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Identification of SNPs and Their Effects on Swine Growth and Carcass Traits for Porcine IGFBP-3 Gene 被引量:7
1
作者 LIU De-wu ZHANG Hao WU Zhen-fang LI Jia-qi YANG Guan-fu ZHANG Xi-quan 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2008年第5期630-635,共6页
The insulin-like growth factor binding protein-3 (IGFBP-3) was known as a key factor that regulates the effect of insulin- like growth factors (IGF-1 and IGF-2) on pig growth and development. We first identified 3... The insulin-like growth factor binding protein-3 (IGFBP-3) was known as a key factor that regulates the effect of insulin- like growth factors (IGF-1 and IGF-2) on pig growth and development. We first identified 38 single nucleotide polymorphisms (SNPs) from a fragment of the IGFBP-3 gene spanning 1 823 bp using the denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) method and confirmed them by direct sequencing. Among these SNPs, 36 located in introns and the remaining 2 in the 3 prime untranslated region (3UTR). In addition, 16 PCR-RFLP polymorphisms were identified within these SNPs. Three SNPs were then selected to genotype 272 F2 individuals with PCR-RFLP method and the association of polymorphism with growth and carcass traits were analyzed. The results showed that no significant associations were observed between polymorphisms of A265G and A952G and traits. However, the A2670G significantly related with live body length, loin muscle area, and skin and fat percentage (P〈0.05); highly significantly associated with weight of carcass lean and lean percentage (P〈 0.01). 展开更多
关键词 PIG IGFBP-3 gene single nucleotide polymorphism (SNP) denaturing high-performance liquid chromatographydhplc performance
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Trial of the correlation between cytochrome oxidase CYP3A4 with the susceptibility of paclitaxel-based regimen for advanced gastric cancer
2
作者 Jianwei Yang Yan Meng +5 位作者 Ying Su Zeng Chen Wei Gao Jinyuan Lin Jing Jia Huamei Lin 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2014年第10期451-456,共6页
Objective: The aim of the study was to investigate the relationship between susceptibility of paclitaxel-based regimen and gene polymorphisms of cytochrome oxidase CYP3A4 for advanced gastric cancer. Methods: Peripher... Objective: The aim of the study was to investigate the relationship between susceptibility of paclitaxel-based regimen and gene polymorphisms of cytochrome oxidase CYP3A4 for advanced gastric cancer. Methods: Peripheral venous blood sample of 53 advanced gastric cancer patients were enrolled to test the mutation of CYP3A4 gene by denaturing high performance liquid chromatography(DHPLC) and DNA sequencing. The relation between the efficacy of paclitaxel-based regimen and CYP3A4 gene polymorphisms was further analyzed. Results: DHPLC indicated that among the 53 patients, 21 cases showed biomodal type(mutation) and 32 cases were of unimodal type(wild-type). Sequencing results showed that the deletion mutation was found at the 27 th basic group of C in exon 10 of CYP3A4 gene. The response rate(RR) and disease control rate(DCR) of wild-type group were 40.6% and 84.4%, while in mutation group they were 33.3% and 85.7%, respectively, with no significances between the two groups(P > 0.05). Of all 53 cases, the median progression-free survival(PFS) was 6.5 months(95% CI: 3.576–9.424 months), and the median overall survival(OS) was 11.0 months(95% CI: 6.955–15.045 months). The median PFS and OS in wild-type group had no differences compared with those in mutation group(7.0 months vs. 7.0 months, P > 0.05; 10.0 months vs. 14.0 months, P > 0.05). Between wild-type and mutation groups, the median PFS of patients applied with oxaliplatin containing regimen and the median OS in patients applied with/without oxaliplatin had no significant differences(P > 0.05), while the median PFS in patients received non-oxaliplatin regime had statistical differences(P = 0.024). The median PFS and OS in patients receiving 3-drug or 2-drug regimes had no correlation with CYP3A4 gene polymorphisms. The adverse effects in the two groups were mild, mainly in grades 1–2. The common adverse effects were anorexia, nausea/vomiting and leucopenia. Conclusion: Deletion mutation was located in the 27 th basic group of C in exon 10 of CYP3A4 gene. P 展开更多
关键词 denaturing high performance liquid chromatographydhplc CYP3A4 gastric cancer PACLITAXEL
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运用变性高效液相色谱对肺炎克雷伯菌产ESBL进行基因分型 被引量:20
3
作者 刘朝晖 王汉平 +3 位作者 陈劲龙 杨银梅 叶惠芬 曾军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期764-767,共4页
目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷... 目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,全部样本均扩增出TEM型质粒的编码序列,经过DHPLC分析,52例(51.4%)样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定为TEM-116;测序结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异;文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作出即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 肺炎克雷伯菌 超广谱β-内酰胺酶 TEM型质粒 基因分型 变性高效液相色谱 肺炎克雷伯菌 ESBL 基因分型 产超广谱β-内酰胺酶 TEM-1型 流行病学监测 临床分离株 dhplc
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变性高效液相色谱检测食品中致泻性大肠杆菌 被引量:17
4
作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 赵昕 闫平平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1526-1531,共6页
【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特... 【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特异性毒力因子基因序列设计引物,PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以肠产毒性大肠杆菌等32株试验菌株做特异性检测;4种致泻性大肠杆菌标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。【结果】试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:肠产毒性大肠杆菌27CFU/mL、肠致病性大肠杆菌33CFU/mL、肠出血性大肠杆菌25CFU/mL、肠侵袭性大肠杆菌42CFU/mL。【结论】该方法可以快速、准确地检测食品中的致泻性大肠杆菌,是食品中病原菌检测的新技术和新方法。 展开更多
关键词 致泻性大肠杆菌 多聚酶链式反应 PCR 变性高效液相色谱 dhplc
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变性高效液相色谱在微生物基因检测中的应用研究进展 被引量:7
5
作者 周明奎 李文哲 朱文斯 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第S1期76-79,共4页
变性高效液相色谱(D enaturing H ighP-erform ance Liquid Chrom atography,D H PLC)是一种可以对核酸片段进行灵敏、快速的分析,并检测出单碱基错配及插入缺失的新技术,在生命科学许多领域有广泛的应用.对D H PLC在致病微生物基因抗... 变性高效液相色谱(D enaturing H ighP-erform ance Liquid Chrom atography,D H PLC)是一种可以对核酸片段进行灵敏、快速的分析,并检测出单碱基错配及插入缺失的新技术,在生命科学许多领域有广泛的应用.对D H PLC在致病微生物基因抗药性突变检测、基因型分析等领域的应用研究进展进行了综述. 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 dhplc 突变检测 基因型分析
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13例肝豆状核变性家系致病基因突变的检测和分析 被引量:6
6
作者 张前军 李汶 +3 位作者 高伯迪 汤蔚琳 李麓芸 卢光琇 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第6期497-501,共5页
为了研究Wilson病(wilson disease,WD)基因突变的类型和发生情况,探讨WD疾病的病因、临床特点,通过采用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法结合DNA测序方法对13例无亲缘关系的患者及33位... 为了研究Wilson病(wilson disease,WD)基因突变的类型和发生情况,探讨WD疾病的病因、临床特点,通过采用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法结合DNA测序方法对13例无亲缘关系的患者及33位亲属进行ATP7B基因所有外显子及5′端非转录区突变检测.33例DNA标本确认11种基因突变,其中包括9种错义突变(p.R778L、p.R919G、p.T1178A、p.T977M、p.K1010Q、p.C490TERM、p.A874P、p.G943S、p.G943D),1种缺失突变(2790delCAT),1种剪切位点改变(c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)).在13个家系中,发现4例R778L突变,2例2790delCAT,均为杂合型突变,涉及17个等位基因,本组检出率为70.8%(17/24).DHPLC-测序法是WD疾病基因突变筛查较为快捷、全面而且敏感的方法.WD基因突变存在热点区分别为3、8、12号外显子.2790delCAT、p.K1010Q、c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)是ATP7B基因新突变类型,p.S406A、p.V456L、p.V1140A、p.R952K是中国人比较常见的多态类型. 展开更多
关键词 肝豆状核变性 变性高效液相色谱(dhplc) 血清铜蓝蛋白 多态 遗传
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DHPLC对猪肌肉组织差异表达EST的鉴定 被引量:3
7
作者 王翀 陈瑶生 +2 位作者 李重生 黄志宏 田兴国 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1085-1089,共5页
采用DHPLC系统和LabWork4 0图像分析软件 ,对大白猪和广东地方品种蓝塘猪眼肌组织差异显示EST进行鉴定 ,两种方法均证实了差异显示条带的真实性。结果表明 :用DHPLC系统能够准确而简捷的检测不同组织中mRNA表达的差异 ,是 1种鉴定基因... 采用DHPLC系统和LabWork4 0图像分析软件 ,对大白猪和广东地方品种蓝塘猪眼肌组织差异显示EST进行鉴定 ,两种方法均证实了差异显示条带的真实性。结果表明 :用DHPLC系统能够准确而简捷的检测不同组织中mRNA表达的差异 ,是 1种鉴定基因表达差异的有效方法 ,在研究基因表达 。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱(dhplc) MRNA 差异表达
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多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌 被引量:6
8
作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 裴轶君 于珂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期207-212,共6页
本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并... 本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的mPCR体系,扩增产物分别为287bp、159bp和173bp。采用22株细菌验证了该mPCR具有特异性。mPCR检测的灵敏度在DNA水平上达到空肠弯曲菌10pg/μL、结肠弯曲菌1pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24h即可被检出。在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性,7份样品为结肠弯曲菌阳性。本研究建立的mPCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 变性高效液相色谱
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变性高效液相色谱法及其在基因变异检测中的研究进展 被引量:3
9
作者 王羚郦 何华 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期706-711,共6页
变性高效液相色谱法是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。由于该技术具有快速、经济、准确和自动化程度高等特点,广泛用于单核苷多态的筛检中。本文简述了变性高效液相色谱法的基本原理,并将它与各种 SNP 筛检技术进行系... 变性高效液相色谱法是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。由于该技术具有快速、经济、准确和自动化程度高等特点,广泛用于单核苷多态的筛检中。本文简述了变性高效液相色谱法的基本原理,并将它与各种 SNP 筛检技术进行系统比较,综述了 DHPLC 在这一领域的最新研究进展。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱法 单核苷酸多态性 突变
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多重PCR-DHPLC快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌 被引量:6
10
作者 晚观生 刘晓玉 +2 位作者 郑秋月 徐君怡 曹际娟 《工业微生物》 CAS CSCD 2016年第3期42-46,共5页
应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法。以基因wzx O111、rfb EO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法... 应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法。以基因wzx O111、rfb EO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法,进行特异性和灵敏度测试,同时进行RT-PCR检测比较灵敏度。该方法具有良好特异性,可以一次PCR扩增同时检测O111、O157;灵敏度达到25 CFU/m L。129份牛肉样品中检出1例O111,3例O157阳性;74份鸡肉样品中检测出O111、O157阳性各1例,67份蔬菜样品中未检测到O111、O157。本文建立O111、O157多重PCR-DHPLC检测方法,操作简便,特异性强,适用于产志贺毒素大肠杆菌筛选检测。 展开更多
关键词 多聚酶链式反应 变性高效液相色谱 检测 产志贺毒素大肠杆菌
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食品中五种致病性弧菌MPCR-DHPLc检测方法的建立 被引量:5
11
作者 邵碧英 王传得 +4 位作者 郑晶 黄晓蓉 曹际娟 陈彬 吴谦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期500-504,共5页
采用试剂盒法提取5种致病性弧菌(霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌)的基因组DNA。分别合成5对特异性引物,对PCR反应体系进行优化后,建立了5种致病性弧菌间的MPCR-DHPLC检测方法。二重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100... 采用试剂盒法提取5种致病性弧菌(霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌)的基因组DNA。分别合成5对特异性引物,对PCR反应体系进行优化后,建立了5种致病性弧菌间的MPCR-DHPLC检测方法。二重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100CFU/ml。建立的MPCR-DHPLC方法在食品中弧菌的检测上具有很好的应用价值。 展开更多
关键词 弧菌 基因组DNA 多重PCR 变性高效液相色谱
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变性高效液相色谱法分析中国人非小细胞肺癌、结直肠癌中表皮生长因子受体突变情况和临床意义 被引量:5
12
作者 周冬辰 李龙芸 +3 位作者 崔全才 王孟昭 张力 穆新林 《癌症进展》 2006年第5期462-466,433,共6页
目的初步了解我国NSCLC和结直肠癌患者EGFR突变的发生率及与此相关的临床特征。方法利用含有野生型和突变型EGFR基因的质粒DNA,摸索条件,建立DHPLC最佳检测方法;收集北京协和医院近期NSCLC手术标本和结直肠癌的石蜡标本,通过PCR和DHPLC... 目的初步了解我国NSCLC和结直肠癌患者EGFR突变的发生率及与此相关的临床特征。方法利用含有野生型和突变型EGFR基因的质粒DNA,摸索条件,建立DHPLC最佳检测方法;收集北京协和医院近期NSCLC手术标本和结直肠癌的石蜡标本,通过PCR和DHPLC筛查突变,测序验证,并对结果进行统计学分析。结果在29例NSCLC标本中,8例发生突变,突变率为27·6%,其中6例为缺失突变、1例为点突变、1例为混合突变;8例女性中有7例发现突变,突变率为87·5%,而21例男性病人中只有1例发生突变,突变发生率为4·8%(P<0·001);8例无吸烟史的病人全部突变,突变发生率为100%,21例有吸烟史的病人无1例突变(P<0·001);20例腺癌病人中有8例突变,突变率为40·0%;9例鳞癌病人无一突变(P=0·026);肿瘤家族史和肿瘤分期则与突变无关。在37例结直肠癌标本中,未发现突变。结论中国人NSCLC的EGFR突变发生率明显高于欧美国家,且以19外显子上的缺失突变为主。突变发生与女性、无吸烟史和腺癌有相关性,与肿瘤家族史和肿瘤分期没有相关性。结直肠癌EGFR未发现突变。DHPLC可作为EGFR突变筛查方法。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 结直肠癌 表皮生长因子受体 突变 变性高效液相色谱
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胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的研究 被引量:5
13
作者 杨建伟 陈增 +5 位作者 苏颖 高炜 林锦源 贾静 林华妹 蒙燕 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第1期23-28,共6页
目的探讨胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的关系。方法采用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和基因测序技术检测53例晚期胃癌患者外周血中CYP3A4基因的突变情况,观察并评价含紫杉醇化疗方案的疗效与CYP3A4... 目的探讨胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的关系。方法采用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和基因测序技术检测53例晚期胃癌患者外周血中CYP3A4基因的突变情况,观察并评价含紫杉醇化疗方案的疗效与CYP3A4基因多态性的关系。结果DHPLC检测显示,53例胃癌患者中CYP3A4基因单峰者(野生型)32例,双峰者(突变型)21例;测序结果显示,CYP3A4基因第10号外显子第27位C缺失突变。野生型组有效率(RR)为40.6%,疾病控制率(DCR)为84.4%;突变型组RR为33.3%,DCR为85.7%,两组RR和DCR的差异均无统计学意义(P〉0.05)。53例胃癌患者的中位无进展生存时间(PFS)为6.5个月(95%CI:3.576~9.424个月),中位总生存时间(OS)为11.0个月(95%CI:6.955~15.045个月)。CYP3A4野生型与突变型患者中位PFS(7.0个月掷.7.0个月)和OS(10.0个月vs.14.0个月)的差异均无统计学意义(P〉O.05)。使用含铂方案患者CYP3A4基因野生型和突变型中位PFS的差异无统计学意义(P〉0.05),使用非含铂方案中位PFS的差异有统计学意义(p=0.024),含铂与非含铂方案中位0s的差异均无统计学意义(P〉0.05)。采用3药联合与两药联合方案患者的中位PFS和0s均与CYP3A4基因多态性无关。野生型与突变型患者不良反应均较轻,以1~2级为主,常见不良反应包括食欲减退、恶心呕吐和白细胞减少。结论CYP3A4基因第10号外显子第27位C缺失突变,CYP3A4基因突变型晚期胃癌患者使用含紫杉醇方案有延长0s的趋势。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱技术 CYP3A4基因 胃癌 紫杉醇
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变性高效液相色谱法检测鸡HSP70基因单核苷酸多态性 被引量:2
14
作者 罗庆斌 郑凤珊 +4 位作者 杜红丽 张细权 杨关福 邱祥聘 曾凡同 《四川农业大学学报》 CSCD 2005年第1期90-94,共5页
选取我国20个地方鸡种共591个个体作为实验材料,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,在鸡HSP70基因的全序列内进行未知SNPs的筛选,对有变异的色谱峰型分别选取2个个体测序,再将同一对引物的所有测序样本的测序结果进行序列的同源性比较,... 选取我国20个地方鸡种共591个个体作为实验材料,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,在鸡HSP70基因的全序列内进行未知SNPs的筛选,对有变异的色谱峰型分别选取2个个体测序,再将同一对引物的所有测序样本的测序结果进行序列的同源性比较,从而识别和确认鸡HSP70基因的未知SNPs。结果分别在4对引物扩增的PCR产物中检出并确认了10个SNPs:A258G、C276G、C507T、C1040A、G1044A、C1431A、T1476C、G1500A、A1529G、C1722T。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 HSP70基因 单核苷酸多态性
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霍乱弧菌多重PCR-DHPLC分型方法建立 被引量:3
15
作者 黄晓蓉 邵碧英 +4 位作者 王传得 郑晶 曹际娟 陈彬 吴谦 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期721-722,共2页
目的建立霍乱弧菌多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)快速分型方法。方法分别合成扩增霍乱弧菌胶原酶基因(vcc基因)、O1群和O139群的毒力基因(ctxA基因和tcpA基因)以及O139群毒力基因(LPSgt基因),并对4对引物的PCR退火温度进行优化,建立多... 目的建立霍乱弧菌多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)快速分型方法。方法分别合成扩增霍乱弧菌胶原酶基因(vcc基因)、O1群和O139群的毒力基因(ctxA基因和tcpA基因)以及O139群毒力基因(LPSgt基因),并对4对引物的PCR退火温度进行优化,建立多重PCR-DHPLC分型方法。结果4种基因可同时被扩增,应用多重PCR-DHPLC方法对霍乱弧菌进行分型的结果与预期的一致。结论多重PCR-DHPLC分型方法可用于快速、准确地鉴定细菌纯培养物是否为霍乱弧菌以及具体的菌群。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 多重PCR 变性高效液相色谱(dhplc)
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应用MPCR-DHPLC技术检测转基因大豆及其食品 被引量:3
16
作者 陶然 郭顺堂 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期976-979,共4页
利用多重PCR结合DHPLC技术,建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法,确立了转基因大豆品系鉴定方法。该筛选方法的检测灵敏度为0.078 ng.μL-1,质粒检测灵敏度为1×103拷贝.μL-1。利用该方法对转基因大豆GT-40-3-2、Mon... 利用多重PCR结合DHPLC技术,建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法,确立了转基因大豆品系鉴定方法。该筛选方法的检测灵敏度为0.078 ng.μL-1,质粒检测灵敏度为1×103拷贝.μL-1。利用该方法对转基因大豆GT-40-3-2、Mon89788、A5704-12和大豆食品曲奇饼干、含大豆的调味粉、干豆腐及非转基因黑大豆进行验证,效果良好。所建立的PCR-DHPLC检测方法能同时快速准确的检测大豆及加工食品中转基因成分。 展开更多
关键词 多重PCR dhplc 转基因大豆
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用DHPLC技术进行特发性卵巢早衰易感基因TGFBR3的突变分析 被引量:3
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作者 李桃 覃春容 +3 位作者 姚吉龙 任晓慧 唐雪莲 吴维青 《中国优生与遗传杂志》 2015年第11期32-34,共3页
目的应用DHPLC技术对TGFBR3基因12外显子多态进行准确、快速、高通量的检测。方法选择2009年2月至2012年12月在南方医科大学附属深圳市妇幼保健院妇产科确诊的卵巢早衰患者110例为卵巢早衰组,以月经规则、性激素检查在正常范围内的年龄... 目的应用DHPLC技术对TGFBR3基因12外显子多态进行准确、快速、高通量的检测。方法选择2009年2月至2012年12月在南方医科大学附属深圳市妇幼保健院妇产科确诊的卵巢早衰患者110例为卵巢早衰组,以月经规则、性激素检查在正常范围内的年龄匹配的妇女110例为对照组。针对TGFBR3基因12外显子的编码区及剪接位点设计变性高效液相色谱分析的引物,构建TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析方法。结果建立的针对TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析方法能够快速、准确地区分已知变异序列和野生型序列,并且灵敏性和稳定性都好。收集110例特发性卵巢早衰和110例正常人标本,对这些标本进行TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析检测,检测到2个的单核苷酸多态性((SNP)。2022 T/C位点多态性:卵巢早衰组CC、TC、TT基因型频率分别为0.9%(1/110)、22.7%(25/110)、76.4%(84/110),C、T等位基因频率分别为12.3%(27/220)、87.7%(193/220);对照组CC、TC、TT基因型频率分别为0、9.0%(10/110)、90.9%(100/110),C、T等位基因频率分别为4.5%(10/220)、95.5%(210/220);两组间各基因型频率及等位基因频率分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2161-75C/T多态性位点基因频率、等位基因频率卵巢早衰组和对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论本课题研究中建立的针对TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析检测方法能够快速、准确地将TGFBR3基因12外显子变异序列与野生型序列区分,并且实验的重复性和再现性好、稳定性高,体系可靠。本研究建立的基于PCR的变性高效液相色谱分析TGFBR3基因12外显子突变方法是一种高通量、高灵敏度、半自动化、快速、准确、经济的突变检测技术。 展开更多
关键词 卵巢早衰 TGFBR3 基因多态 变性高效液相色谱(dhplc)
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变性高效液相色谱法筛检hMLH1和hMSH2微小突变技术 被引量:4
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作者 张渊智 盛剑秋 +2 位作者 陈彪 张宏 李世荣 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第12期2315-2320,共6页
目的:建立基于变性高效液相色谱法(DHPLC)的快速筛检错配修复基因hMLH1和hMSH2微小突变的技术平台。方法:自行设计PCR扩增hMLH1和hMSH2各外显子的引物,应用DHPLC检测26个遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系的先证者hMLH1和hMSH2种系... 目的:建立基于变性高效液相色谱法(DHPLC)的快速筛检错配修复基因hMLH1和hMSH2微小突变的技术平台。方法:自行设计PCR扩增hMLH1和hMSH2各外显子的引物,应用DHPLC检测26个遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系的先证者hMLH1和hMSH2种系微小突变,并与先前进行的DNA直接测序结果相比较。结果:hMLH1与hMSH2各外显子的PCR扩增引物,均能很好地扩增出相应的外显子及剪接区;DHPLC检出了所有已知突变,突变阳性筛检与阴性筛检的灵敏度和特异性均为100%;hMLH1的扩增子12A和hMSH2的扩增子2、3、7、5中相应外显子的剪接区跨越2个温度,而且相差较大(2.2-8.5℃):与DNA直接测序相比较,DHPLC具有快速、高效、低劳动强度、费用低、人为误差小、灵敏度和特异性高等优点。结论:基于DH- PLC的突变筛检平台,能够有效地筛检hMLH1和hMSH2微小突变,并具有较高的费用效率比。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱法 错配修复基因 外显子 突变 筛检
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水产品中常见5种致病菌的多重PCR-DHPLC快速检测方法的建立 被引量:3
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作者 钱云开 苑静 +3 位作者 高飞 王海洋 肖艳霞 张进杰 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第14期2014-2016,共3页
目的建立水产品中5种常见致病菌的快速高分辨检测手段,提高检测的效率和准确性。方法筛选沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌的特异基因,通过参阅文献和自行设计,分别确定invA、nuc、prfA、tlh、owp... 目的建立水产品中5种常见致病菌的快速高分辨检测手段,提高检测的效率和准确性。方法筛选沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌的特异基因,通过参阅文献和自行设计,分别确定invA、nuc、prfA、tlh、owpW为检测基因,优化引物浓度和引物组合,进行多重PCR扩增,产物经DHPLC进行快速检测。优化确定的方法通过重现性试验,特异性试验,灵敏度试验,以及人工污染水产品样品的检测。结果 DHPLC检测出峰顺序依次为invA、nuc、prfA、tlh、owpW,扩增片段大小为284 bp、329 bp、388 bp、450 bp、588 bp,此方法具有良好的重现性和特异性,灵敏度分别可达188 CFU/ml、670 CFU/ml、280 CFU/ml、240 CFU/ml、580 CFU/ml,不同水产品的状态、成分以及增菌液类型对后续检测不存在影响。结论本方法可以很好的满足实际食品微生物检测的要求。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 多重聚合酶链式反应 食源性致病菌 食品安全
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变性高效液相色谱分析猪GH基因单核苷酸多态性及与生产性能的关系 被引量:2
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作者 王荣梅 苏荣胜 +1 位作者 张綑权 杨关福 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第4期20-24,共5页
选取参考家系资源群体共357个个体作为试验材料,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,在猪生长激素(GH)基因包含第5外显子区的572 bp序列进行未知SNPs的筛选,对有变异的色谱峰型进行分类、测序,结果发现在该区域有4处变异,其中+1579位点的... 选取参考家系资源群体共357个个体作为试验材料,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,在猪生长激素(GH)基因包含第5外显子区的572 bp序列进行未知SNPs的筛选,对有变异的色谱峰型进行分类、测序,结果发现在该区域有4处变异,其中+1579位点的变异可以用基因型频率(AA、AB、BB)和基因频率来估算。对该位点变异与生产性能进行相关性分析得到不同基因型个体与参考家系中的测定重、体长、体高、胸宽、胸围、腿臀围、胴体A、B、C点膘厚、平均膘厚等生产性能之间没有显著差异;但BB基因型个体的测定重、体长、体高、胸宽、胸围都高于AA和AB基因型个体;BB基因型个体的腿臀围、胴体A、B、C点膘厚及平均膘厚则均低于AA和AB基因型个体;BB基因型个体的断奶后日增重显著高于AB基因型个体(P<0.05),也高于AA基因型个体,但差异未达到显著水平;BB基因型个体达100 kg日龄显著低于AB基因型个体(P<0.05),比AA基因型个体达100 kg日龄也低,但它们之间的差异不显著。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 GH基因 单核苷酸多态性 生产性能
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