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茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝品质及抗氧化活性的影响 被引量:27
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作者 季悦 李静 +2 位作者 王雷 金鹏 郑永华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期258-263,共6页
研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切... 研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切菠萝总酚含量和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力上升,抑制可溶性固形物及可滴定酸含量下降,而对色泽及菌落总数无显著影响(P>0.05)。其中,10μmol/L茉莉酸甲酯处理效果最好,能显著地诱导鲜切菠萝贮藏期间苯丙氨酸解氨酶和肉桂酸-4-羟化酶活力的上升(P<0.05),延缓4-香豆酸辅酶A连接酶活力的下降(P<0.05),从而促进总酚和总黄酮的积累,提高DPPH自由基清除能力。这些结果表明,茉莉酸甲酯处理可保持鲜切菠萝的品质并提高其抗氧化活性。 展开更多
关键词 茉莉酸甲酯 鲜切菠萝 苯丙氨酸解氨酶 肉桂酸-4-羟化酶 4-香豆酸辅酶A连接酶 抗氧化活性
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桂花C4H基因的克隆与表达特性分析 被引量:19
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作者 曾祥玲 郑日如 +1 位作者 罗靖 王彩云 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期525-537,共13页
利用转录组测序获得的表达序列信息,结合RACE技术,从桂花(Osmanthus fragrans)花瓣中克隆到两个参与苯丙烷代谢第2步反应的肉桂酸–4–羟基化酶(C4H)基因。其ORF全长分别为1 518 bp和1 611 bp,各自编码505和536个氨基酸,命名为OfC4H1和O... 利用转录组测序获得的表达序列信息,结合RACE技术,从桂花(Osmanthus fragrans)花瓣中克隆到两个参与苯丙烷代谢第2步反应的肉桂酸–4–羟基化酶(C4H)基因。其ORF全长分别为1 518 bp和1 611 bp,各自编码505和536个氨基酸,命名为OfC4H1和Of C4H2(登录号分别为KR861466、KF254842)。系统进化树表明,OfC4H1与矮牵牛中的PhC4H1、PhC4H2等C4H蛋白聚为一类,属于ClassⅠ类型;OfC4H2与金银花中的LjC4H等属于ClassⅡ类型。进一步的C4H蛋白序列多重比较发现,OfC4H1和OfC4H2蛋白具有该基因家族特有的保守结构域,在这些保守结构域中存在区别两类C4H蛋白的典型特征。利用Real-time PCR比较分析了OfC4H1和OfC4H2基因的时空表达模式,结果显示,Of C4H1在花瓣中的表达量最高;OfC4H2在花瓣中的表达量较低,在花梗、雌蕊和幼叶等组织中表达量较高。构建原核表达载体pET6xHN-C4Hs,转化Transetta(DE3)大肠杆菌并诱导表达的结果表明,目的蛋白能在原核表达系统中顺利表达,而且与预期大小一致,但因溶解度较低无法进行酶活性分析。 展开更多
关键词 桂花 肉桂酸4–羟基化酶 黄酮类化合物 原核表达 基因表达
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独行菜C4H基因克隆与表达分析 被引量:12
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作者 赵乐 马利刚 +2 位作者 杨泽岸 冯卫生 郑晓珂 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期821-831,共11页
以独行菜(Lepidium apetalum)为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,克隆了独行菜肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因的cDNA序列,命名为LaC4H,Gen Bank登录号为KX064050,并进行生物信息学分析,原核表达、纯化... 以独行菜(Lepidium apetalum)为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,克隆了独行菜肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因的cDNA序列,命名为LaC4H,Gen Bank登录号为KX064050,并进行生物信息学分析,原核表达、纯化,组织特异性分析和诱导表达分析。结果表明:(1)LaC4H基因开放阅读框(ORF)长1 518 bp,编码505个氨基酸,其蛋白质分子质量为57.73 k D。(2)生物信息学分析显示La C4H蛋白包含细胞色素P450的保守基序和5个特征性底物结合位点,是细胞色素P450超家族成员,系统进化分析显示LaC4H蛋白与拟南芥等十字花科植物C4H蛋白同源性较高。(3)通过构建原核表达载体pET-32a-LaC4H在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaC4H重组蛋白,利用Ni^(2+)亲和色谱得到了纯化的LaC4H重组蛋白。(4)荧光定量PCR结果表明LaC4H基因在茎中表达量最高,叶和花中次之,根中表达量最低。经茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后,叶中LaC4H表达量明显上升,诱导后48 h达到最高值,叶中LaC4H的表达量与黄酮含量之间呈正相关。这为进一步研究LaC4H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 独行菜 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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白木香肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆及表达分析 被引量:10
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作者 梁良 韩晓敏 +4 位作者 张争 郭庆梅 徐艳红 刘娟 廖永翠 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1767-1771,共5页
对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis肉桂酸-4-羟基化酶基因C4H编码区进行克隆,并对其进行生物信息学分析和表达分析。根据已报道的白木香伤害转录组高通量测序结果分析获得1条具有肉桂酸羟化酶酶保守结构域的C4H基因序列,采... 对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis肉桂酸-4-羟基化酶基因C4H编码区进行克隆,并对其进行生物信息学分析和表达分析。根据已报道的白木香伤害转录组高通量测序结果分析获得1条具有肉桂酸羟化酶酶保守结构域的C4H基因序列,采用RT-PCR技术克隆得到白木香C4H基因编码区序列,并对C4H蛋白进行生物信息学分析。另外,采用qRT-PCR方法对C4H基因在伤害胁迫下的表达模式进行分析。序列分析表明,所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码514个氨基酸,GenBank登录号为KF134783。qRT-PCR实验证明C4H基因受不同伤害处理的诱导,分别在8,20 h达到最高表达水平。白木香C4H基因的编码区序列的分离克隆为进一步研究C4H蛋白在白木香中黄酮及芳香族类化合物合成途径中的功能及表达调控奠定基础。 展开更多
关键词 C4H酶 白木香 芳香族化合物 伤害
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苦荞C4H基因的cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:6
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作者 刘荣华 王丽 +2 位作者 孙朝霞 侯思宇 李红英 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第11期767-773,共7页
[目的]为了解植物苯丙烷类代谢途径中关键酶——肉桂酸-4-羟基化酶基因结构特征及系统进化,拟克隆苦荞肉桂酸-4-羟基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因并进行生物信息学分析。[方法 ]本研究通过RT-PCR技术,克隆2个苦荞C4H基因cDNA... [目的]为了解植物苯丙烷类代谢途径中关键酶——肉桂酸-4-羟基化酶基因结构特征及系统进化,拟克隆苦荞肉桂酸-4-羟基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因并进行生物信息学分析。[方法 ]本研究通过RT-PCR技术,克隆2个苦荞C4H基因cDNA和DNA序列,并通过生物信息学分析其基因结构及蛋白理化性质,最大似然树法构建系统进化树。[结果]2个基因cDNA序列长度分别为1 812bp和1 476bp,各编码504和491个氨基酸残基。其DNA序列分别为2 774bp和2 364bp,均包含3个外显子和2个内含子,第1个外显子和2个内含子序列长度存在明显差异。蛋白分子量分别为58.002kDa和56.401kDa,等电点分别为9.18和9.09。2个基因编码氨基酸与苦荞肉桂酸-4-羟基化酶同源性分别为99%和86%,故暂且命名为FtC4H1和FtC4H2。FtC4H1和FtC4H2与其他物种直系同源蛋白聚为两类,FtC4H1和FtC4H2与莴苣和丹参同源蛋白亲缘关系较近,氨基酸序列同源性分别为88%和84%。[结论]本研究通过对苦荞2个C4H基因的核酸、氨基酸序列、蛋白结构及系统进化树进行分析,为后续苯丙烷代谢途径及荞麦基因挖掘利用提供理论基础。 展开更多
关键词 苦荞 肉桂酸-4-羟基化酶 电子克隆 生物信息学分析
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毛竹C4H基因的鉴定及其表达模式分析 被引量:5
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作者 李广柱 朱成磊 +2 位作者 杨克彬 王新悦 高志民 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期151-160,共10页
为了解毛竹(Phyllostachys edulis)中肉桂酸-4-羟化酶基因(C4H)的分子特征及其表达模式,采用生物信息学方法在毛竹基因组数据库中鉴定出6个C4H成员(PeC4H1~PeC4H6),基因编码区长度为1506~1695 bp,推测编码501~564 aa,均具有保守的血红... 为了解毛竹(Phyllostachys edulis)中肉桂酸-4-羟化酶基因(C4H)的分子特征及其表达模式,采用生物信息学方法在毛竹基因组数据库中鉴定出6个C4H成员(PeC4H1~PeC4H6),基因编码区长度为1506~1695 bp,推测编码501~564 aa,均具有保守的血红素结合域、苏氨酸结合槽基序和5个特征性底物识别位点,属于细胞色素P450超家族。系统进化分析表明,6个PeC4Hs可分为2类,分别含有2和4个成员。转录组数据分析表明,PeC4Hs在毛竹26个组织中的表达量存在明显差异,不同高度笋中PeC4Hs的表达差异显著。PeC4Hs启动子序列中含有多种响应逆境胁迫和激素信号的顺式调控元件,PeC4Hs表达受干旱和GA_(3)的影响,干旱时,仅PeC4H3/4在根中显著上调表达,其余成员均呈下调表达;GA_(3)处理下叶中PeC4H3/6迅速响应,呈先显著上调后逐渐降低的趋势,根中PeC4H2/5在处理前1 h短暂下调后又显著上调,至8 h时恢复到处理前的表达水平。因此,PeC4Hs可能在毛竹笋的木质化过程和应对非生物胁迫中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 毛竹 肉桂酸-4-羟化酶 生物信息 基因表达
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Isolation and Expression Analysis of Two Genes Encoding Cinnamate 4-Hydroxylase from Cotton(Gossypium hirsutum) 被引量:3
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作者 NI Zhi-yong LI Bo +2 位作者 Neumann M Peter Lü Meng FAN Ling 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第10期2102-2112,共11页
Two genes (GhC4H1 and GhC4H2) that encode putative cotton cinnamate 4-hydroxylases that catalyze the second step in the phenylpropanoid pathway were isolated from developing cotton fibers. GhC4H1 and GhC4H2 each con... Two genes (GhC4H1 and GhC4H2) that encode putative cotton cinnamate 4-hydroxylases that catalyze the second step in the phenylpropanoid pathway were isolated from developing cotton fibers. GhC4H1 and GhC4H2 each contain open reading frames of 1 518 base pairs (bp) in length and both encode proteins consisting of 505 amino acid residues. They are 90.89% identical to each other at the amino acid sequence level and belong to class I of plant C4Hs. GhC4H1 and GhC4H2 genomic DNA are 2 247 and 2 161 bp long, respectively, and contain two introns located at conserved positions relative to the coding sequence. GhC4HI and GhC4H2 promoters were isolated and found to contain many cis-elements (boxes P, L and AC-1 element) previously identified in the promoters of other phenylpropanoid pathway genes. Histochemical staining showed GUS expression driven by the GhC4H1 and GhC4H2 promoters in ovules and fibers tissues. GhC4H1 and GhC4H2 were also widely expressed in other cotton tissues. GhC4H2 expression reached its highest level during the elongation stage of fiber development, whereas GhC4H1 expression increased during the secondary wall development period in cotton fibers. Our results contribute to a better understanding of the biochemical role of GhC4H1 and GhC4H2 in cotton fiber development. 展开更多
关键词 cinnamate 4-hydroxylase Gossypium hirsutum promoter analysis phenylpropanoid pathway
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红芪HpC4H基因的克隆及其铁盐干预下的表达分析
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作者 何军刚 李昕蓉 +3 位作者 魏小成 谢耀慧 谢鑫明 李成义 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2749-2758,共10页
肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)在调节植物生长发育方面具有重要的作用。为探究红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)黄酮类成分合成的分子调节机制,本研究以红芪幼苗为材料,通过RACE技术,克隆HpC4H基因,并进行生物... 肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)在调节植物生长发育方面具有重要的作用。为探究红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)黄酮类成分合成的分子调节机制,本研究以红芪幼苗为材料,通过RACE技术,克隆HpC4H基因,并进行生物信息学分析和表达模式分析。结果显示:HpC4H基因全长为1634 bp,编码477个氨基酸,蛋白分子量为54.94 kD,不含有信号肽和跨膜结构区。亚细胞定位预测显示,该蛋白定位于内质网中,具有C4H保守功能区并属于细胞色素P450超基因家族。序列分析发现,HpC4H氨基酸序列与柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii Kom.)的相似性高达92.84%。qRT-PCR结果表明,HpC4H基因在红芪不同组织中的表达模式为:根>茎>叶,同时,该基因的表达量在不同浓度铁盐干预下有上调趋势,推测铁盐可能在调控红芪HpC4H基因表达中发挥一定作用,且低浓度铁盐溶液作用显著。 展开更多
关键词 红芪 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 铁盐溶液 基因表达
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枫香C4H基因的克隆及生物信息学分析 被引量:4
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作者 刘雄盛 尹国平 +3 位作者 肖玉菲 王仁杰 黄荣林 王勇 《热带农业科学》 2022年第6期45-52,共8页
肉桂酸-4-羟基化酶(cinnamate4-hydroxylase,C4H)是花色素苷合成过程第二步中的重要酶。以变色期枫香叶片为试验材料,根据前期研究获得的枫香叶片RNA-Seq数据库中筛选的C4H基因序列设计一对引物,利用RT-PCR技术克隆C4H核苷酸序列,命名为... 肉桂酸-4-羟基化酶(cinnamate4-hydroxylase,C4H)是花色素苷合成过程第二步中的重要酶。以变色期枫香叶片为试验材料,根据前期研究获得的枫香叶片RNA-Seq数据库中筛选的C4H基因序列设计一对引物,利用RT-PCR技术克隆C4H核苷酸序列,命名为LfC4Hb;将基因上传至GenBank数据库获得枫香C4H基因的登录号(OL871170),并对其进行生物信息学分析。结果显示:枫香LfC4Hb基因长度为1 551 bp,包含一个1 518 bp的完整开放阅读框,编码505个氨基酸;保守结构域分析显示,LfC4Hb基因编码的蛋白包含一个p450家族蛋白的结构域,分子量为58.00 kDa,理论等电点为9.13,为亲水性的不稳定蛋白质,定位在内质网,存在多个磷酸化位点,无信号肽,不含有跨膜结构域,蛋白的二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,LfC4Hb基因在氨基酸水平与莲同源性最高(94.5%);进化分析结果表明,LfC4Hb与青脆枝亲缘关系相对较近。本研究成功克隆了枫香C4H基因,并分析了LfC4Hb的蛋白质结构功能,对下一步利用基因工程技术进行枫香叶色调控及新品种培育具有重要意义。 展开更多
关键词 枫香 肉桂酸-4-羟基化酶 基因克隆 生物信息学分析
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紫苏肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆与表达 被引量:3
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作者 宋西红 郝磊 +3 位作者 吕晓玲 郭宇 魏曼 赵辰辰 《广东农业科学》 CAS 2015年第11期124-129,共6页
为阐述紫苏中迷迭香酸合成的分子调节机制,应用同源克隆和RACE技术首次从紫苏叶片中克隆得到肉桂酸-4-羟基化酶基因(Per C4H)的全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM434189)。Per C4H基因总长度为1 667 bp,基因的开放阅读框(ORF)为1 518 bp... 为阐述紫苏中迷迭香酸合成的分子调节机制,应用同源克隆和RACE技术首次从紫苏叶片中克隆得到肉桂酸-4-羟基化酶基因(Per C4H)的全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM434189)。Per C4H基因总长度为1 667 bp,基因的开放阅读框(ORF)为1 518 bp,编码505个氨基酸残基,还含有长度为21 bp的5′非编码区(5′UTR)和95 bp的3′非编码区(3′UTR)。系统进化树分析得到Per C4H基因与唇形科植物丹参和黄芩的亲缘性最近。由实时荧光定量PCR分析可知,该基因在紫苏中具有组织表达特异性,根中的表达最高,茎中次之,而叶中最少。一定浓度的赤霉素与茉莉酸甲酯能提高Per C4H的表达量,而脱落酸和黑暗处理能降低Per C4H的表达量。 展开更多
关键词 紫苏 迷迭香酸 肉桂酸4-羟基化酶 基因克隆 表达分析
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舞毒蛾取食诱导小黑杨苯丙烷代谢酶活性及其相关基因的表达 被引量:1
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作者 周心怡 闫丽琼 +3 位作者 吕云彤 孙丽丽 朱靖闻 曹传旺 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第3期108-116,共9页
【目的】探究舞毒蛾取食对小黑杨苯丙氨酸代谢途径中关键酶诱导防御的影响,为明确杨树抗虫性分子机制提供理论依据,并为利用基因工程手段提高寄主抗虫性提供基因材料。【方法】通过RT-PCR法获得小黑杨C4H和4CL基因全长序列,并进行基因... 【目的】探究舞毒蛾取食对小黑杨苯丙氨酸代谢途径中关键酶诱导防御的影响,为明确杨树抗虫性分子机制提供理论依据,并为利用基因工程手段提高寄主抗虫性提供基因材料。【方法】通过RT-PCR法获得小黑杨C4H和4CL基因全长序列,并进行基因特性分析;采用邻接法构建C4H和4CL系统进化树;利用分光光度计法比较舞毒蛾取食和机械损伤处理下小黑杨C4H和4CL活性,并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定2种损伤处理对C4H和4CL基因表达量的影响。【结果】从小黑杨转组文库中克隆鉴定获得2个属于p450家族的C4H基因(命名为C4H-1和C4H-2)以及1个多结构域蛋白超家族(AFD_class_I)4CL基因,全长基因开放阅读框大小为1518~1740 bp,编码505~579个氨基酸,蛋白质分子质量为58.00~63.03 kDa,理论等电点pI为5.63~9.09。系统进化树分析表明,小黑杨C4H-1与银白杨亲缘关系近聚为一类;而C4H-2与毛白杨、欧洲山杨、毛果杨×美洲黑杨和毛果杨具有较高同源性聚为一类,小黑杨4CL与毛果杨×美洲黑杨和毛果杨亲缘关系较近。舞毒蛾取食诱导小黑杨C4H-1、C4H-2和4CL基因表达量增加,分别为对照组的6.86、1.15和1.50倍;而机械损伤诱导C4H-1基因表达上调,抑制C4H-2和4CL基因表达下调,分别为对照组的1.80、0.71和0.60倍。取食和机械损伤均能诱导小黑杨C4H和4CL活性增加,且取食诱导显著高于机械损伤。【结论】舞毒蛾取食显著诱导小黑杨C4H和4CL活性增加,可能分别来源于C4H-1、C4H-2和4CL基因表达量增加。舞毒蛾取食参与诱导小黑杨苯丙氨酸生物合成途径防御反应,可为进一步明确小黑杨诱导抗性机制以及探讨小黑杨木质素合成防御昆虫取食提供基础理论。 展开更多
关键词 舞毒蛾 取食 小黑杨 肉桂酸-4-羟化酶 4-香豆酸CoA连接酶 机械损伤 基因表达
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三叶崖爬藤肉桂酸-4-羟化酶的生物信息学及体外功能研究
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作者 吴丽双 袁莉霞 +1 位作者 张煜炯 王芙蓉 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期78-88,共11页
肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢途径的关键酶之一,在植物黄酮类物质的合成代谢过程中发挥着重要的作用。在受到低温胁迫时中药材三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum)中具有药用价值的黄酮类物质总含量上升,但其机制尚不清楚。本研... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢途径的关键酶之一,在植物黄酮类物质的合成代谢过程中发挥着重要的作用。在受到低温胁迫时中药材三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum)中具有药用价值的黄酮类物质总含量上升,但其机制尚不清楚。本研究通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析低温胁迫下三叶崖爬藤C4H (ThC4H)基因表达量上升的现象,并利用c DNA末端快速扩增(RACE)技术获得ThC4H基因的cDNA全长,随后在酿酒酵母中重组表达,检测其体外活性,并进行三维结构比对和底物分子对接研究。结果表明:该cDNA具有完整的开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸。ThC4H具有C4H家族保守的P450结构域,与花叶地锦(Parthenocissus henryana)的C4H有91.88%的相似性。重组ThC4H蛋白具有体外催化反式肉桂酸生成4-香豆酸的能力。ThC4H、苔藓植物C4H和高粱(Sorghum bicolor) C4H (SbC4H1)与肉桂酸对接位置及形成的氢键基本一致,猜测其催化机制相似,而导致不同C4H酶性质差异的可能原因是2号环(loop)区域和血红素结合域中2个氨基酸的多样性。本研究为进一步探索三叶崖爬藤ThC4H蛋白在抗寒方面的功能提供参考。 展开更多
关键词 三叶崖爬藤 低温胁迫 肉桂酸-4-羟化酶 黄酮
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龙眼Dlc4h基因组织特异性表达及其生物信息学分析
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作者 张秋颖 郑威 +3 位作者 董学明 于雪飞 陈宁 任禾群 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期8039-8049,共11页
肉桂酸4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,c4h)是合成黄酮类化合物的关键酶之一。为了研究Dlc4h基因的结构及其在龙眼次级代谢产物合成中的功能,本研究采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术分析Dlc4h基因在龙眼根、茎、叶组织中的特异性表... 肉桂酸4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,c4h)是合成黄酮类化合物的关键酶之一。为了研究Dlc4h基因的结构及其在龙眼次级代谢产物合成中的功能,本研究采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术分析Dlc4h基因在龙眼根、茎、叶组织中的特异性表达,并对该基因进行了生物信息学分析。定量分析结果表明:Dlc4h基因在各组织中均有表达,表达量由高到低依次为根、茎、叶。生物信息学分析结果表明:该基因全长1 611 bp,编码536个氨基酸;蛋白质相对分子质量为61 389.45 Da,等电点(pI)为8.82;它是一种不含信号肽、有跨膜结构、定位于质膜的可溶性亲水蛋白;二级结构主要包括α-螺旋和无规则卷曲,并具有卷曲螺旋结构;采用SWISS-MODEL构建Dlc4h三级结构模型,运用Ramachandran评估表明该模型准确可靠;Dlc4h预测得到的配体结合位点分别为128Arg、145Val、146Phe、153Trp、157Arg、213Met、329Ile、332Ala、333Ala、336Thr、337Thr、340Ser、402His、467Pro、468Phe、473Arg、475Cys和476Pro。本研究的结果为进一步研究Dlc4h基因在龙眼黄酮类化合物生物合成途径中行使的功能提供依据。 展开更多
关键词 龙眼(Dimocarpus longan Lour.) 肉桂酸4-羟化酶 生物信息学分析
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[木奈]肉桂酸-4-羟化酶基因及其启动子克隆与表达分析
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作者 王玉珍 陈桂信 +3 位作者 赵利 吕恃衡 潘东明 姜翠翠 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第18期122-127,共6页
以不同发育时期的果实为试材,采用两步法逆转录与抑制PCR技术相结合的方法构建均一化全长cDNA文库,筛选出一条编码肉桂酸-4-羟化酶的全长cDNA(命名为PsC4 H);采用APA-Walking技术,分离获得该基因的启动子序列;采用实时荧光定量PCR技术,... 以不同发育时期的果实为试材,采用两步法逆转录与抑制PCR技术相结合的方法构建均一化全长cDNA文库,筛选出一条编码肉桂酸-4-羟化酶的全长cDNA(命名为PsC4 H);采用APA-Walking技术,分离获得该基因的启动子序列;采用实时荧光定量PCR技术,检测该基因在果实不同发育时期的表达动态。结果表明:PsC4 H基因全长为1 772bp,ORF(Open Reading Frame)为1 515bp,编码504个氨基酸,相对分子量为145 719.6,等电点为4.94,经序列同源性分析发现,PsC4 H氨基酸序列与李属果树高度同源;经PlantCare软件预测,PsC4 H基因的启动子除具有TATA/CAAT-box外,还含有G-box、HSE等特异作用元件;实时荧光定量结果显示,PsC4 H在果实整个生长发育过程中呈下调-上调的表达趋势,其中在成熟果中表达量最高。 展开更多
关键词 [木奈]肉桂酸-4-羟化酶 启动子 实时荧光定量PCR
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红海榄肉桂酸-4-羟基化酶基因的克隆与表达分析
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作者 谢勇 王友绍 张维仕 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期20-27,共8页
肉桂酸-4-羟基化酶是木质素合成反应中的关键酶,木质素合成反应对于植物耐受重金属胁迫有重要作用。本研究利用同源克隆和cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)从红海榄叶片中克隆得到一条肉桂酸-4-羟基化酶基... 肉桂酸-4-羟基化酶是木质素合成反应中的关键酶,木质素合成反应对于植物耐受重金属胁迫有重要作用。本研究利用同源克隆和cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)从红海榄叶片中克隆得到一条肉桂酸-4-羟基化酶基因,命名为RsC4H,生物信息学分析结果显示RsC4H基因的cDNA全长为2006bp,开放阅读框长1572bp,共编码523个氨基酸。该基因编码蛋白的相对分子质量为60.18kD,是亲水性的不稳定蛋白,二级结构以α螺旋(47.42%)和无规则卷曲(32.70%)为主,该蛋白在N端和C端分别包含一个跨膜结构,不含有信号肽,主要在膜结构或内质网上发挥功能,属于p450超家族。RsC4H蛋白与其他植物的C4H蛋白相似性较高,系统发育树结果显示其与笋瓜(Cucurbita maxima, XP_023007159.1)、南瓜(Cucurbita moschata, XP_022947682.1)的亲缘关系更近。qRT-PCR结果显示,红海榄能快速响应重金属胁迫,提高RsC4H基因的表达量,促进木质素生成并增加细胞壁厚度以阻止金属离子进入细胞。此研究结果丰富了红树植物抗重金属胁迫基因库,为从分子水平揭示红海榄耐受重金属胁迫机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 红海榄 肉桂酸-4-羟基化酶 基因克隆 生物信息学分析
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亚洲棉C4H同源cDNA的分离和表达特征分析 被引量:18
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作者 骆萍 王国栋 陈晓亚 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第1期77-81,共5页
根据P45 0保守序列设计简并引物 ,从亚洲棉 (GossypiumarboreumL .)cDNA文库中分离到两个肉桂酸_4_羟化酶 (C4H)同源cDNA克隆。这两个棉花P45 0被划分到CYP73A亚族中 ,分别被命名为CYP73A2 5和CYP73A2 6。它们各编码 5 0 5个氨基酸残基 ... 根据P45 0保守序列设计简并引物 ,从亚洲棉 (GossypiumarboreumL .)cDNA文库中分离到两个肉桂酸_4_羟化酶 (C4H)同源cDNA克隆。这两个棉花P45 0被划分到CYP73A亚族中 ,分别被命名为CYP73A2 5和CYP73A2 6。它们各编码 5 0 5个氨基酸残基 ,彼此之间的氨基酸序列同源性为 91.3%。它们与其他植物C4H的同源性高达 90 %以上。RT_PCR分析表明 ,CYP73A2 6在棉花的花瓣、花萼果皮及发育种子中均有较高水平的表达。CYP73A2 5在花瓣、花萼和果皮中有较强表达 。 展开更多
关键词 肉桂酸-4-羟化酶 棉花 亚洲棉 P450 CDNA 分离
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Changes of chlorogenic acid content and its synthesis-associated genes expression in Xuehua pear fruit during development 被引量:14
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作者 HE Jin-gang CHENG Yu-dou +2 位作者 GUAN Jun-feng GE Wen-ya ZHAO Zhe 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期471-477,共7页
According to synthetic pathway of plant chlorogenic acid (CGA), the expression patterns of genes encoding enzymes that are associated with CGA synthesis were studied in normally developed Xuehua pear fruit. The stud... According to synthetic pathway of plant chlorogenic acid (CGA), the expression patterns of genes encoding enzymes that are associated with CGA synthesis were studied in normally developed Xuehua pear fruit. The study demonstrated that CGA content in peel and flesh of Xuehua pear decreased as fruit development progressed, with a higher level in peel. The expression levels of PbPAL 1, PbPAL2, PbC3H, PbC4H, Pb4CL 1, Pb4CL2, Pb4CL6, PbHC T1 and PbHC T3 genes decreased in fruit, which was consistent with the pattern of variation in CGA content. That indicated that these genes might be key genes for influencing fruit CGA synthesis in Xuehua pear. However, Pb4CL7 gene expression profile is not consistent with variation of CGA content, hence, it may not be a key gene involved in CGA synthesis. 展开更多
关键词 cinnamate 4-hydroxylase gene hydroxy cinnamoyl CoA shikimate/quinic acid hydroxycinnamoyl transferasegene p-coumarate 3'-hydroxylase gene 4-hydroxycinnamoyl-CoA ligase gene phenylalanine ammonia lyasegene Xuehua pear
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羽衣甘蓝中一个突变型肉桂酸-4-羟化酶基因的克隆及分析 被引量:12
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作者 陈安和 李加纳 +2 位作者 柴友荣 王瑞 吕俊 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期915-922,共8页
以羽衣甘蓝为材料,克隆了全长2431bp的肉桂酸-4-羟化酶基因BoC4H。它有两个内含子,mRNA为1715bp,编码一个481个氨基酸的推导蛋白,与其它植物C4H有广泛同源性。它含有细胞色素P450保守域和特征基序,如血红素结合域、E-R-R三联体、含T的... 以羽衣甘蓝为材料,克隆了全长2431bp的肉桂酸-4-羟化酶基因BoC4H。它有两个内含子,mRNA为1715bp,编码一个481个氨基酸的推导蛋白,与其它植物C4H有广泛同源性。它含有细胞色素P450保守域和特征基序,如血红素结合域、E-R-R三联体、含T的结合槽基序、酶正确定向必需的铰链基序。BoC4H具有C4H/CYP73A5的大部分特征性底物结合位点基序(SRSs)和酶活性位点残基,但与拟南芥等植物C4H相比其编码区3′发生了C2242单碱基缺失和相应移码,导致其蛋白C-末端缺失/变异了36个残基,SRS6基序和其上的活性位点残基也相应缺失,因此BoC4H可能无功能或活性低。BoC4H为膜蛋白,可能定位于内质网,其二级结构主要为α-螺旋和随机卷曲。Swiss-Model不能预测出其三级结构。甘蓝中存在一个至少由5个成员构成的C4H基因家族。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 克隆 肉桂酸-4-羟化酶(C4H) 突变 序列分析
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青稞C4H基因的克隆及组织表达分析 被引量:15
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作者 罗小娇 刘新春 +2 位作者 杨晓云 袁金娥 冯宗云 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期589-596,共8页
为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点P... 为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点PI=9.01,平均亲水指数(GRAVY)为-0.170,属于亲水性碱性蛋白,高级结构分析表明其具有细胞色素P450家族保守域及C4H特异的功能性活性位点。利用实时荧光定量PCR分析胚乳发育5个时期不同组织(茎、叶及子粒)的表达情况,结果显示HvC4H基因在青稞胚乳发育期的表达情况存在着明显的组织差异性,在茎中的表达量最高。本研究为通过调控C4H基因的表达从而提高大麦黄酮的含量奠定了分子生物学基础,对于改良大麦的品质、抗性、生长发育等性状具有重要意义。 展开更多
关键词 青稞(裸大麦) C4H基因 同源克隆 RACE 实时荧光定量PCR 胚乳发育期
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茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析 被引量:11
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作者 姚胜波 王文钊 +5 位作者 李明卓 许玉娇 王云生 刘亚军 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期35-44,共10页
肉桂酸4-羟基化酶(Cinnamate 4-hydroxylase,C4H)是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因(Cs C4H)的全长序列,其中开放阅读框长1 518 bp... 肉桂酸4-羟基化酶(Cinnamate 4-hydroxylase,C4H)是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因(Cs C4H)的全长序列,其中开放阅读框长1 518 bp,编码505个氨基酸,推测蛋白分子量为58.15 k D,理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1 840 bp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外,还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体p YES-DEST52上,并在酿酒酵母WAT11中进行真核表达。利用LC-MS方法检测酶反应产物,结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。 展开更多
关键词 茶树 肉桂酸4-羟基化酶 启动子 表达分析 真核表达
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