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保健食品中西地那非化学发光免疫分析方法研究 被引量：1

12

作者 程智 张咏仪 +5 位作者 杨金易 徐振林 王弘 雷红涛 孙远明 沈玉栋 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1503-1508,共6页

针对保健食品中西地那非药物的非法添加问题,该研究采用辣根过氧化物酶(HRP)与鲁米诺为信号输出系统,结合直接竞争模式探索了保健食品中西地那非的直接竞争化学发光酶免疫分析方法。基于特异性多克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免... 针对保健食品中西地那非药物的非法添加问题,该研究采用辣根过氧化物酶(HRP)与鲁米诺为信号输出系统,结合直接竞争模式探索了保健食品中西地那非的直接竞争化学发光酶免疫分析方法。基于特异性多克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原质量浓度为41.67 ng/mL,酶标抗体质量浓度为1.25μg/mL,封闭液和洗涤液的吐温-20含量为0.05%,稀释液的甲醇添加量为5%,竞争反应时间为40 min。在该条件下,建立了西地那非的直接竞争化学发光免疫分析方法,该方法对西地那非的半抑制浓度(IC_(50))为0.17 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.024~1.21 ng/mL,检出限(IC_(10),LOD)为0.008 ng/mL。与他达那非等功能类似物无显著交叉;西地那非样品的加标回收率为82.0%~114%,相对标准偏差均小于15%。盲样检测结果与HPLC-MS/MS确证方法具有良好一致性,说明该方法准确可靠,适用于样品中西地那非的快速筛查。 展开更多

关键词 西地那非 直接竞争化学发光酶联免疫分析(dcCLEIA) 保健食品 辣根过氧化物酶(HRP)

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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：1

13

作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多

关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫分析

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沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

14

作者 李思 蒋蔚 +5 位作者 程婷婷 卢春慧 辛思培 曹敬政 王权 孙卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1772-1783,共12页

为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞... 为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫(ic-CLEIA)检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1∶4×106;包被原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释比为1∶750000,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1∶10000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限(LOD)为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。 展开更多

关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫 残留检测

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