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卵巢癌细胞外泌体抑制外周单个核细胞源性树突状细胞成熟的机制研究
1
作者 董育清 王怡 +5 位作者 李丽华 司胜斌 汤业珍 董晓微 盛青松 赵薇 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期520-526,共7页
目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联... 目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合刺激的办法诱导CD14^(+)/PBMC分化为未成熟树突状细胞(iDCs),光镜确认细胞形态;超速离心提取卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体(A2780cis-外泌体),蛋白质印迹法检测其特征性蛋白标志物,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测外泌体粒径分布;iDCs与A2780cis-外泌体共培养后给予重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导,流式细胞术检测CD83^(+)/HLA-DR^(+)/CD1a^(+)细胞比例变化。结果超速离心提取的卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体,TEM下可检测到直径约为60 nm的“杯盏状”外泌体颗粒。蛋白质印迹法结果显示A2780cis细胞各蛋白表达均为1,A2780cis-外泌体中CD9、CD81和CD63相对表达量分别为1.08±0.07、0.67±0.04和1.78±0.19,t值分别为2.928、13.760和7.900,P值分别为0.043、<0.001和0.001;但A2780cis-外泌体无Calnexin表达。NTA检测显示,外泌体粒径范围主要集中于(56.80±1.60)nm。经流式细胞术检测CD14磁珠分选前后CD14^(+)/PBMC比例分别为(10.20±0.53)%和(97.60±0.26)%,t=255.900,P<0.001。rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导的CD14^(+)/PBMC,细胞胞体变大,伸出半圆形、梭形、星形等毛刺状突起,形态不规则,表现为iDCs形态特征;rhTNF-α刺激iDCs后,细胞毛刺状突起明显增多,细胞贴壁能力增强,而A2780cis-外泌体与iDCs共培养组接受rhTNF-α刺激后,细胞毛刺状突起较少,细胞贴壁能力减弱。流式细胞术检测结果显示,rhTNF-α诱导前细胞CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(86.27±2.25)%、(67.43±0.64)%、(69.50±0.46)%、(68.20±0.46)%和(5.87±0.55)%,符合iDCs抗原表型特征;TNF-α诱导48 h后,CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(9 展开更多
关键词 顺铂耐药卵巢癌细胞株 外泌体 体外培养 树突状细胞 流式细胞术
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大黄素对顺铂耐药卵巢癌细胞的逆转作用及其相关基因表达研究 被引量：7
2
作者 秦春明 侯华新 +4 位作者 程道海 李力 黎丹戎 刘瑛 宋慧 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2011年第4期638-642,共5页
为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP... 为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP)的逆转作用;采用Real-time PCR技术检测耐药相关基因HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达情况。结果发现无细胞毒作用浓度的7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素能逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性,对DDP的逆转倍数分别为1.91倍和1.30倍,与SKOV3比较,SKOV3/DDP细胞的HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达明显升高(P<0.01)。3.9 mg/L和7.8 mg/L大黄素作用均可下调HIF-1α、CK2α、STAT1 mRNA表达,存在剂量-效应依赖关系。7.8 mg/L大黄素作用可下调GSTP1 mR-NA表达,但3.9 mg/L大黄素作用不明显。7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素联合IC50浓度的DDP时,四个耐药相关基因的表达与单独化疗药组作用相比明显下调(P<0.01)。提示无细胞毒浓度的大黄素对卵巢癌细胞耐药逆转的作用可能是通过下调HIF-1α、STAT1、GSTP1、CK2α的表达起作用。 展开更多
关键词 大黄素 卵巢癌耐顺铂细胞 耐药逆转 HIF-1α STAT1 GSTP1 CK2α
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