对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resol...对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resolution凝胶过滤层析，得到电泳纯酶。酶的活性回收率为21．3％，纯化倍数为35．6，比酶活由1．28U／mg提高到45．54U／mg。SDS—PAGE电泳显示其表观分子量为57．3kDa。酶学性质研究表明，该酶最适反应温度为45℃，在15℃时的酶活为最高酶活的40％，4℃时的酶活为最高酶活的23％。该酶对热敏感，45℃保温45min酶活全部丧失。纯酶的最适PH为7．0，在pH6．5～7．5时保持稳定。5mmol／LNa^＋、Ca^2＋、Cu^2＋、Al^3＋、Zn^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用，其中Al^3＋抑制K^＋作用最强，Na^＋、Ca^2＋抑制作用不明显。5mmol／LMg^2＋、K^＋对酶活力具有促进作用，其中Mg^2＋促进作用较强，使酶活提高到1．19倍。25℃以ONPG为底物的Vmax，Km值分别为7．19mol／（min·mL）、4．64mmol／L。展开更多
文摘对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resolution凝胶过滤层析，得到电泳纯酶。酶的活性回收率为21．3％，纯化倍数为35．6，比酶活由1．28U／mg提高到45．54U／mg。SDS—PAGE电泳显示其表观分子量为57．3kDa。酶学性质研究表明，该酶最适反应温度为45℃，在15℃时的酶活为最高酶活的40％，4℃时的酶活为最高酶活的23％。该酶对热敏感，45℃保温45min酶活全部丧失。纯酶的最适PH为7．0，在pH6．5～7．5时保持稳定。5mmol／LNa^＋、Ca^2＋、Cu^2＋、Al^3＋、Zn^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用，其中Al^3＋抑制K^＋作用最强，Na^＋、Ca^2＋抑制作用不明显。5mmol／LMg^2＋、K^＋对酶活力具有促进作用，其中Mg^2＋促进作用较强，使酶活提高到1．19倍。25℃以ONPG为底物的Vmax，Km值分别为7．19mol／（min·mL）、4．64mmol／L。
