期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到147篇文章
< 1 2 … 8 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
基于密码子优化策略的新型冠状病毒主蛋白酶在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定 被引量：21
1
作者 陈云雨 付正豪 +2 位作者 闫干干 林媛 刘晓平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1334-1345,共12页
新型冠状病毒主蛋白酶(Main protease,Mpro)在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,且Mpro在冠状病毒中的进化高度保守并不易突变,已成为新型广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。为了制备高纯度、高活性的Mpro,根据密码子偏... 新型冠状病毒主蛋白酶(Main protease,Mpro)在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,且Mpro在冠状病毒中的进化高度保守并不易突变,已成为新型广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。为了制备高纯度、高活性的Mpro,根据密码子偏爱性原则,将优化的Mpro基因分别连接到pET-21a与pET-28a表达载体中构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,分别进行原核表达条件优化,所表达的重组蛋白质命名为Mpro与Mpro-28。Mpro与Mpro-28经HisTrapTM亲和层析法分离纯化后,以荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验进行生物学活性鉴定。FRET实验结果表明,纯化的Mpro具有良好的水解活性,Km值为11.68μmol/L,kcat值为0.037/s,比活力不低于25000 U/mg,约为Mpro-28的25倍,说明天然的氨基端对Mpro的生物学功能是必需的,羧基端残留的多聚组氨酸标签对其水解活性影响较小。文中基于密码子优化策略,成功地进行了新冠病毒Mpro在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向Mpro广谱抗冠状病毒药物高通量筛选模型的建立奠定了实验基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 主蛋白酶 密码子优化 原核表达 荧光共振能量转移
原文传递
膜蛋白原核表达的基因序列优化 被引量：1
2
作者 王世山 陈艳可 杨俊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期50-55,共6页
膜蛋白的结构与功能研究是当前的热点之一。目前获取膜蛋白的最主要途径是通过原核系统进行表达。但是膜蛋白在原核系统中表达水平相对较低,通过对基因序列进行优化促使膜蛋白正确高效表达是一项非常重要的技术手段。归纳了近些年来膜... 膜蛋白的结构与功能研究是当前的热点之一。目前获取膜蛋白的最主要途径是通过原核系统进行表达。但是膜蛋白在原核系统中表达水平相对较低,通过对基因序列进行优化促使膜蛋白正确高效表达是一项非常重要的技术手段。归纳了近些年来膜蛋白原核表达技术在基因序列优化研究上的最新进展,并从稀有密码子的优化、m RNA的稳定性与翻译起始、m RNA与核糖体行为、翻译的效率与膜蛋白的折叠4个方面对基因序列上影响膜蛋白表达的因素进行了总结,旨在为膜蛋白的原核表达提供一定的思路和参考。 展开更多
关键词 膜蛋白 超量表达 基因序列优化 密码子优化 MRNA稳定性 翻译速率 膜蛋白折叠
下载PDF
PD-L1胞外域密码子优化及原核表达纯化
3
作者 方宇 吕舰 王志华 《医学研究杂志》 2021年第12期49-54,共6页
目的获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白... 目的获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析。结果在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16℃,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白。结论成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA适体提供实验基础,为通过DNA/RNA适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路。 展开更多
关键词 PD-L1 原核表达 密码子优化 SELEX
下载PDF
基因设计对重组蛋白表达的影响研究进展 被引量：18
4
作者 蔡海莺 李杨 +1 位作者 张辉 冯凤琴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1201-1213,共13页
利用异源表达系统生产重组蛋白已成为现代基因工程和生物工程研究热点和重点。但是研究者发现并非所有的基因都能在异源宿主中高效表达,除了宿主、分泌途径、启动子等因素外,基因自身的序列也蕴含了多种影响蛋白表达的因素,如密码子偏爱... 利用异源表达系统生产重组蛋白已成为现代基因工程和生物工程研究热点和重点。但是研究者发现并非所有的基因都能在异源宿主中高效表达,除了宿主、分泌途径、启动子等因素外,基因自身的序列也蕴含了多种影响蛋白表达的因素,如密码子偏爱性,密码子对偏爱性,GC含量,mRNA二级结构,mRNA稳定性等。从基因设计的角度对影响蛋白表达的因素和方法进行了综述,尤其是对密码子优化和密码子对优化,详细讨论了与传统基因优化理念截然不同的密码子协调化及密码子对协调化等最新进展。 展开更多
关键词 重组表达 基因设计 基因优化 密码子优化 密码子协调化 密码子对偏爱性
原文传递
利用密码子优化提高Bt cry1Ah基因在转基因玉米(Zea mays L.)中的表达 被引量：15
5
作者 李圣彦 郎志宏 +4 位作者 朱莉 李秀影 张杰 何康来 黄大昉 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第6期20-26,共7页
Bt cry1Ah基因是本实验室从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BT8中克隆的一种新型杀虫蛋白基因。在前期工作中已根据植物密码子偏好性对cry1Ah基因进行过一次优化。根据玉米密码子偏好性对cry1Ah基因进行第二次优化,并将... Bt cry1Ah基因是本实验室从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BT8中克隆的一种新型杀虫蛋白基因。在前期工作中已根据植物密码子偏好性对cry1Ah基因进行过一次优化。根据玉米密码子偏好性对cry1Ah基因进行第二次优化,并将两次优化的cry1Ah基因分别构建了pAhmG和pmAhb植物表达载体,利用农杆菌介导法转化玉米自交系综31,分别得到10株和9株阳性转基因玉米植株。通过ELISA、Westernblot检测及生物活性检测,比较不同优化的基因在玉米中的蛋白表达量及抗虫情况。初步结果表明外源基因在玉米植株中可以稳定表达并可以遗传。二次优化基因比一次优化基因在玉米中的蛋白表达量更高,抗虫性更好。表明密码子优化有利于提高外源基因的表达。 展开更多
关键词 cry1Ah基因 密码子优化 抗虫玉米
下载PDF
蝎毒镇痛活性肽基因BmK AngM1的密码子优化及其真核表达分析 被引量：13
6
作者 杨金玲 高丽丽 +4 位作者 朱平 侯琦 王芬 于文博 聂涛 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1389-1393,共5页
密码子的偏爱性是影响基因异源表达的重要因素,通过对外源基因的密码子序列进行优化可提高其表达水平。为了获得蝎毒镇痛活性肽基因BmK AngM1在毕赤酵母中的高效表达,根据毕赤酵母密码子偏爱性,将BmK AngM1基因中的毕赤酵母低利用率密... 密码子的偏爱性是影响基因异源表达的重要因素,通过对外源基因的密码子序列进行优化可提高其表达水平。为了获得蝎毒镇痛活性肽基因BmK AngM1在毕赤酵母中的高效表达,根据毕赤酵母密码子偏爱性,将BmK AngM1基因中的毕赤酵母低利用率密码子突变为其高利用率简并密码子,克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达;重组蛋白表达量测定结果显示,优化后的BmK AngM1基因在毕赤酵母中的表达水平是优化前的3.7倍。研究结果表明,密码子优化能显著提高BmK AngM1基因在毕赤酵母中的表达水平。 展开更多
关键词 东亚钳蝎 镇痛活性肽 毕赤酵母 密码子优化 基因表达
原文传递
脯氨酸-4-羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式-4-羟脯氨酸生物合成的作用 被引量：11
7
作者 刘合栋 袁春伟 张震宇 《生物加工过程》 CAS CSCD 2014年第6期44-51,共8页
为了使脯氨酸-4-羟化酶基因在重组大肠杆菌中得到高表达,通过调整大肠杆菌密码子偏好性以及mRNA二级结构,使得脯氨酸-4-羟化酶基因得到优化。将优化后的脯氨酸-4-羟化酶基因插入含有色氨酸串联启动子的p UC19质粒,构建重组质粒p UC19-pt... 为了使脯氨酸-4-羟化酶基因在重组大肠杆菌中得到高表达,通过调整大肠杆菌密码子偏好性以及mRNA二级结构,使得脯氨酸-4-羟化酶基因得到优化。将优化后的脯氨酸-4-羟化酶基因插入含有色氨酸串联启动子的p UC19质粒,构建重组质粒p UC19-ptrp2-Hyp,并导入大肠杆菌BL21(DE3)中。在摇瓶水平,重组菌以L-脯氨酸为底物发酵8 h,可积累(0.492±0.034)g/L的反式-4-羟脯氨酸。在发酵罐水平,通过补料分批发酵来提高反式-4-羟脯氨酸的产量,当补糖速率为18 g/h时,反式-4-羟脯氨酸的产量高达42.5 g/L,反式-4-羟脯氨酸产率为0.966 g/(L·h)。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 脯氨酸 4 羟化酶 反式 4 羟脯氨酸 密码子优化 发酵 条件优化
下载PDF
一种密码子优化的酸性普鲁兰酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达 被引量：11
8
作者 王兵波 沈微 +4 位作者 钱灵紫 李琛 罗枭 樊游 陈献忠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期9-15,共7页
根据毕赤酵母密码子偏好性对来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶基因进行优化并构建在细胞内表达普鲁兰酶的重组毕赤酵母。优化后普鲁兰酶编码基因Bd P4在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达水平平均比优化前的普鲁兰酶基因Bd P提高4倍以... 根据毕赤酵母密码子偏好性对来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶基因进行优化并构建在细胞内表达普鲁兰酶的重组毕赤酵母。优化后普鲁兰酶编码基因Bd P4在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达水平平均比优化前的普鲁兰酶基因Bd P提高4倍以上。筛选到1株表达水平较高的重组菌Pichia pastoris GS115/p PIC9K-Bd P4 WB54。在5 L发酵罐获得了初步优化的发酵条件:发酵液p H 4.5,在菌体量达到87 g/L时开始甲醇流加,采用溶氧(DO)恒定策略控制甲醇流加,DO控制在25%的水平,甲醇流加速率为9.9 m L/(L·h),搅拌转速控制在最大值800 r/min,通风量2 V/(v·m)。在优化条件下重组菌发酵酶活在2 000 U/m L以上。重组酶最适p H为4.0,最适作用温度50℃,在50和55℃下酶活半衰期分别为32和18 h。 展开更多
关键词 酸性普鲁兰酶 密码子优化 巴斯德毕赤酵母 高密度发酵
下载PDF
基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：8
9
作者 孙元 夏照和 +2 位作者 梁冰冰 彭伍平 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期315-319,共5页
根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法... 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 密码子优化 杆状病毒表达系统 间接ELISA
下载PDF
密码子优化的植酸酶基因appA-P在毕赤酵母中的高效表达 被引量：9
10
作者 黄光瑞 田丽春 +2 位作者 黄生平 蒋思婧 马立新 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期290-293,共4页
根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子使用偏爱性,对Escherichia coli来源的高比活植酸酶基因（appA）全面地进行密码子优化,人工合成了植酸酶基因（appA-P）,并将该基因克隆到毕赤酵母诱导型分泌表达载体pHBM905A上,获得重组质粒pHBM... 根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子使用偏爱性,对Escherichia coli来源的高比活植酸酶基因（appA）全面地进行密码子优化,人工合成了植酸酶基因（appA-P）,并将该基因克隆到毕赤酵母诱导型分泌表达载体pHBM905A上,获得重组质粒pHBM905A-appA-P,通过PEG1000转化法将线性化的重组质粒转化毕赤酵母GS115菌株,筛选得到一个高效表达植酸酶的重组菌株GS115-appA-P,在25℃摇瓶培养168 h后酶活力达到422 U/mL,该植酸酶最适反应温度为60℃,最适反应pH为4.5,在20-50℃、pH1.0-6.0范围内较稳定. 展开更多
关键词 高比活植酸酶基因 毕赤酵母 密码子优化 高效表达
下载PDF
解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达 被引量：8
11
作者 张黎 赵鹤云 +2 位作者 徐莉 刘云 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期969-974,共6页
【目的】克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y.lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用... 【目的】克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y.lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pG AP9K上,电转至P.pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵,以对硝基苯酚酯为底物检测脂肪酶水解活力,并对表达产物进行酶学性质分析。【结果】从Y.lipolytica中成功克隆了脂肪酶基因lip1(GenBank:Z50020),全长1461bp,编码486个氨基酸残基,无内含子,无信号肽;密码子优化后基因表达水平相对于出发基因有较大提高,且组成型表达优于诱导型;Lip1酶学性质分析表明,其最适底物为pNPB(C4),45℃下Tris-Hcl缓冲液pH8.5时最大水解酶活为8.07U/mL。【结论】Y.lipolytica脂肪酶基因lip1的克隆丰富了脂肪酶基因资源,其高效基因工程菌的构建为将来实现规模化生产奠定了技术基础。 展开更多
关键词 解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1 克隆 密码子优化 GAP启动子 功能表达
原文传递
黑曲霉阿魏酸酯酶基因密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达 被引量：7
12
作者 李兵 蔡国林 +1 位作者 朱德伟 陆健 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1065-1073,共9页
【目的】对黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶基因进行克隆和密码子优化,使其在毕赤酵母(Pichia pastoris X-33)中高效表达。【方法】以黑曲霉基因组为模板,经重叠延伸PCR扩增得到阿魏酸酯酶基因(Anfae A),并对Anfae A基因进行毕赤... 【目的】对黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶基因进行克隆和密码子优化,使其在毕赤酵母(Pichia pastoris X-33)中高效表达。【方法】以黑曲霉基因组为模板,经重叠延伸PCR扩增得到阿魏酸酯酶基因(Anfae A),并对Anfae A基因进行毕赤酵母密码子偏好性"随机优化"和"一对一优化",全基因合成后分别与表达载体pPICZαA连接,构建表达载体pPICZαA-Anfae A、pPICZαA-op Anfae A I和pPICZαA-op Anfae A II。经Sac I线性化后电转化至P.pastoris X-33中,筛选阳性转化子。摇瓶发酵4.5 d后,测定并比较重组阿魏酸酯酶(re Anfae A)酶活。【结果】密码子优化前阿魏酸酯酶酶活为6.8±0.1 U/m L,基因"一对一优化"和"随机优化"后的重组酶酶活分别为5.2±0.1 U/m L和39.9±0.1 U/m L,"随机优化"后酶活比优化前提高了近6倍,而"一对一优化"后酶活仅为优化前酶活的76.5%。重组阿魏酸酯酶的最适p H为5.5,且在pH 4.5-7.0稳定性较好;最适反应温度50°C,在45-50°C较稳定。【结论】阿魏酸酯酶基因经密码子"随机优化"后进行重组表达,酶活显著提高,对研究阿魏酸酯酶在毕赤酵母及其它宿主中的高效表达具有一定的借鉴意义,也为大规模工业化应用奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 毕赤酵母 阿魏酸酯酶 密码子优化
原文传递
枯草芽孢杆菌优化表达蛋白质谷氨酰胺酶的研究
13
作者 王新秀 尹航 +5 位作者 邢天悦 刘紫薇 吴思 张会 李杰 双宝 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期13-21,31,共10页
蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,PG)作用于大分子蛋白质或其小侧链的谷氨酰胺,使其脱酰胺变成谷氨酸可提高蛋白质溶解性和乳化性,在食品行业应用广泛。PG来源于解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum),但原始解脘金黄杆... 蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,PG)作用于大分子蛋白质或其小侧链的谷氨酰胺,使其脱酰胺变成谷氨酸可提高蛋白质溶解性和乳化性,在食品行业应用广泛。PG来源于解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum),但原始解脘金黄杆菌菌株表达PG产量较低。为提高蛋白质谷氨酰胺酶表达水平,将来源于解朊金黄杆菌的蛋白质谷氨酰胺酶基因优化密码子,将密码子换成枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)偏爱密码子,再将密码子优化前后的PG基因分别连接至表达载体pBSA43,最后转化到枯草芽孢杆菌WB600中进行高效表达。结果显示,密码子优化前重组菌株的PG酶活力为1.83 U·mL^(-1),优化后重组菌株的PG酶活力为2.91 U·mL^(-1)。为进一步提高PG表达水平,经响应面分析优化后,确定最佳发酵条件:发酵时间为62.3 h,发酵温度为32.5℃,培养基初始pH为7.24。在该条件下,密码子优化后重组菌株PG酶活力为5.76 U·mL^(-1)。来源于解朊金黄杆菌的蛋白质谷氨酰胺酶基因经密码子优化后,表达水平明显提高,为蛋白质谷氨酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达提供参考。 展开更多
关键词 密码子优化 枯草芽孢杆菌 蛋白质谷氨酰胺酶 异源表达 响应面分析
下载PDF
朱黄青霉α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达 被引量：6
14
作者 黄曾慰 梁达奉 +3 位作者 曾练强 吴兆鹏 马步 常国炜 《广西科学》 CAS 2014年第6期614-618,共5页
【目的】提高朱黄青霉(Penicillium minioluteum)α-葡聚糖酶(Dextranase)基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达水平。【方法】根据毕赤酵母的密码子偏爱对酶基因进行优化与合成。优化后的基因片段与载体pGAPZαA连接,转化毕赤酵母K... 【目的】提高朱黄青霉(Penicillium minioluteum)α-葡聚糖酶(Dextranase)基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达水平。【方法】根据毕赤酵母的密码子偏爱对酶基因进行优化与合成。优化后的基因片段与载体pGAPZαA连接,转化毕赤酵母KM71H。【结果】获得组成型分泌表达α-葡聚糖酶的工程菌KM71H/pGAPZαA-dex。发酵工艺试验中,摇瓶培养144h,酶活为153U/mL。6.8L发酵罐补料分批培养92h,酶活达到1218U/mL。【结论】该工程菌以甘油作为碳源,发酵调控简单,产酶水平较高,具有适用于大规模生产的潜力。 展开更多
关键词 α-葡聚糖酶 密码子优化 毕赤酵母 重组菌
下载PDF
来源于瘤胃厌氧真菌Neocallimastix frontalis木聚糖酶在毕赤酵母中的表达 被引量：6
15
作者 汪艳 李晓 +1 位作者 陈勇 武运 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期186-193,共8页
厌氧真菌Neocallimastix frontalis是瘤胃中降解木聚糖和纤维素的主要微生物之一,其木聚糖酶具有潜在的应用价值。对来源于Neocallimastix frontalis木聚糖酶基因Xyn11B进行密码子优化;通过全基因合成优化后的木聚糖酶基因Xyn11Bm,构建... 厌氧真菌Neocallimastix frontalis是瘤胃中降解木聚糖和纤维素的主要微生物之一,其木聚糖酶具有潜在的应用价值。对来源于Neocallimastix frontalis木聚糖酶基因Xyn11B进行密码子优化;通过全基因合成优化后的木聚糖酶基因Xyn11Bm,构建该基因的酵母表达载体p PIC9K-Xyn11Bm,并在毕赤酵母GS115中诱导表达。摇瓶水平时,重组Xyn11Bm酶活性最高为4 874.8U/m L。在10 L发酵罐中诱导96 h后,重组Xyn11Bm的酶活性为5 139.7 U/m L,菌体湿重和干重达到216.7 g/L和117.3 g/L。酶学性质分析表明,重组Xyn11Bm的最适反应温度为50℃,最适反应p H为5.0。在p H5.0-8.0时该酶具有较好的稳定性,但温度稳定性较差。底物特异性分析表明,重组Xyn11Bm可水解燕麦木聚糖、桦木木聚糖和可溶性木聚糖4-O-Me-D-glucurono-D-xylan,但不降解地衣多糖和大麦β-葡聚糖。结果表明重组Xyn11Bm具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 Neocallimastix frontalis 木聚糖酶 毕赤酵母 密码子优化 酶学性质
下载PDF
重组猪乳铁蛋白N端的高效表达及抑菌活性检测 被引量：6
16
作者 哈卓 赵丽丽 +7 位作者 于晓旭 宗晓淋 毛雅元 张健 李一经 葛俊伟 乔薪瑗 唐丽杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期523-529,共7页
为获得表达猪乳铁蛋白基因的重组菌株,并检测其表达的重组猪乳铁蛋白抑菌活性,应用RT-PCR方法从泌乳3d后母猪乳腺组织中扩增了猪乳铁蛋白N端1077bp的PLF-N基因片段,与GenBank上发表的4株猪乳铁蛋白基因序列相比,核苷酸同源性均达到99%... 为获得表达猪乳铁蛋白基因的重组菌株,并检测其表达的重组猪乳铁蛋白抑菌活性,应用RT-PCR方法从泌乳3d后母猪乳腺组织中扩增了猪乳铁蛋白N端1077bp的PLF-N基因片段,与GenBank上发表的4株猪乳铁蛋白基因序列相比,核苷酸同源性均达到99%以上。为了得到高表达量的PLF-N基因,以扩增的PLF-N片段为参考模板,经过密码子优化,全基因合成了编码猪乳铁蛋白N端的基因PLF-NS。将其定向插入到原核表达载体pET-30b中,转化大肠杆菌BL21,获得了表达PLF-NS的重组菌pET-PLF-NS/BL21;经IPTG诱导,并对表达条件进行优化,以及通过SDS-PAGE和Western blotting分析均表明猪乳铁蛋白得到了正确表达,其产物分子量约为42kDa,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经裂解、纯化、复性处理后纯度达到98%。用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明重组猪乳铁蛋白具有明显的抑菌作用。表明通过基因优化对表达量低的基因进行改造使之高效表达,是一种提高表达效率的有效手段。 展开更多
关键词 猪乳铁蛋白 基因优化 高效表达 抑菌活性
原文传递
产L-阿拉伯糖异构酶基因工程菌的构建及优化
17
作者 张艳芳 王晓茹 +1 位作者 张一帆 张春枝 《大连工业大学学报》 CAS 2024年第4期257-260,共4页
L-阿拉伯糖异构酶(L-AI)可专一性的作用于底物D-半乳糖,生成D-塔格糖。为获得高产L-AI的菌株,将来源于短乳杆菌L.brevis sp. D-tag 1的L-AI编码基因araA基因连接到pET-30a(+)表达质粒中构建重组质粒,并将重组质粒通过热激法转入E.coli B... L-阿拉伯糖异构酶(L-AI)可专一性的作用于底物D-半乳糖,生成D-塔格糖。为获得高产L-AI的菌株,将来源于短乳杆菌L.brevis sp. D-tag 1的L-AI编码基因araA基因连接到pET-30a(+)表达质粒中构建重组质粒,并将重组质粒通过热激法转入E.coli BL21(DE3),构建得到基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-araA。根据宿主大肠杆菌的密码子偏好性,对araA基因进行密码子优化,并将优化的araA_o基因连接到pET-30a(+)表达质粒中构建重组质粒,采用相同的方法构建得到基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-araA_(o)。结果表明,在相同培养条件下,优化后的菌株较未优化的表达量有明显提高,酶活提高了79.2%。 展开更多
关键词 L-阿拉伯糖异构酶 D-塔格糖 密码子优化
下载PDF
基因改造AiiA蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：6
18
作者 简思美 蔡斌斌 +3 位作者 吴程 何晶晶 曾世涌 杨梅 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期55-63,共9页
基于毕赤酵母基因组偏好密码子数据表对编码Aii A蛋白的碱基序列进行密码子优化,并构建多拷贝重组Oaii A表达载体p PICZαB-x Oaii A(x=1,2,3),成功表达出具有活性的Aii A蛋白.实验结果表明,优化后Oaii A基因的表达量(2.64 mg·L-1... 基于毕赤酵母基因组偏好密码子数据表对编码Aii A蛋白的碱基序列进行密码子优化,并构建多拷贝重组Oaii A表达载体p PICZαB-x Oaii A(x=1,2,3),成功表达出具有活性的Aii A蛋白.实验结果表明,优化后Oaii A基因的表达量(2.64 mg·L-1)较优化前aii A的表达量(1.38 mg·L-1)提高约两倍.优化后二拷贝和三拷贝表达量分别为2.84 mg·L-1和2.93 mg·L-1.结果表明密码子优化可以有效提高Aii A蛋白在毕赤酵母中的表达,但是多拷贝表达载体对Aii A的表达促进作用并不显著.提示未来在探索Aii A蛋白在毕赤酵母中的高表达时,通过增加拷贝数来提高产量并不是一个很好的途径,而进行密码子的优化可以有效提高产量. 展开更多
关键词 N-酰基高丝氨酸内酯酶(AHLase) 密码子优化 多拷贝 毕赤酵母
原文传递
呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证
19
作者 姜人月 庄忻雨 +8 位作者 田明尧 唐家凤 狄亚心 杨松惠 许智强 于潼 张桐 金鑫 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第5期497-501,共5页
目的制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证。方法对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs。在转染至293T细胞后,利用... 目的制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证。方法对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs。在转染至293T细胞后,利用Western blot和间接免疫荧光试(IFA)来确定目标蛋白的表达情况。通过微流控装置制备LNP/mRNAs疫苗免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体效价,评估免疫效果。结果成功构建重组质粒Pre-F-GCN4t和mDS-Cav1,通过双酶切验证条带符合预期大小。表达目的抗原大小为57.57 ku和64.35 ku。成功检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体,Pre-F-GCN4t免疫组的效果优于mDS-Cav1组,3次免疫较2次免疫提升了2倍,抗体效价最高可达1∶4×10^(4)。结论两种抗原设计模式均具有可行性,Pre-F-GCN4t的设计方式对于激活机体的体液免疫应答更有优势,mRNA疫苗无需体内转录,为呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的优化设计提供理论基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 mRNA疫苗 密码子优化 体液免疫
原文传递
猪泛素基因与PRRSV GP5基因融合表达质粒的构建及其免疫效果 被引量：4
20
作者 侯艳红 周艳君 +3 位作者 闫丽萍 田志军 杨汉春 童光志 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期413-418,共6页
构建了泛素(ubiquitin,Ub)基因与密码子优化的PRRSV GP5蛋白(optiGP5)基因融合表达质粒pIR-Ub-optiGP5。间接免疫荧光和Western-blot分析表明,重组质粒转染293T细胞后能够瞬时表达。将pIR-optiGP5和pIR-Ub-optiGP5两种质粒DNA肌肉注射免... 构建了泛素(ubiquitin,Ub)基因与密码子优化的PRRSV GP5蛋白(optiGP5)基因融合表达质粒pIR-Ub-optiGP5。间接免疫荧光和Western-blot分析表明,重组质粒转染293T细胞后能够瞬时表达。将pIR-optiGP5和pIR-Ub-optiGP5两种质粒DNA肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,分别检测小鼠血清中抗GP5抗体、T淋巴细胞的增殖能力以及CTL活性。结果显示,pIR-optiGP5质粒免疫组在二免后可以检测到荧光抗体,而pIR-Ub-optiGP5质粒免疫组一直未检测到抗GP5抗体,但该免疫组的T淋巴细胞增殖指数及针对GP5的特异性CTL反应数值明显高于pIR-optiGP5质粒免疫组。这表明泛素与GP5的融合表达可增强细胞免疫反应。 展开更多
关键词 泛素 PRRSV GP5 密码子优化 DNA免疫
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 8 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部