辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)新疆加工型辣椒分离物的鉴定和致病型分析 被引量：15

1

作者 张强 张春竹 +2 位作者 李克梅 罗明 楚金平 《中国农学通报》 CSCD 2014年第25期296-302,共7页

为明确侵染新疆南疆巴州加工型辣椒主产区的辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）的致病型,利用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和基因克隆、序列分析对南疆巴州加工型辣椒主产区的辣椒病样进行PMMoV的检测... 为明确侵染新疆南疆巴州加工型辣椒主产区的辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）的致病型,利用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和基因克隆、序列分析对南疆巴州加工型辣椒主产区的辣椒病样进行PMMoV的检测及其致病型鉴定。结果表明,从辣椒植株、椒果及种子样品中均检测到PMMoV。通过对预期576 bp大小的3个PMMoV扩增产物进行克隆、测序和序列分析表明,PMMoV新疆加工型辣椒分离物CP基因的核苷酸和氨基酸序列与已报道的PMMoV分离物具有较高同源性,分别为89.0%-99.2%和95.5%-100.0%;其中,与PMMoV以色列分离物EF434393同源性最高,PMMoV新疆各分离物之间CP基因高度同源。依据CP基因序列及系统发育分析将PMMoV新疆加工型辣椒分离物划分为P1,2致病型。 展开更多

关键词 辣椒 辣椒轻斑驳病毒(PMMoV) 外壳蛋白(cp)基因 克隆 P1 2致病型

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瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果 被引量：5

2

作者 竺晓平 刘金亮 +3 位作者 田延平 于晓庆 李向东 刘红梅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页

RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因... RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因构建非翻译的正义、反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,通过农杆菌渗入法瞬时表达测试了这些转基因对RNA介导抗性的诱导效率和有效性.结果表明,反向重复的PVXCP是更为有效的RNA沉默诱导因子,同时也证明让目的基因在受试植物中瞬时表达,在转化植物之前能比较快速地检测转基因的表达情况以及表达产物的功能,从而节约时间和资源,并减少盲目性. 展开更多

关键词 RNA沉默 马铃薯X病毒(PVX) 外壳蛋白(cp)基因 农杆菌渗入 抗性

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马铃薯卷叶病毒分离株外壳蛋白基因和17k蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：7

3

作者 吴志明 朱水芳 +1 位作者 田文会 张成良 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期62-66,72,共6页

从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA ,根据PLRV外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,经RT -PCR法扩增出全长的cDNA片段 ,将其克隆到质粒pGEM - 3Zf (+)上 ,并进行了序列分析。结果表明 ,克隆的cDNA片段由 6 2 ... 从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA ,根据PLRV外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,经RT -PCR法扩增出全长的cDNA片段 ,将其克隆到质粒pGEM - 3Zf (+)上 ,并进行了序列分析。结果表明 ,克隆的cDNA片段由 6 2 7个核苷酸组成 ,编码 2 0 8个氨基酸组成的理论分子量为2 3k的蛋白 ,与PLRV外壳蛋白的大小一致 ;此外克隆片段还含有一个不同于外壳蛋白基因的阅读框架 ,该框架由 46 5个核苷酸组成 ,编码 15 5个氨基酸组成的理论分子量为 17k的蛋白 ,与PLRV的 17k蛋白大小一致。与国外报道的几个株系相比 ,PLRV分离物的外壳蛋白基因及 17k蛋白基因的核苷酸同源率分别高达97 5 %～ 99 7%和 96 5 %～ 99 6 % ,由此推测的氨基酸同源率高达 97 6 %～ 99 5 %和 96 1%～ 99 4% ,说明所克隆的PLRV外壳蛋白基因和 17k蛋白基因具有高度的保守性 ,本研究克隆了PLRV分离物外壳蛋白和17k蛋白基因的序列 。 展开更多

关键词 序列分析 马铃薯卷叶病毒 外壳蛋白基因 基因克隆 基因表达

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齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立 被引量：1

4

作者 徐匆 黄皓 +3 位作者 黄晓彦 陈彦 李昀哲 郑芝波 《贵州农业科学》 CAS 2023年第4期86-92,共7页

【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序... 【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序列保守区,使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针,建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒,并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定;以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测;以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测;用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板,其余模板检测结果为阴性,说明检测方法具有特异性;该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数为130;大田兰花样品感染齿兰环斑病毒的检出率为100%。【结论】一步法RT-qPCR是一种特异性强、灵敏度高,且适合监测实际生产过程中兰花感染齿兰环斑病毒情况的检测方法。 展开更多

关键词 兰花 齿兰环斑病毒(ORSV) 反转录-荧光定量PCR(RT-qPCR) 外壳蛋白(cp)基因

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我国北方稻区水稻条纹病毒分子变异和水稻品种抗病性分析 被引量：5

5

作者 张世贤 李莉 +1 位作者 王锡锋 周广和 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期45-50,共6页

为了明确我国北方稻区水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）群体的分子变异和水稻品种的抗性情况，测定了2004年和2005年从我国6省9个地区采集的34个RSV分离物的外壳蛋白（coat protein，CP）基因的序列，并对其进行了分析，同时用... 为了明确我国北方稻区水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）群体的分子变异和水稻品种的抗性情况，测定了2004年和2005年从我国6省9个地区采集的34个RSV分离物的外壳蛋白（coat protein，CP）基因的序列，并对其进行了分析，同时用强致病性江苏分离物（RSV-JS）对河南、安徽、山东、河北等省的25个推广品种进行了抗性研究。结果表明，供试RSV分离物间的核苷酸序列一致性和氨基酸序列的一致性分别在93．9％～100％和96．3％～100．0％之间。根据CP基因核苷酸序列一致性，所有分离物可以分为2组。云南4个分离物为一组，其余为一组。在第2组中各分离物CP基因的核苷酸序列和氨基酸序列的一致性与地域无必然联系。且在2年之内，RSV CP基因变异不大。抗病性鉴定表明同一分离物在不同水稻品种上表现不同症状。表现高抗（HR）的品种占供试品种的24％；60％以上的品种表现为感病，且不同水稻品种上表现不同症状。因此，我国北方稻区RSV的CP基因非常保守，但同一分离物在不同水稻品种上可能表现不同症状，不同水稻品种对RSV抗性有显著差异。这些结果为我国北方稻区水稻条纹叶枯病防治和抗病毒基因工程提供了理论依据。 展开更多

关键词 水稻条纹病毒 cp基因 分子变异 抗性鉴定

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贵州马铃薯Y病毒外壳蛋白基因的克隆与遗传分析 被引量：5

6

作者 邱又彬 陶刚 +3 位作者 李奇科 刘作易 郑世玲 朱英 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第3期524-530,共7页

本研究从中国贵州不同海拔地区采集感染马铃薯Y病毒(PVY)病害叶片,利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)方法克隆到长度为804bp的8个目的片段,序列分析表明为PVY外壳蛋白(PVY-CP)基因。通过与已经发表的PVY-CP基因序列进行比较和遗传分析,并根... 本研究从中国贵州不同海拔地区采集感染马铃薯Y病毒(PVY)病害叶片,利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)方法克隆到长度为804bp的8个目的片段,序列分析表明为PVY外壳蛋白(PVY-CP)基因。通过与已经发表的PVY-CP基因序列进行比较和遗传分析,并根据PVY的CP基因全长和5'端序列构建系统发育树,结果表明,本研究分离的PVY,7株为O株系,1株为NTN株系。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 外壳蛋白基因 遗传分析

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四个李属坏死环斑病毒分离物的检测鉴定及CP基因序列分析 被引量：3

7

作者 朱良俊 商晗武 +1 位作者 姜永厚 周京花 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期403-409,共7页

采用RT-PCR方法,从北京昌平、云南昆明、陕西西安和浙江海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到李属坏死环斑病毒,为分析我国李属坏死环斑病毒分子生态学特性,克隆了病毒分离物的CP基因并进行序列分析。结果显示,北京分离物的CP基因长675nt... 采用RT-PCR方法,从北京昌平、云南昆明、陕西西安和浙江海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到李属坏死环斑病毒,为分析我国李属坏死环斑病毒分子生态学特性,克隆了病毒分离物的CP基因并进行序列分析。结果显示,北京分离物的CP基因长675nt、编码224aa,而西安、昆明和海宁分离物的CP基因均为681nt、编码226aa。序列相似性分析表明,4个分离物的CP基因之间具有很高的同源性,各个分离物间的核苷酸同源性在94.8%～99.3%之间,氨基酸同源性在94.2%～98.7%之间。序列比对与系统发生树的分析结果显示,北京分离物属于GroupⅡ组,昆明、西安和海宁分离物属于GroupⅠ组。 展开更多

关键词 李属坏死环斑病毒(PNRSV) RT—PCR 外壳蛋白(cp)基因 系统发生树分析

原文传递

苹果茎沟病毒外壳蛋白抗体制备与应用 被引量：2

8

作者 谭嘉琦 韩秀清 +2 位作者 成思琼 吴云锋 郝兴安 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期787-792,共6页

从苹果寄主上分离得到了苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)中国株系。经基因克隆,测序后发现苹果茎沟病毒中国株系外壳蛋白基因(coat protein,CP)含有714个核苷酸,编码表达由237氨基酸残基组成的27 ku蛋白。通过构建含有ASG... 从苹果寄主上分离得到了苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)中国株系。经基因克隆,测序后发现苹果茎沟病毒中国株系外壳蛋白基因(coat protein,CP)含有714个核苷酸,编码表达由237氨基酸残基组成的27 ku蛋白。通过构建含有ASGV-CP基因的重组表达载体pECASGV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达ASGV-CP蛋白。SDS-PAGE显示其分子质量与预计大小一致。利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体。该抗体可用于Western blot和DAS-ELISA检测技术。基于血清学检测,发现陕西苹果主产区ASGV发生普遍。 展开更多

关键词 苹果茎沟病毒 外壳蛋白基因 多克隆抗体 蛋白检测

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中国马铃薯Y病毒的检测鉴定及CP基因的分子变异 被引量：29

9

作者 高芳銮 沈建国 +3 位作者 史凤阳 方治国 谢联辉 詹家绥 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期3125-3133,共9页

【目的】查明马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)病在中国的发生情况,及时、准确地鉴定出PVY并对其分子变异进行分析。【方法】采用ELISA方法对采自中国14个省(直辖市)马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行了检测,并对其中的部分材料镜检... 【目的】查明马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)病在中国的发生情况,及时、准确地鉴定出PVY并对其分子变异进行分析。【方法】采用ELISA方法对采自中国14个省(直辖市)马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行了检测,并对其中的部分材料镜检验证,然后根据CP基因序列设计1对简并引物针对随机选择感染PVY的14个省(直辖市)代表样品进行CP基因扩增克隆,将测序得到的序列进行分子变异分析,并使用贝叶斯法(Bayesian inference,BI)重建系统发育关系。【结果】ELISA检测结果表明,691份样品中220个样品与PVY抗体呈阳性反应,其余呈阴性反应;ELISA检测的阳性材料在透射电镜下均可观察到明显的风轮状内含体,14个PVY分离物均成功扩增出预期大小(约800 bp)的特异性片段,CP基因的核苷酸序列与已报道PVY不同株系的核苷酸序列一致性均在88%以上;在14个PVY分离物CP基因中共发现有29个多态性位点,其中6个简约信息位点,23个单一变异位点。系统发育分析结果显示,14个PVY分离物与PVYN:O株系相聚成簇,表明其在系统发育关系上,与PVYN:O株系的亲缘关系最近。【结论】PVY CP基因高度保守,但不同地区分离物也存在一定的分子变异,本研究可为今后了解PVY病毒病流行、变异趋势及其防治提供依据。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 ELISA 外壳蛋白基因 分子变异 贝叶斯法

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低温胁迫对黄瓜花叶病毒CMV-BG株系cp基因多态性的影响 被引量：1

10

作者 张兴桃 李艳红 +4 位作者 高贵珍 曹稳根 刘小阳 王海潮 袁维风 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期292-295,共4页

研究了低温胁迫下黄瓜花叶病毒与三生烟互作后CMV cp基因序列的变化规律,并分析了植物RNA病毒的进化机制。用黄瓜花叶病毒北京甘蓝分离物(CMV-BG)侵染三生烟不同单株,置于不同温度条件下(常温和低温)培养30 d后,对CMV cp基因进行克隆、... 研究了低温胁迫下黄瓜花叶病毒与三生烟互作后CMV cp基因序列的变化规律,并分析了植物RNA病毒的进化机制。用黄瓜花叶病毒北京甘蓝分离物(CMV-BG)侵染三生烟不同单株,置于不同温度条件下(常温和低温)培养30 d后,对CMV cp基因进行克隆、序列测定和多态性分析。结果表明,侵染低温组植物CMV的cp基因多态性(Pi=0.001 76)高于常温组(Pi=0.001 14),IFEL分析检测到低温组第48个氨基酸位点为正选择位点,初步表明低温胁迫有助于提高CMV-BG cp基因序列的多态性,温度胁迫是植物RNA病毒与宿主互作过程中基因序列变异的一种重要的作用力。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 低温 cp基因 多态性

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花粉管通道技术转化番木瓜的初步研究 被引量：3

11

作者 蔡群芳 魏军亚 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第1期16-19,共4页

以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%... 以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%和12.93%,随机选择每种载体的种子100粒播种,成株率分别为61%和60%.对T1幼苗(除含空载体外)全部进行PCR检测.检测结果为质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液转化所得的幼苗阳性率分别为50.54%和51.22%. 展开更多

关键词 番木瓜 花粉管通道法 PRSV—cp基因 PCR检测

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