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clpE基因缺失对肺炎链球菌毒力的影响 被引量：1
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作者 张群 尹楠林 +5 位作者 胥文春 王虹 庞丹 杨晓亮 尹一兵 张雪梅 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期233-238,共6页
【目的】探索clpE基因缺失对肺炎链球菌毒力的影响。【方法】用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpE基因,用PCR、测序鉴定缺失菌株,通过动物实验观察clpE基因缺失株毒力改变情况,同时用细胞实验比较clpE基因缺失株和野生菌对... 【目的】探索clpE基因缺失对肺炎链球菌毒力的影响。【方法】用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpE基因,用PCR、测序鉴定缺失菌株,通过动物实验观察clpE基因缺失株毒力改变情况,同时用细胞实验比较clpE基因缺失株和野生菌对宿主细胞的粘附和侵袭能力,最后用实时荧光定量PCR分析自溶素(major autolysin A,lytA)、表面黏附素A(pneumococcal surface adhesion A,psaA)、溶血素(pneumolysin,ply)、肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,pspA)和神经氨酸酶(neuraminidase,nanA)的表达。【结果】小鼠毒力实验表明野生菌株半数致死时间54h,而缺失株半数致死时间为21d,两者比较有统计学差异(P<0.01);缺失菌在对宿主细胞的粘附能力明显低于野生菌株(P<0.05)。实时荧光定量PCR显示clpE缺失株的五个毒力因子mRNA表达水平均低于野生菌,两者比较有统计学差异(P<0.05);【结论】ClpE通过调控肺炎链球菌多种毒力因子表达,而影响其毒力。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 毒力因子 实时荧光定量PCR 细菌粘附 clpe基因
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clpE缺陷对肺炎球菌蛋白表达的影响
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作者 张群 尹楠林 +5 位作者 张雪梅 王虹 刘鑫 崔亚丽 尹一兵 胥文春 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1533-1537,1540,共6页
目的了解ClpE对肺炎球菌蛋白表达的影响。方法用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpE基因,用PCR、测序鉴定缺陷菌株;通过固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离野生菌和clpE缺陷菌的总蛋白质;经凝胶银染色、PDQuest2DE软件... 目的了解ClpE对肺炎球菌蛋白表达的影响。方法用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpE基因,用PCR、测序鉴定缺陷菌株;通过固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离野生菌和clpE缺陷菌的总蛋白质;经凝胶银染色、PDQuest2DE软件分析获得2个菌株的蛋白质表达谱;选取差异蛋白质点进行MEDLI-TOF质谱分析,查询数据库,获取有意义的蛋白点。结果以肺炎链球菌D39的图谱为参考,△clpE与其匹配率为61%。挑选17个有明显差异表达的蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,获得了17张肽质量指纹图,经数据库查询后,4个蛋白点获得了有意义的结果,分别为:次黄嘌呤鸟嘌呤核糖核酸转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase),吡咯烷羧酸肽酶(pyrrolidone-carboxylate peptidase1),甲酸四氢叶酸连接酶(formate-tetrahydrofolate ligase)和双功能蛋白pyrR(bifunctional proteinpyrR)。结论野生菌表达蛋白的种类和数量均高于突变菌株,提示ClpE可通过影响某些特殊蛋白质的表达,帮助细菌适应宿主的不同环境,使宿主致病。 展开更多
关键词 肺炎球菌 双向凝胶电泳 热休克蛋白 clpe基因
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