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比色法测定胆固醇氧化酶酶活 被引量:36
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作者 季文明 陈毅力 +1 位作者 张和春 王武 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 2000年第3期251-254,共4页
根据实验结果和理论计算确定检测体系中胆固醇的质量浓度为 0 .3 87mg/mL ,表面活性剂的质量浓度为 0 .2 g/dL ,确定过氧化氢浓度与反应液吸光度之间的定量关系 .在此基础上 ,建立了比色法测定胆固醇氧化酶酶活的方法 .
关键词 胆固醇氧化酶 比色法检测 酶活性
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海藻糖对医用诊断工具酶活性保护研究 被引量:25
2
作者 黄成垠 安国瑞 +2 位作者 王庆敏 戴秀玉 周坚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期341-343,共3页
研究了干燥条件下海藻糖对胆固醇氧化酶,胆固醇脂酶和过氧化物酶的活性保护作用,并对影响酶活性保存的其它因素进行了试验。加海藻糖干燥的以上三种诊断酶分别在70,55和37℃温度下放置40d,150d和210d后再次测定酶活,结果表明这三... 研究了干燥条件下海藻糖对胆固醇氧化酶,胆固醇脂酶和过氧化物酶的活性保护作用,并对影响酶活性保存的其它因素进行了试验。加海藻糖干燥的以上三种诊断酶分别在70,55和37℃温度下放置40d,150d和210d后再次测定酶活,结果表明这三种酶的活性均保持在90%以上,而未加海藻糖保护的对照,活性降至20%以下。除海藻糖浓度外,缓冲系统中的介质、离于强度、pH是影响酶活的关键因素。 展开更多
关键词 海藻糖 诊断工具酶 实验室诊断 酶试剂
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碳纳米管负载铂修饰电极结合溶胶-凝胶技术制备胆固醇传感器 被引量:18
3
作者 时巧翠 彭图治 陈金媛 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期329-332,共4页
制作了碳纳米管和碳纳米管负载铂镶嵌修饰的浸蜡石墨电极,实验发现纳米铂的引入使修饰电极对过氧化氢的还原有更好的电催化性能.用溶胶-凝胶法将胆固醇氧化酶固定在碳纳米管负载铂修饰的浸蜡石墨电极表面,构建了一种新型的胆固醇生物传... 制作了碳纳米管和碳纳米管负载铂镶嵌修饰的浸蜡石墨电极,实验发现纳米铂的引入使修饰电极对过氧化氢的还原有更好的电催化性能.用溶胶-凝胶法将胆固醇氧化酶固定在碳纳米管负载铂修饰的浸蜡石墨电极表面,构建了一种新型的胆固醇生物传感器.实现了低电位下对胆固醇的间接测定.胆固醇浓度在4.0×10-6~1×10-4 mol/L范围内与其峰电流的增量呈现良好的线性关系.检出限为1.4×10-6 mol/L.该传感器的灵敏度高,选择性好,可以避免样品中大量易氧化物质的干扰,且寿命长,性能稳定. 展开更多
关键词 胆固醇 浸蜡 固定 修饰电极 实验 发现 寿命 溶胶-凝胶技术 碳纳米管 电催化性能
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利用胆固醇氧化酶转化胆固醇制备胆甾-4-烯-3-酮 被引量:20
4
作者 吕陈峰 陈毅力 +2 位作者 王龙刚 杨胜利 王武 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2001年第5期485-488,共4页
用酶法催化氧化胆固醇制备胆甾 4 烯 3 酮相对于化学法合成具有反应简单、成本较低等优点 .作者探讨了在正辛烷作为有机相的两相反应体系中 ,以胆固醇氧化酶催化氧化胆固醇制备胆甾 4 烯 3 酮的方法 .在胆固醇质量浓度为 4 0 g/L ... 用酶法催化氧化胆固醇制备胆甾 4 烯 3 酮相对于化学法合成具有反应简单、成本较低等优点 .作者探讨了在正辛烷作为有机相的两相反应体系中 ,以胆固醇氧化酶催化氧化胆固醇制备胆甾 4 烯 3 酮的方法 .在胆固醇质量浓度为 4 0 g/L ,反应时间 4 0min、反应温度 4 0℃、磷酸缓冲液 正辛烷体积比 3:2、通氧 4 0L/h及搅拌转速 30 0r/min下 ,胆固醇转化率达到 92 % ,经薄板层析及紫外扫描 ,发现转化产物为单一的胆甾 4 烯 3 展开更多
关键词 胆甾-4-烯-3-酮 两相体系 胆固醇 胆固醇氧化酶 生物转化
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胆固醇氧化酶转化蛋黄胆固醇工艺的优化 被引量:15
5
作者 吕陈峰 王龙刚 +1 位作者 杨胜利 王武 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2001年第6期555-559,共5页
研究了用响应面分析法 (RSM )优化酶法转化蛋黄胆固醇的工艺 ,发现胆固醇氧化酶(COD)添加量及蛋黄粉的稀释率是影响蛋黄胆固醇转化率最重要的因素 .在模拟优化的条件下 :反应时间为 14.15h ,蛋黄粉稀释率为 3.5 4 ,COD为 5 .39U /g时 ,... 研究了用响应面分析法 (RSM )优化酶法转化蛋黄胆固醇的工艺 ,发现胆固醇氧化酶(COD)添加量及蛋黄粉的稀释率是影响蛋黄胆固醇转化率最重要的因素 .在模拟优化的条件下 :反应时间为 14.15h ,蛋黄粉稀释率为 3.5 4 ,COD为 5 .39U /g时 ,胆固醇转化率达 85 6 1% .对氧化产物进行分析发现 :仅有单一产物胆甾烯酮 ,该产物具有降血脂、减肥等功效 . 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶 蛋黄胆固醇 响应面分析法 转化工艺 优化 食品 蛋黄粉
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胆固醇氧化酶高产菌株的复合诱变选育 被引量:17
6
作者 桑吉 王龙刚 +1 位作者 李忠琴 王武 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期87-89,共3页
为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高... 为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高了140%。证明该联合诱变手段对甾短杆菌产胆固醇氧化酶具有良好的诱变效果。 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶 甾短杆菌 复合诱变 亚硝基胍 超声波
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溶胶-凝胶法固定胆固醇氧化酶偶联普鲁士蓝化学修饰电极的研究 被引量:14
7
作者 李建平 彭图治 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期798-802,共5页
用溶胶-凝胶法将胆固醇氧化酶固定在普鲁士蓝修饰的玻碳电极表面,制成了一种新型胆固醇传感器,实现了低电位下对胆固醇的间接测定,胆固醇的测定范围伏安法为5×10^(-7)~8×10^(-5)mol/L,安培法为5×10^(-6)~5×10^(-4... 用溶胶-凝胶法将胆固醇氧化酶固定在普鲁士蓝修饰的玻碳电极表面,制成了一种新型胆固醇传感器,实现了低电位下对胆固醇的间接测定,胆固醇的测定范围伏安法为5×10^(-7)~8×10^(-5)mol/L,安培法为5×10^(-6)~5×10^(-4)mol/L。伏安法检出限为1.2×10^(-7)mol/L,是目前所见灵敏度最高的胆固醇传感器之一,该传感器对胆固醇的测定可避免常规电化学传感器测定中由于样品中大量存在的易氧化物质所带来的干扰,该传感器的寿命长,使用次数在300次以上。 展开更多
关键词 溶胶-凝胶法 固定化 胆固醇氧化酶 普鲁士蓝 化学修饰电极 生物传感器 胆固醇 测定
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钴原卟啉附修饰玻碳电极为基底的胆固醇酶电极 被引量:8
8
作者 邓青 董绍俊 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1993年第9期1214-1217,共4页
本文利用钴原卟啉对H_2O_2氧化有很高催化活性的特点,以钴原卟啉修饰玻碳电极为基底,戊二醛交联法固定胆固醇氧化酶,以电聚合邻苯二胺膜抗干扰、抗毒化.得到了线性范围为0.1~2mmol/L,响应时间在30s以内,可连续使用150次的胆固醇酶电极.
关键词 钴原卟啉 修饰电极 胆固醇氧化酶
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聚吡咯固定胆固醇氧化酶/普鲁士蓝安培传感器的研制 被引量:5
9
作者 李建平 彭图治 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期669-673,共5页
利用电聚合吡咯的方法将胆固醇氧化酶固定在普鲁士蓝 (PB)修饰玻碳电极表面 ,制成了一种新型胆固醇安培传感器。PB膜修饰电极催化过氧化氢电还原 ,于 0V(vs.Ag ACl)产生灵敏还原峰 ,利用安培法可对胆固醇进行间接测定。胆固醇的测定范围... 利用电聚合吡咯的方法将胆固醇氧化酶固定在普鲁士蓝 (PB)修饰玻碳电极表面 ,制成了一种新型胆固醇安培传感器。PB膜修饰电极催化过氧化氢电还原 ,于 0V(vs.Ag ACl)产生灵敏还原峰 ,利用安培法可对胆固醇进行间接测定。胆固醇的测定范围为 0~ 2× 10 - 4mol L ,检出限为 6× 10 - 7mol L ,灵敏度较当前胆固醇传感器有明显的提高。 展开更多
关键词 聚吡咯 固定化 胆固醇氧化酶 普鲁士蓝 生物传感器 安培法 研制 电化学传感器 胆固醇传感器
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三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质 被引量:7
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作者 王龙刚 梁爽 王武 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期190-194,210,共6页
三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白... 三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2+和Ag+离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。 展开更多
关键词 甾短杆菌 胆固醇氧化酶 分离纯化 三相分离 酶学性质
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双水相非离子表面活性剂萃取法分离胆固醇氧化酶 被引量:4
11
作者 季文明 陈毅力 +1 位作者 吕陈峰 王武 《江南学院学报》 2000年第2期3-6,共4页
TritonX -114是一种常用的表面活性剂。双水相萃取分离法适合于分离具有一定疏水特性的水溶性蛋白质。在研究了其浊点、浓度、pH值、分离时间和分离温度等影响因素后 ,得到了分离胆固醇氧化酶的优化条件。可以直接对发酵上清液进行处理 ... TritonX -114是一种常用的表面活性剂。双水相萃取分离法适合于分离具有一定疏水特性的水溶性蛋白质。在研究了其浊点、浓度、pH值、分离时间和分离温度等影响因素后 ,得到了分离胆固醇氧化酶的优化条件。可以直接对发酵上清液进行处理 ,一次萃取可使酶液体积缩小10倍 ,总酶活回收率为70%。 展开更多
关键词 双水相萃取 胆固醇氧化酶 非离子型表面活性剂
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产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件的优化 被引量:8
12
作者 杨海麟 王长城 +4 位作者 张玲 孙艳 白洁 王武 杨建勋 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期670-674,共5页
在摇瓶中对产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件进行了优化,优化培养基为甘油10 g/L,胰蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,KH2PO42 g/L,K2HPO44 g/L,Na2HPO4.12 H2O7 g/L,(NH4)2SO41.2 g/L,NH4Cl 0.2 g/L,MgSO4.7 H2O1 g/L;优化... 在摇瓶中对产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件进行了优化,优化培养基为甘油10 g/L,胰蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,KH2PO42 g/L,K2HPO44 g/L,Na2HPO4.12 H2O7 g/L,(NH4)2SO41.2 g/L,NH4Cl 0.2 g/L,MgSO4.7 H2O1 g/L;优化的诱导条件为:对数生长中期诱导,IPTG浓度为0.3 mmol/L。在优化的培养基和优化的诱导条件下,单位菌体产酶量达745.86 U/g,菌体产酶水平达1 625.97 U/L,为优化前的700 U/L的2.3倍。 展开更多
关键词 重组E.coli JM109/pTrc99a—COD 胆固醇氧化酶 培养基优化 诱导条件优化
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食品中胆固醇脱除技术的研究进展 被引量:8
13
作者 李红 《肉类研究》 2010年第1期55-58,共4页
开发低胆固醇食品以保证人们的饮食健康成为当今食品加工与产业研究的热点之一。本文概述了食品中胆固醇脱除或降低的物理方法、化学方法和生物方法。重点综述了有较大开发前景的超临界流体萃取法、β-环糊精包埋法和胆固醇氧化酶氧化法。
关键词 胆固醇 脱除 超临界萃取 Β-环糊精 胆固醇氧化酶
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胆固醇氧化酶发酵研究 被引量:5
14
作者 韩振芳 陈亮 王武 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 1999年第2期18-22,共5页
对从土壤中筛选到的菌株DGC-007进行UV诱变,选育到菌株DGC-048.对影响突变株产酶的条件进行了优化,初步确定了DGC-048合适的产酶摇瓶培养基组成.在发酵温度为30℃,培养基起始pH7.5~8.0的条件下... 对从土壤中筛选到的菌株DGC-007进行UV诱变,选育到菌株DGC-048.对影响突变株产酶的条件进行了优化,初步确定了DGC-048合适的产酶摇瓶培养基组成.在发酵温度为30℃,培养基起始pH7.5~8.0的条件下,接种量10%,发酵48h,产酶可达350μmol/(min·L) 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶 发酵 胆甾烯酮 COD
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荧光毛细分析法测定胆固醇 被引量:7
15
作者 杨海朋 王丙涛 +2 位作者 陈仕国 李乔喜 戈早川 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第8期1862-1863,1866,共3页
目的:建立采用荧光毛细分析法(FCA)测定液体中胆固醇含量的低成本方法。方法:样品溶液加入到含有一定量胆固醇氧化酶和过氧化物酶的对甲基酚溶液中反应一定时间,用毛细管吸取溶液放入毛细管固定座中,用荧光分光光度计测量荧光强度。结果... 目的:建立采用荧光毛细分析法(FCA)测定液体中胆固醇含量的低成本方法。方法:样品溶液加入到含有一定量胆固醇氧化酶和过氧化物酶的对甲基酚溶液中反应一定时间,用毛细管吸取溶液放入毛细管固定座中,用荧光分光光度计测量荧光强度。结果:在优化的测试条件下,胆固醇浓度在1.0~10.0μmol/L范围内与荧光强度成线性关系,线性回归方程为:F=280.4+72.3c(n=5,r=0.99),样品加标回收率为88.2%~111.0%。结论:荧光毛细分析法灵敏度高,试剂消耗量减少99%,检测成本低,是检测液态样品中胆固醇的有效定性、定量方法。 展开更多
关键词 荧光毛细分析法 对甲基酚 胆固醇氧化酶 过氧化物酶 胆固醇
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基于蛋白质直接电子转移的全胆固醇传感器 被引量:6
16
作者 万莉 赵常志 +2 位作者 徐华筠 王钦 焦奎 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期670-674,共5页
以壳聚糖为载体,将血红蛋白、胆固醇氧化酶及胆固醇酯酶固定在玻碳电极表面,在不使用任何电子媒介体的条件下,利用血红蛋白和电极之间的直接电子转移,制备出高选择性的全胆固醇生物传感器,并用于测定血清中总胆固醇含量.利用循环... 以壳聚糖为载体,将血红蛋白、胆固醇氧化酶及胆固醇酯酶固定在玻碳电极表面,在不使用任何电子媒介体的条件下,利用血红蛋白和电极之间的直接电子转移,制备出高选择性的全胆固醇生物传感器,并用于测定血清中总胆固醇含量.利用循环伏安法和恒电位法研究了该传感器的电化学特性.在优化的实验条件下,该传感器对胆固醇响应的线性范围为10~110mg/dL,检出限为5mg/dL(信噪比的3倍),响应时间为60s.对人血清中总胆固醇的测定表明,RSD小于6.2%,回收率为95%-106%. 展开更多
关键词 胆固醇传感器 胆固醇氧化酶 胆固醇酯酶 血红蛋白 壳聚糖
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微生物胆固醇氧化酶的研究进展 被引量:7
17
作者 张玲 杨海麟 +2 位作者 孙燕 霍惠芝 王武 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第9期225-229,共5页
微生物来源的胆固醇氧化酶在医疗诊断、食品加工、生化制药、抗虫基因工程等方面具有良好的应用价值,引起了国内外学者的广泛关注,并开展了大量的研究工作。本文就胆固醇氧化酶的种类、酶学性质、结构、功能、应用及近年来基因工程等方... 微生物来源的胆固醇氧化酶在医疗诊断、食品加工、生化制药、抗虫基因工程等方面具有良好的应用价值,引起了国内外学者的广泛关注,并开展了大量的研究工作。本文就胆固醇氧化酶的种类、酶学性质、结构、功能、应用及近年来基因工程等方面的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶 酶学性质 结构 应用 基因工程
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马红球菌4-2胆固醇氧化酶的急性毒理学研究 被引量:6
18
作者 李清 牛天贵 赫华昆 《肉品卫生》 2005年第4期27-30,共4页
马红球菌4-2产生的胆固醇氧化酶应用于降解食品原料中的胆固醇,效果明显,降解率大于40%为。了进一步研究其安全性,选用霍恩氏法测定半数致死量LD50,结果证明胞内酶提取液的经口LD50大于21500mg/kg,属于无毒级别,有必要进入后续阶段的毒... 马红球菌4-2产生的胆固醇氧化酶应用于降解食品原料中的胆固醇,效果明显,降解率大于40%为。了进一步研究其安全性,选用霍恩氏法测定半数致死量LD50,结果证明胞内酶提取液的经口LD50大于21500mg/kg,属于无毒级别,有必要进入后续阶段的毒理学试验;活菌制剂在1.72×109个/ml剂量以下不会引起急性毒性反应。考虑到安全可靠性和简化操作,生产中应放弃使用活菌制剂,重点深入研究胞内酶的安全性,为生产实践提供参考。 展开更多
关键词 马红球菌 胆固醇氧化酶 毒理学研究 急性 LD50 活菌制剂 半数致死量 毒理学试验 安全可靠性 食品原料 毒性反应 生产实践 安全性 胞内酶 酶应用 降解率 提取液
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Breuilacterium sp.DGCDC—82发酵罐中生产胆固醇氧化酶 被引量:6
19
作者 王龙刚 吕陈峰 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2003年第2期34-37,43,共5页
用Breuilacterium sp.DGCDC-82在7L发酵罐中分批培养。分别对添加剂吐温-80、培养温度、培养基的pH、通风量和搅拌速度 在胆固醇氧化酶的生产中的影响进行了研究。结果显示以上条件均对产酶有影响。在不同的发酵阶段改变发酵操作条件... 用Breuilacterium sp.DGCDC-82在7L发酵罐中分批培养。分别对添加剂吐温-80、培养温度、培养基的pH、通风量和搅拌速度 在胆固醇氧化酶的生产中的影响进行了研究。结果显示以上条件均对产酶有影响。在不同的发酵阶段改变发酵操作条件,发酵20h最高酶活可达1203U/L,生产强度可达60U/(L·h)。既有产地提高了胆固醇氧化酶的产量,又防止了发酵过程中的泡沫外溢。 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶 短杆菌 发酵
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干酪乳杆菌21008体外降胆固醇活性研究 被引量:6
20
作者 李永 陈有亮 +1 位作者 胡徐登 周宪河 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期171-174,共4页
用胆固醇氧化酶指示平板和测定胆固醇氧化酶活力的方法对干酪乳杆菌21008是否具有产生胆固醇氧化酶的能力进行了研究,并以添加胆固醇的MRS培养基和蛋黄对菌株降胆固醇能力进行了评价。结果发现干酪乳杆菌能产生胆固醇氧化酶类似物,并且... 用胆固醇氧化酶指示平板和测定胆固醇氧化酶活力的方法对干酪乳杆菌21008是否具有产生胆固醇氧化酶的能力进行了研究,并以添加胆固醇的MRS培养基和蛋黄对菌株降胆固醇能力进行了评价。结果发现干酪乳杆菌能产生胆固醇氧化酶类似物,并且测得胞内酶活为302.7U/L,但没有胞外酶。菌株使MRS-CHO培养基中的胆固醇降低69.5%,主要是通过菌体细胞吸收、转化作用;而在蛋黄中发酵,优化条件下:V蛋黄∶V水=2∶1,接种量8%,发酵30h,胆固醇降低16.82%,pH降为5.57。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 降胆固醇 胆固醇氧化酶
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