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丙肝病毒融合抗原基因导入烟草叶绿体及转化株同质化的研究 被引量:10
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作者 山松 张中林 +1 位作者 吴祥甫 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期143-147,共5页
植物生物反应器的研究已成为当前基因工程领域的一个新生长点。本实验用 PCR方法 ,从丙型肝炎病毒 c DNA文库中克隆了非结构 NS3区基因片段及核心抗原 C区基因片段 ,并在两段基因间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 NS3... 植物生物反应器的研究已成为当前基因工程领域的一个新生长点。本实验用 PCR方法 ,从丙型肝炎病毒 c DNA文库中克隆了非结构 NS3区基因片段及核心抗原 C区基因片段 ,并在两段基因间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 NS3- C。将该融合基因转入烟草叶绿体转化及表达载体中 ,通过基因枪转化法得到转基因植株。对 NS3- C融合基因转化植株进行 PCR及 Southern杂交试验分析 ,证明外源基因已整合到烟草叶绿体基因组中 ;对转化植株的 Southern杂交试验还表明 ,通过不断地分化筛选培养 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 融合抗原基因 烟草 叶绿体表达体系 同质化
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烟草叶绿体16S启动子的克隆改造及转基因植株的获得 被引量:6
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作者 山松 张中林 +2 位作者 陈曦 刘春英 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期536-540,共5页
设计引物并克隆了烟草叶绿体16SrDNA基因的启动子,并在其下游加入了rbcL基因的SD序列,以使该启动子能有效翻译外源基因;进一步以aadA基因作为外源基因,以psbA基因的3’序列为终止子,构建成aadA基因表达盒;将此表达盒插入烟草叶绿体同源... 设计引物并克隆了烟草叶绿体16SrDNA基因的启动子,并在其下游加入了rbcL基因的SD序列,以使该启动子能有效翻译外源基因;进一步以aadA基因作为外源基因,以psbA基因的3’序列为终止子,构建成aadA基因表达盒;将此表达盒插入烟草叶绿体同源片段trnK-psbA-trnH中,构建成烟草叶绿体转化及表达载体P16T.用基因枪微弹轰击转化法,将该载体导人野生型大烟草叶绿体中,建立了烟草叶绿体遗传转化体系,转化频率为0.5株/枪.对转化植株进行PCR及遗传杂交实验分析,证明外源基因已在烟草叶绿体中稳定整合并遵循母系遗传规律. 展开更多
关键词 烟草 16S启动子 基因枪转化法 叶绿体 克隆
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叶绿体表达系统的研究进展 被引量:1
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作者 杜美丽 刘秀明 +4 位作者 江莺 李巍 朱海林 李海燕 李校堃 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第9期336-341,共6页
综述了叶绿体表达系统的特点及其转化方法,重点阐述了其研究现状及应用。针对本实验室的研究情况对其存在的问题进行了分析,并提出展望。
关键词 叶绿体表达系统 重组蛋白 表达
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Establishment of Chlamydomonas reinhardtii chloroplast expression
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作者 Guochang Fan Ning Su +2 位作者 Zhonglin Zhang Xiangfu Wu Guifang Shen 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第18期1659-1664,共6页
An expression vector pACⅢ containing the chimeric gene HAV- VP3P1 and HCV-C gene has been constructed and transferred to C. reinhardtii by the biolistic method. The trans-formants have been identified by PCR, Souther... An expression vector pACⅢ containing the chimeric gene HAV- VP3P1 and HCV-C gene has been constructed and transferred to C. reinhardtii by the biolistic method. The trans-formants have been identified by PCR, Southern-blotting, Northern-blotting and Western-blotting assays after selecting on resistant medium and incubating in the dark. The results 展开更多
关键词 HAV-VP3P1 GENE HCV-C GENE C. REINHARDTII chloroplast expression system HOMOLOGOUS recombinant.
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SARS亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD在烟草叶绿体中的高效表达 被引量:1
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作者 钟雪 齐广勋 +3 位作者 杨静 邢国杰 刘剑锋 杨向东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期920-930,共11页
叶绿体表达系统为植物源重组药用蛋白和亚基疫苗的生产提供了一个有效的途径。为验证SARS亚基疫苗在叶绿体中表达的可行性,以及为植物源SARS亚基疫苗的生产提供一套高效、低成本的技术平台,本研究将人工优化合成的SARS-CoV突刺蛋白(S蛋... 叶绿体表达系统为植物源重组药用蛋白和亚基疫苗的生产提供了一个有效的途径。为验证SARS亚基疫苗在叶绿体中表达的可行性,以及为植物源SARS亚基疫苗的生产提供一套高效、低成本的技术平台,本研究将人工优化合成的SARS-CoV突刺蛋白(S蛋白)受体结合区序列RBD与载体分子CTB融合基因导入烟草叶绿体基因组中。PCR和Southern杂交分析表明,外源融合基因已整合到烟草叶绿体基因组中,并获得同质化。Western杂交分析表明,重组融合蛋白CTB-RBD在叶绿体转基因烟草中获得表达,且主要以可溶性单体形式存在。ELISA分析表明,在不同生长阶段、不同生长部位和不同时间点烟草叶片中,重组融合蛋白CTB-RBD的表达水平呈现明显的变化。重组蛋白在成熟叶片中的表达水平最高可以达到10.2%TSP。本研究通过SARS亚基疫苗RBD在烟草叶绿体中的高效表达,有望为植物源SARS亚基疫苗的生产以及SARS血清抗体的检测提供一个有效的技术平台。 展开更多
关键词 突刺受体结合区RBD SARS 植物源亚基疫苗 叶绿体表达系统
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