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Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定 被引量：4
1
作者 江文正 金宁一 韩文瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期341-342,345,共3页
目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染... 目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV 展开更多
关键词 Ⅰ型人免疫缺陷病毒 gag-gp120 嵌合基因 核酸疫苗
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无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗的制备及免疫效果评价 被引量：2
2
作者 王蓓 李桂欢 +3 位作者 鲁义善 汤菊芬 吴灶和 简纪常 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1926-1936,共11页
为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7... 为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip-GAPDH在各个组织(包括肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏)中的表达情况。采用ELISA、Real-time PCR法和体外攻毒法分别分析各实验组不同时间血清抗体效价、免疫基因(IgM、IL-1β和CD8)表达变化规律和相对保护率,研究该嵌合性疫苗对吉富罗非鱼的保护效果。结果显示,实验组在免疫接种第7和第28天时,注射点周围的肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏均能检测到嵌合性质粒,实验组罗非鱼血清抗体效价均高于对照组并于21 d时达到峰值(1∶4 096);qPCR数据表明,实验组鱼体胸腺、头肾和脾脏的IgM、IL-1β和CD8基因的mRNA表达量均出现了上调,并且在胸腺、头肾和脾脏中的表达量分别在免疫后第12和第48 h达到峰值;免疫后42 d进行人工攻毒后计算免疫保护率为93.3%。以上研究结果表明,本研究构建的无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗在罗非鱼链球菌病防治中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 无乳链球菌 罗非鱼 Sip-GAPDH 嵌合基因 核酸疫苗 免疫保护率
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HBV与HCV的融合与联合基因免疫效果的研究 被引量：2
3
作者 尹文 徐志凯 +3 位作者 薛小平 马越云 付莉 吕欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期473-474,共2页
目的对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合注射的免疫效果。方法大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150μg,按0、2和4wk,共免疫3次。免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测... 目的对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合注射的免疫效果。方法大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150μg,按0、2和4wk,共免疫3次。免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测免疫小鼠脾细胞CTL的杀伤功能。结果无论从抗HBs和抗HCV抗体出现的时间、阳转率和应答强度,还是CTL水平,CSpcDNA3.1融合重组质粒都优于CpcD-NA3.1+SpcDNA3.1联合基因的免疫。结论融合DNA疫苗,有望成为慢性病毒性肝炎预防和治疗的制剂。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 融合dna疫苗
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分子生物学技术在黄病毒属病毒疫苗研制中的应用及该类疫苗的研究进展
4
作者 李静 俞永新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期88-93,共6页
黄病毒科黄病毒属包括70多种病毒,其中约40多种与人类疾病相关,大部分为虫媒病毒。其中对人类致病的重要病原主要有登革病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒、蜱传脑炎病毒等。分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒疫苗的设计带来了新的策略。... 黄病毒科黄病毒属包括70多种病毒,其中约40多种与人类疾病相关,大部分为虫媒病毒。其中对人类致病的重要病原主要有登革病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒、蜱传脑炎病毒等。分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒疫苗的设计带来了新的策略。本文对当前分子生物学技术如感染性克隆技术在黄病毒属病毒疫苗研制中的应用以及嵌合疫苗、蛋白亚单位疫苗和DNA疫苗的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 黄病毒 感染性克隆 嵌合疫苗 亚单位疫苗 dna疫苗
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A、B型流感病毒HA1嵌合基因疫苗的构建及免疫保护研究
5
作者 王芙艳 杨忠东 +5 位作者 杨文 余平 张风华 常海燕 陈则 方芳 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第4期477-481,共5页
为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗。将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/I... 为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗。将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/Ibaraki/2/85攻击,通过测定小鼠的血清抗HA抗体和保护效果(包括存活率、肺部病毒量和体重丢失率)来评价DNA疫苗的免疫效果。结果表明:A、B型流感病毒HA1嵌合DNA疫苗能保护小鼠抵抗两种致死量流感病毒的攻击,具有提供交叉保护的能力。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素 dna嵌合疫苗
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小鼠对乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗免疫应答
6
作者 张建军 杨向东 +2 位作者 史小玲 袁志平 王超 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第1期61-63,共3页
目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.... 目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.1和生理盐水,im免疫小鼠2次(间隔2wk),末次接种后2wk时检测特异性抗体、γ-IFN水平和淋巴细胞转化率.结果:质粒pcHBV-CD80和pcHBV免疫后均可检测到特异性的抗体,抗-preS2在pcHBV-CD80组和pcHBV组分别为15125.52nkat/L和14463.56nkat/L;抗-HBc在pcHBV-CD80组和pcHBV组分别为7607.35nkat/L和7711.21nkat/L,两组间无明显差异;但pcHBV-CD80更能增加γ-IFN的产生(1266.7ng/Lvs986.3ng/L,P<0.01),并增强免疫小鼠的激淋巴细胞转化.结论:含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗可诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答. 展开更多
关键词 嵌合dna疫苗 小基因 CD80分子 乙型肝炎病毒
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结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒的构建与鉴定
7
作者 赵晔 张帆 +2 位作者 史小玲 张建军 钟森 《泸州医学院学报》 2003年第5期382-385,共4页
目的 :采用基因重组技术 ,将结核杆菌Ag85A与协同刺激信号CD80基因融合 ,构建成融合结核DNA疫苗 ,旨在提高结核DNA疫苗的免疫效果 ,可望通过基因免疫 ,获得免疫原性强 ,以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答 ,安全可靠的新型... 目的 :采用基因重组技术 ,将结核杆菌Ag85A与协同刺激信号CD80基因融合 ,构建成融合结核DNA疫苗 ,旨在提高结核DNA疫苗的免疫效果 ,可望通过基因免疫 ,获得免疫原性强 ,以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答 ,安全可靠的新型结核病疫苗 .方法①pcDNA3-tPA -Ag85A质粒的构建和鉴定以V1Jns-tPA-Ag85A质粒为模板 ,PCR扩增tPA -Ag85A ,(不含终止密码 ) ,定向插入pcDNA3载体的BamHⅠ和EcoRⅠ位点之间 ,构建成pcDNA3-tPA -Ag85A质粒。②pcDNA3-tPA -Ag85A/CD80质粒的构建与鉴定以pcDNA3CD80质粒为模板 ,扩增CD80 (含终止密码 )定向插入pcDNA3-tPA -Ag85A质粒的EcoRⅠ和XbaⅠ位点之间 ,构建成pcDNA -tPA-Ag85A/CD80融合DNA真核表达质粒。结果 :重组质粒pcDNA3-tPA -Ag85A和pcDNA3-tPA -Ag85A/CD80经酶切鉴定和测序鉴定均构建正确。结论 :结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒构建成功 ,为进一步研究比较其免疫保护效果 。 展开更多
关键词 结核杆菌 抗原85A 协同刺激分子 dna疫苗 融合质粒 真核表达质粒 AG85A CD80 基因融合
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