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小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养及鉴定 被引量：1
1
作者 边艳超 牧仁 +5 位作者 牛丽丽 姜丽丽 温建勋 王忆霄 李蕊秀 肖瑞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第13期8-11,238,239,共6页
为了探讨并完善小鼠骨骼肌卫星细胞（satellite cells,SCs）的原代分离培养技术,试验通过对SCs的取材、分离、消化、培养等步骤的改进获得SCs,并应用差速贴壁法进行纯化,从形态学、生长曲线、克隆形成能力、冻存复苏活力、SCs表面标记... 为了探讨并完善小鼠骨骼肌卫星细胞（satellite cells,SCs）的原代分离培养技术,试验通过对SCs的取材、分离、消化、培养等步骤的改进获得SCs,并应用差速贴壁法进行纯化,从形态学、生长曲线、克隆形成能力、冻存复苏活力、SCs表面标记物的检测、成肌细胞分化能力及RT-PCR鉴定等方面对SCs进行研究。结果表明：分离获得的小鼠骨骼肌SCs呈梭形或纺锤形,细胞饱满且折光性强,生长曲线呈标准的＂S＂型,克隆形成率高达（56.11±1.73）%,冻存复苏后细胞活率为（96.67±0.87）%,表达desmin、c-Met、Myf5、Myo D等SCs表面特异性标记物,成肌细胞诱导分化后能形成多核肌管并表达成肌细胞表面特异性标记物Mylpf。说明小鼠骨骼肌SCs体外培养获得成功。 展开更多
关键词 骨骼肌卫星细胞 分离 培养 鉴定 克隆形成能力 成肌细胞分化及鉴定
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miR-194对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、凋亡的影响及其机制 被引量：4
2
作者 王纯斌 袁琳 +3 位作者 王梅娟 沈福军 黎超 赵明宏 《山东医药》 CAS 2019年第15期10-14,共5页
目的 观察微小RNA-194(miR-194)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 取A549细胞和人正常肺上皮细胞16HBE,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-194。常规培养A549细胞,经脂质体分别转染miR-194抑制物、miR... 目的 观察微小RNA-194(miR-194)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 取A549细胞和人正常肺上皮细胞16HBE,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-194。常规培养A549细胞,经脂质体分别转染miR-194抑制物、miR-194模拟物(mimics)、对照48h(分别计为A、B、C组),采用qRT-PCR验证转染效果,MTS法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blotting法检测细胞JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白。结果 A549、16HBE细胞中miR-194相对表达量分别为1.00±0.10、8.17±0.14,两者比较,P<0.05。A、B、C组miR-194相对表达量分别为0.31±0.11、8.35±0.31、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组转染24、48、72h的OD值分别为0.494±0.069、0.843±0.084、1.111±0.109,B组分别为0.355±0.026、0.510±0.049、0.706±0.087,C组分别为0.427±0.022、0.664±0.068、0.906±0.060,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A、B、C组细胞克隆数目分别为(232.12±10.82)、(43.67±10.97)、(127.33±6.43)个,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。与C组比较,A组细胞凋亡现象及数目明显减少,B组细胞凋亡现象及数目明显增多;A、B、C组细胞凋亡率分别为4.58%±1.01%、21.45%±1.78%、10.23%±1.65%,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白相对表达量分别为5.97±0.24、4.52±0.18、0.11±0.04,B组分别为0.34±0.03、0.21±0.02、7.21±0.79,C组分别为1.00±0.10、1.00±0.10、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。结论 miR-194能抑制A549细胞的增殖、克隆形成能力,并诱导细胞凋亡,其机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路并促进活化的Caspase-3蛋白表达有关。 展开更多
关键词 微小RNA-194 非小细胞肺癌 细胞增殖能力 细胞克隆形成能力 细胞凋亡能力 JAK2/STAT3信号通路 活化的Caspase-3蛋白
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基因工程原理教学探索——以克隆策略教学为例 被引量：4
3
作者 刘增然 张光一 +1 位作者 张香美 赵士豪 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期509-515,共7页
克隆策略是分子生物学研究和生物制品开发必不可少的工具,生物技术及相关专业的学生应该有扎实的理论基础和足够的应用经验。由于实践机会少,大学生做到学以致用很难。为了让学生更好地掌握克隆技术,我们在基因工程原理课程教学中采用... 克隆策略是分子生物学研究和生物制品开发必不可少的工具,生物技术及相关专业的学生应该有扎实的理论基础和足够的应用经验。由于实践机会少,大学生做到学以致用很难。为了让学生更好地掌握克隆技术,我们在基因工程原理课程教学中采用了基本理论+论文案例的课堂教学模式进行克隆策略的教学。通过创设问题任务、拓展知识点,完成克隆策略基本原理和主要方法的课堂教学,使学生全面系统掌握基因克隆的流程和可用方法;通过教师引导的自学、讨论、自教完成应用论文的学习,使学生获得基于克隆策略设计实验的技能和方法选择的技能。教学实践证明,基本理论与论文案例嵌合的教学模式可以弥补课堂学习与实际应用之间的差距,使学生的实验设计技能、解决问题的能力得以提高,逻辑思维的严谨性、缜密性得以培养。 展开更多
关键词 克隆策略 实验设计 应用能力 自主学习
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水稻ptc1隐性核不育系的创制及其配合力分析 被引量：3
4
作者 李京琳 李佳林 +5 位作者 李新鹏 安保光 曾翔 吴永忠 黄培劲 龙湍 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2173-2183,共11页
细胞质雄性不育系和光温敏雄性不育系是目前杂交水稻育种、制种中广泛利用的两种不育系,然而这两种不育系分别具有组配不自由和育性不稳定的缺陷。隐性核雄性不育系可以克服上述缺陷,创制、鉴定和利用细胞核雄性不育系将成为新一代杂交... 细胞质雄性不育系和光温敏雄性不育系是目前杂交水稻育种、制种中广泛利用的两种不育系,然而这两种不育系分别具有组配不自由和育性不稳定的缺陷。隐性核雄性不育系可以克服上述缺陷,创制、鉴定和利用细胞核雄性不育系将成为新一代杂交水稻技术的重要环节。本研究通过筛选9311的辐射诱变突变体库,获得了一个无花粉型隐性核雄性不育突变体ptc1-2。图位克隆发现ptc1-2的突变位点位于9号染色体上,是一段包含PTC1编码区在内259.37 kb的大片段缺失。共分离检测表明,雄性不育表型是由ptc1-2突变位点造成的。通过分子标记辅助选择将ptc1-2突变位点回交转育至两系不育系C815S和三系保持系五丰B中,在BC3F3世代分别获得与轮回亲本性状相似的隐性核不育系C815G和五丰G。配合力分析表明,C815G和五丰G分别具有与C815S和三系不育系五丰A基本相同的配合力水平。本研究为隐性核不育系的创制提供了新的基因和材料资源,并证实了隐性核不育系代替现有三系和两系不育系的可行性。 展开更多
关键词 水稻 雄性不育 ptc1 图位克隆 回交转育 配合力分析
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