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TGF-β_1和bFGFs体外诱导成人骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的实验研究 被引量:6
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作者 李松军 安荣泽 谢伟 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期608-611,共4页
目的: 从人骨髓中分离间充质干细胞(mesenchymalstemcells, MSCs), 应用流式细胞学技术分析不同细胞因子对细胞增殖分化的影响并观察细胞组织化学特点。结果:MSCs具有独特的表征, 即CD29阳性, CD34阴性。TGF- β1 (transforminggrowthfa... 目的: 从人骨髓中分离间充质干细胞(mesenchymalstemcells, MSCs), 应用流式细胞学技术分析不同细胞因子对细胞增殖分化的影响并观察细胞组织化学特点。结果:MSCs具有独特的表征, 即CD29阳性, CD34阴性。TGF- β1 (transforminggrowthfactorsβ1, TGF -β1 )、bFGFs(basefi broblastgrowthfactors, bFGFs) 及两者的联合应用可诱导MSCs表达软骨细胞表型向成软骨细胞方向分化。结论:MSCs是一群均一的细胞, 具有独特表征, 本实验所采用的细胞分离方法为筛选合适的细胞体外扩增及分化提供了有意义的线索。 展开更多
关键词 间充质干细胞 软骨细胞 诱导
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小鼠脐带间充质干细胞的体外诱导分化 被引量:5
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作者 朱慧 叶莉 +6 位作者 何洁 余璞 王金祥 王强 赵晶 庞荣清 白杰英 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期622-627,共6页
目的分离扩增小鼠脐带间充质干细胞(mouse umbilical cord mesenchymal stem cells,m UCMSCs)探讨其是否可诱导成软骨、脂肪和成骨细胞。方法通过贴壁培养法将m UCMSCs体外分离、扩增、纯化,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,运用流式细... 目的分离扩增小鼠脐带间充质干细胞(mouse umbilical cord mesenchymal stem cells,m UCMSCs)探讨其是否可诱导成软骨、脂肪和成骨细胞。方法通过贴壁培养法将m UCMSCs体外分离、扩增、纯化,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,运用流式细胞仪检测分析细胞的抗原标志表达进行鉴定。运用诱导培养液对分离的m UCMSCs分别定向诱导培养为软骨、脂肪和成骨细胞。结果运用组织贴块培养法可从新鲜脐带中分离到贴壁生长的成纤维样细胞,这些细胞高表达CD29、CD90和CD105,低表达CD34。成软骨诱导后阿新兰染色呈蓝色;成脂诱导后油红O染色,出现红色脂滴;茜红素染色成骨诱导的m UCMSC,可见红色结节。结论贴壁培养法分离培养所获得的m UCMSCs在体外可诱导分化为软骨、脂肪和成骨细胞。 展开更多
关键词 小鼠 脐带间充质干细胞 细胞培养 成软骨诱导 成脂诱导 成骨诱导
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三维立体培养法诱导去分化软骨细胞Ⅱ型胶原的重新表达 被引量:6
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作者 何清义 李强 +1 位作者 罗飞 许建中 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期307-309,共3页
目的用藻酸盐三维立体培养法及离心管聚集体诱导培养法促进去分化的永生化软骨细胞第50代(IHACs50)重新表达软骨细胞的Ⅱ型胶原标志性表型。方法利用藻酸盐三维立体培养法以及离心管聚集体诱导培养法分别诱导培养去分化的永生化人关... 目的用藻酸盐三维立体培养法及离心管聚集体诱导培养法促进去分化的永生化软骨细胞第50代(IHACs50)重新表达软骨细胞的Ⅱ型胶原标志性表型。方法利用藻酸盐三维立体培养法以及离心管聚集体诱导培养法分别诱导培养去分化的永生化人关节软骨细胞第50代,然后用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学染色、Ⅱ型胶原的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、激光共聚焦显微镜检测、胶原定量检测该永生化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型表达情况。结果免疫组织化学染色、激光共聚焦显微镜检测、RT-PCR检测分别提示藻酸盐三维立体培养法和离心管聚集体诱导培养法使去分化永生化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原染色阳性以及621bp的Ⅱ型胶原mRNA表达,Western blot和^3H-脯氨酸标记SDS-PAGEⅡ型胶原定量检测发现前者促进Ⅱ型胶原分泌较后者多。结论去分化永生化人关节软骨细胞可以经不同的诱导方法而重新表达Ⅱ型胶原表型,藻酸盐三维立体培养法因与软骨细胞的生理环境相似,故促进Ⅱ型胶原重新表达较多。 展开更多
关键词 软骨细胞 诱导 表型
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转化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原表型诱导 被引量:2
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作者 何清义 李起鸿 +1 位作者 许建中 杨柳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期524-526,共3页
目的 用离心管聚集体培养 (Aggregateculture)诱导转化人关节细胞的Ⅱ型胶原。方法 将体外长期培养的第 30、40、5 0代转化软骨细胞消化后进行离心管培养 ,比较细胞在单层培养、离心管聚集体培养 ,以及在普通培养基 ,BAI诱导培养基下... 目的 用离心管聚集体培养 (Aggregateculture)诱导转化人关节细胞的Ⅱ型胶原。方法 将体外长期培养的第 30、40、5 0代转化软骨细胞消化后进行离心管培养 ,比较细胞在单层培养、离心管聚集体培养 ,以及在普通培养基 ,BAI诱导培养基下 [2型骨形态发生蛋白 (BMP 2 ) +抗坏血酸盐 (Ascorbate) +胰岛素 (insulin) ] ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达和胞外基质产生情况。结果 在单层培养条件下 ,转化软骨细胞只表达Ⅰ型胶原 ,而在BAI诱导培养基及离心管聚集体培养下转化软骨细胞表达丰富的Ⅱ型胶原和大量胞外基质。结论 离心管聚集体培养是诱导转化软骨细胞Ⅱ型胶原的有效方式。 展开更多
关键词 转化软骨细胞 表型 诱导
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两种不同的体外诱导人脐带间充质干细胞成软骨细胞方法的比较 被引量:3
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作者 张权 陈恋 +5 位作者 常铖 张亚奇 肖翠红 饶巍 韩兵 武栋成 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第10期1967-1975,共9页
该课题探讨了3D悬滴培养与贴壁培养体外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)在成软骨分化特性上的差异。采用机械匀浆法和组织块贴壁培养法体外分离培养获得第5代h UC-MSCs,流式细胞术检测... 该课题探讨了3D悬滴培养与贴壁培养体外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)在成软骨分化特性上的差异。采用机械匀浆法和组织块贴壁培养法体外分离培养获得第5代h UC-MSCs,流式细胞术检测干细胞表面免疫标记物,经3D悬滴培养与贴壁培养诱导应用番红O和阿利辛蓝染色及荧光定量检测富含透明质酸糖胺聚糖的细胞外基质形成情况以及不同时间点(3天、7天、14天)成软骨相关基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表达,并用免疫组化染色的方法检测II型胶原的表达情况。结果显示,流式细胞术检测的第5代h UC-MSCs间充质干细胞表面标记物结果符合国际细胞疗法协会制定的鉴定标准;3D悬滴培养的h UC-MSCs可形成致密的细胞聚合物,贴壁培养的细胞形态成长梭形;番红O和阿利辛蓝染色结果显示,3D悬滴培养和贴壁培养的h UC-MSCs均能形成软骨细胞;但荧光实时定量PCR结果显示,3D悬滴培养的h UC-MSCs形成软骨细胞的成软骨相关基因的表达明显多于贴壁培养细胞形成软骨细胞的成软骨相关基因;II型胶原免疫组化染色的阳性细胞染色及统计结果显示,3D悬滴培养比贴壁培养的诱导的h UC-MSCs成软骨能力更强。3D悬滴培养法是一种理想的h UC-MSCs诱导成软骨培养方法。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 3D悬滴培养 贴壁培养 3D微球 成软骨细胞诱导
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脉冲电磁场与软骨代谢 被引量:3
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作者 阮佳莉 田京 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第15期2811-2818,共8页
背景:目前研究已证实外周脉冲电磁场可以促进软骨代谢,但其分子水平机制仍不甚清楚。目的:探讨脉冲电磁场的物理特性及其在软骨形成方面的作用与机制。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库和万... 背景:目前研究已证实外周脉冲电磁场可以促进软骨代谢,但其分子水平机制仍不甚清楚。目的:探讨脉冲电磁场的物理特性及其在软骨形成方面的作用与机制。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库和万方数据库1997年5月至2012年8月有关脉冲电磁场对软骨代谢影响的文献。在标题、摘要、关键词中以"pulsedel ectromagnetic field(PEMFs),cartilage,bone marrowmes enchymal stemcells(BMSCs)"或"脉冲电磁场,软骨代谢,软骨细胞,骨基质,骨髓间充质干细胞"为检索词进行检索。排除重复研究或内容较陈旧的文献。结果与结论:初检得到145篇文献,排除99篇重复研究或内容较陈旧的文献,保留46篇文献进一步分析。结果显示,脉冲电磁场通过诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞,促进软骨特异性基质如Ⅱ型胶原及蛋白多糖的合成,从而发挥软骨诱导作用;脉冲电磁场通过促进转化生长因子β2与其他因子的表达,调节软骨细胞生长分化,使临床上永久性修复软骨组织缺损变为可能。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建综述 脉冲电磁场 软骨细胞 软骨基质 软骨诱导 代谢 骨髓间充质干细胞 Ⅱ型胶原 蛋白多糖 转化生长因子 综述文献
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环境、材料、安全、可控:组织工程技术修复关节软骨的症结
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作者 寇建强 王倩倩 +1 位作者 王昌耀 王英振 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第15期2819-2826,共8页
背景:传统的软骨缺损的修复方法都有其局限性,组织工程技术的出现从根本上改变了"以创伤修复创伤"的传统治疗模式。目的:总结分析目前组织工程技术修复关节软骨的研究进展。方法:由第一作者检索1990年至2011年PubMed数据及中... 背景:传统的软骨缺损的修复方法都有其局限性,组织工程技术的出现从根本上改变了"以创伤修复创伤"的传统治疗模式。目的:总结分析目前组织工程技术修复关节软骨的研究进展。方法:由第一作者检索1990年至2011年PubMed数据及中国知网数据库有关应用组织工程技术修复关节软骨方面的文献。共检索中文187篇,英文211篇,最终保留49篇进入结果分析。结果与结论:软骨组织工程的主要方法就是应用工程学和生命科学原理,在体外分离、培养、扩增所需要的种子细胞,然后将之种植于合适的生物支架材料上,将细胞支架复合体植入体内组织缺损部位,并加入一定的诱导条件,逐渐形成新的有功能的软骨组织。文章在种子细胞的选择方面重点叙述了自体软骨细胞、异体软骨细胞、胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞的研究进展;在细胞诱导及条件培养方面重点叙述了细胞因子、细胞条件培养、转基因技术的研究进展;并对生物支架材料的选择和研究进行了相关叙述。找到最理想的种子细胞,合理联合应用细胞因子,更加真实的模拟细胞生存的微环境,基因工程安全、高效、可控转染,构建理想的支架材料,将是今后组织工程研究的重点和热点。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建综述 种子细胞 软骨细胞 异体软骨细胞 胚胎干细胞 骨髓间充质干细胞 细胞培养 诱导 支架 细胞因子 微环境 省级基金
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不同浓度白细胞介素-1β对脂肪源性干细胞向软骨细胞分化影响的体外研究
8
作者 曹瑞治 余英剑 +2 位作者 宋琳 杨大志 牛振东 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期715-718,共4页
目的 探讨体外脂肪源性干细胞(ADSCs)向软骨诱导的过程中,不同浓度白细胞介素-1β(IL-1β)对ADSCs向软骨细胞分化的影响. 方法 体外成功分离、培养大鼠ADSCs,实验分4组(n=12):对照组、实验A、B、C组,每组加入等量的细胞数(1 ... 目的 探讨体外脂肪源性干细胞(ADSCs)向软骨诱导的过程中,不同浓度白细胞介素-1β(IL-1β)对ADSCs向软骨细胞分化的影响. 方法 体外成功分离、培养大鼠ADSCs,实验分4组(n=12):对照组、实验A、B、C组,每组加入等量的细胞数(1 ×105个),实验A、B、C组中分别加入浓度为1、2、3 ng/mL的IL-1β.培养6、12、18d应用实时定量聚合酶链式反应检测各组成软骨基因(Ⅱ型胶原和糖胺聚糖蛋白)和成脂基因(脂肪酸结合蛋白)的表达量. 结果 ADSCs免疫化学染色结果显示CD44和CD105呈阳性表达培养6、12、18 d,实验B组Ⅱ型胶原、糖胺聚糖蛋白基因表达量较对照组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而实验A、C组之间及分别与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).培养6、12、18 d,实验A组脂肪酸结合蛋白基因表达量较对照组和实验B组明显增加,实验B组脂肪酸结合蛋白基因表达量较对照组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);而实验C组与对照组之间比较差异无统计学意义(D>0.05). 结论 当IL-1β浓度为1、3ng/mL时,其对ADSCs向软骨细胞分化未见明显促进作用;但当IL-1β浓度为2 ng/mL时,可对ADSCs的成软骨分化产生促进作用. 展开更多
关键词 脂肪组织 干细胞 白细胞介素1 软骨细胞 诱导
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T-2毒素对软骨细胞NO合成、iNOS表达的影响 被引量:4
9
作者 杨占田 郭雄 +4 位作者 陈静宏 王治伦 曹峻岭 熊咏民 谭希旺 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第9期1115-1117,1146,共4页
目的:探讨T-2毒素对软骨细胞一氧化氮(NO)合成、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:取胎儿软骨细胞体外培养,培养过程于培养液中加入不同浓度的T-2毒素(1~20μg/L)连续培养5d,用Griess重氮化法测定软骨细胞培养上清液中NO含量;... 目的:探讨T-2毒素对软骨细胞一氧化氮(NO)合成、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:取胎儿软骨细胞体外培养,培养过程于培养液中加入不同浓度的T-2毒素(1~20μg/L)连续培养5d,用Griess重氮化法测定软骨细胞培养上清液中NO含量;用Western-Blot检测软骨细胞iNOS蛋白的表达;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨细胞iNOS mRNA表达。结果:T-2毒素在1~20μg/L浓度范围内,能明显增加培养上清液中NO的含量,并使iNOS蛋白表达水平明显升高(P<0.05);当T-2毒素浓度达10~20μg/L时能引起iNOS mRNA表达水平提高(P<0.05),浓度越高,刺激作用越强。结论:T-2毒素使软骨细胞iNOS表达增强并使NO合成增多;T-2毒素引起的软骨细胞损伤与合成NO增多有关。 展开更多
关键词 软骨细胞 T-2毒素 一氧化氮/代谢 一氧化氮合酶/代谢
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共培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞 被引量:4
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作者 罗二梅 张家文 +2 位作者 胡笑轲 唐明乔 宇丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第1期82-87,共6页
目的探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及... 目的探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例(hUC-MSCs:兔膝关节软骨细胞)共培养。倒置相差显微镜观察细胞的形态与增殖;甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色分别检测葡萄糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原(COL2A1)(蛋白水平定性);并对各组细胞爬片进行GAG、COL2A1定量检测;同时用实时定量荧光PCR(pPCR)检测GAG、COL2A1 mRNA表达,观察共培养前后细胞的基质分泌情况。结果共培养21 d后,阳性对照组和实验组细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;GAG、COL2A1含量及mRNA表达量1∶4实验组均要高于其他实验组和阳性对照组。结论 hUC-MSCs和兔关节软骨细胞的共培养可明显促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化,且最佳共培养比例为1∶4。 展开更多
关键词 Transwell小室 人脐带间充质干细胞 兔膝关节软骨细胞 共培养 成软骨诱导
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兔羊膜上皮细胞向兔软骨细胞诱导的研究 被引量:1
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作者 周军杰 俞光荣 +2 位作者 曹成福 陈贤奇 庞金辉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1583-1585,共3页
目的 观察兔羊膜上皮细胞(AECs)向兔软骨细胞诱导分化的特性.方法 获得兔新鲜羊膜组织,去除外膜组织,并剪碎,胶原酶消化法进行原代培养.经传代培养、细胞形态观察后,用软骨细胞诱导培养液使AECs向软骨细胞分化,并以组织化学和免疫组... 目的 观察兔羊膜上皮细胞(AECs)向兔软骨细胞诱导分化的特性.方法 获得兔新鲜羊膜组织,去除外膜组织,并剪碎,胶原酶消化法进行原代培养.经传代培养、细胞形态观察后,用软骨细胞诱导培养液使AECs向软骨细胞分化,并以组织化学和免疫组织化学染色进行鉴定,电镜观察细胞形态检测软骨细胞特征性表现、细胞活性噻唑蓝(MTT)比色法检测.结果 兔羊膜上皮细胞具有前期胚胎干细胞的多向分化潜能,采用酶消化法可快速分离培养原代细胞.MTT比色法显示第3代传代细胞活性、增殖能力较高,未进行软骨细胞诱导的细胞未显示出软骨细胞的特征性表现,经软骨细胞诱导分化后,组织化学和免疫组织化学检测表明其能较好的表现软骨细胞特征.结论 兔AECs无伦理学限制,且具有前期胚胎干细胞的多向分化潜能,有望成为软骨细胞组织工程学新型的种子细胞. 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 软骨细胞 诱导 分化
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Directing the osteoblastic and chondrocytic differentiations of mesenchymal stem cells:matrix vs.induction media 被引量:3
12
作者 Jing He Jianglong Guo +3 位作者 Bo Jiang Ruijuan Yao Yao Wu Fang Wu 《Regenerative Biomaterials》 SCIE 2017年第5期269-279,共11页
While both induction culture media and matrix have been reported to regulate the stem cell fate,little is known about which factor plays a more decisive role in directing the MSC differentiation lineage as well as the... While both induction culture media and matrix have been reported to regulate the stem cell fate,little is known about which factor plays a more decisive role in directing the MSC differentiation lineage as well as the underlying mechanisms.To this aim,we seeded MSCs on HA-collagen and HA-synthetic hydrogel matrixes,which had demonstrated highly different potentials toward osteoblastic and chondrocytic differentiation lineages,respectively,and cultured them with osteogenic,chondrogenic and normal culture media,respectively.A systematic comparison has been carried out on the effects of induction media and matrix on MSC adhesion,cytoskeleton organization,proliferation,and in particular differentiation into the osteoblastic and chondrocytic lineages.The results demonstrated that the matrix selection had a much more profound effect on directing the differentiation lineage than the induction media did.The strong modulation effect on the transcription activities might be the critical factor contributing to the above observations in our study,where canonical Wnt-b-Catenin signal pathway was directly involved in the matrix-driven osteoblastic differentiation.Such findings not only provide a critical insight on natural cellular events leading to the osteoblastic and chondrocytic differentiations,but also have important implications in biomaterial design for tissue engineering applications. 展开更多
关键词 osteoblastic differentiation chondrocytic differentiation induction media MATRIX
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