鸡IL-2基因的克隆及序列测定 被引量：15

1

作者 陈奖励 王欢 +4 位作者 宋英晖 宋秀龙 陈红岩 姜永厚 卢景良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第4期11-13,共3页

应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载... 应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载体 ,克隆了扩增片段 ,经酶切鉴定及 DNA序列测定 ,确认为鸡 IL- 2基因 ,该序列与 Sundick报道的结果一致。对氨基酸的比较发现 ,鸡 IL - 2与牛 IL - 2和 IL - 15之间分别存在着 2 4 %及4 4 %的同源性 ,该基因系国内首次获得经序列测定证实的鸡 IL- 2 c DNA基因 ,这为今后进一步进行鸡 IL- 展开更多

关键词 鸡IL-2 分子克隆 RT-PCR 免疫传剂 预防接种

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鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量：16

2

作者 闫若潜 谢彩华 +3 位作者 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期594-604,共11页

【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡... 【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-li 展开更多

关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素2 嵌合基因 融合表达 活性

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重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究 被引量：15

3

作者 牛泽 任晓峰 +3 位作者 曾岩 刘明 卢春颖 李广兴 《中国家禽》 北大核心 2010年第3期20-23,共4页

为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强... 为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强禽流感疫苗免疫效果的作用,提高了血清中的抗体水平﹑增加了脾脏T淋巴细胞CD4+﹑CD8+亚群数量。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 禽流感灭活疫苗 免疫效果

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鸡IL-2和IL-15基因真核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用 被引量：10

4

作者 胡慧琼 王红宁 +5 位作者 袁斌 周生 李晓英 黄勇 柳萍 徐永莉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期805-810,共6页

根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫... 根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫后第10d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组和pDNAIL-2+AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组(P<0.05)。免疫后第10 d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05);免疫后第23 d,pDNAIL-2+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分率显著高于pDNAIL-15+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05)。证实pDNAIL-2和pDNAIL-15能提高禽流感灭活疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 鸡白细胞介素-15 禽流感疫苗 HI抗体

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鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达 被引量：12

5

作者 龚婷 杨孝朴 +3 位作者 李银聚 张春杰 吴庭才 程相朝 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-14,40,共5页

根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核... 根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核表达载体pET28a(+),构建原核重组表达质粒pET28a-IL-2和pET28a-△SIL-2,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,在22 ku和18 ku处有2条清晰的蛋白带,相同条件下pET28a-△SIL-2表达量较高.RNAstructure软件分析表明,pET28a-IL-2的mRNA5′端序列形成了复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,证明信号肽序列的存在对ChIL-2基因在原核细胞中的表达有一定的影响. 展开更多

关键词 鸡 细胞白介素 IL-2基因 信号肽 原核表达 MRNA二级结构

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重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定 被引量：7

6

作者 陈吉刚 陈维虎 +5 位作者 周继勇 王金勇 齐静 郑肖娟 俞照正 孙红霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1034-1039,共6页

将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2... 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。 展开更多

关键词 重组鸡白细胞介素2 诱导表达 生物学活性 单克隆抗体 多克隆抗体 抗原捕获ELISA 淋巴因子

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固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测 被引量：8

7

作者 王彦彬 卢中华 +5 位作者 康相涛 宋素芳 孙桂荣 韩瑞丽 李国喜 李守义 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第5期66-71,共6页

参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20～35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白... 参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20～35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与GenBank上已发表的序列相比,存在2 个核苷酸变异。重新设计表达引物,以克隆质粒pGEM-T—chIL一2为模板PCR扩增表达片段,对表达片段进行 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pET28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行IPTG 诱导表达,然后对表达产物进行SDS-PAGE电泳鉴定,结果表明,表达蛋白主要以包涵体的形式存在,表达蛋白分子质量约为18 ku;目的蛋白表达量占总量的18％。体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性。 展开更多

关键词 固始鸡 白细胞介素2 原核表达 生物活性

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鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展 被引量：6

8

作者 于新友 赵蕾 +1 位作者 王艳 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期81-84,共4页

鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,具有显著的免疫增强作用,不仅在T细胞、B细胞的生长与分化和NK细胞的激活等方面发挥重要作用,而且与其他细胞因子一起发挥免疫功能,是一种能影响机体免疫反应各个方面的调节因子... 鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,具有显著的免疫增强作用,不仅在T细胞、B细胞的生长与分化和NK细胞的激活等方面发挥重要作用,而且与其他细胞因子一起发挥免疫功能,是一种能影响机体免疫反应各个方面的调节因子。文章综述了鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 细胞因子 分子生物学 疾病防治

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鸡IL-2基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测 被引量：6

9

作者 谢昆 蒋成砚 +2 位作者 胡俊杰 全舒舟 宋银银 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第14期5-11,共7页

根据GenBank中已发表的鸡白细胞介素2(IL-2)mRNA基因序列,利用Premier5.0软件设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,以ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出鸡IL-2基因。经琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为432bp,分离纯化片段... 根据GenBank中已发表的鸡白细胞介素2(IL-2)mRNA基因序列,利用Premier5.0软件设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,以ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出鸡IL-2基因。经琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为432bp,分离纯化片段,克隆入pMD-18T载体,转化DH5α感受态细胞,获得阳性重组质粒,经酶切鉴定,测序结果显示,该基因全长432bp,含有一个432bp的开放阅读框,编码143个氨基酸。生物软件分析结果表明该序列与GenBank中发表的鸡的IL-2的核苷酸序列同源性为98.8%,与黄牛、马、鸡、绵羊、牛、犬、人、山羊、鼠、水牛的核苷酸同源性分别为31.2%、28.2%、27.3%、30.6%、26.2%、31.7%、30.1%、30.8%、26.6%、30.6%。与GenBank中发表的鸡IL-2编码的氨基酸序列同源性为95.8%,与上述动物的氨基酸序列同源性分别为7.6%、7.6%、9.7%、7.6%、6.9%、10.4%、11.8%、7.6%、9.0%、7.6%、10.4%。这表明鸡的IL-2基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用IL-2增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 克隆 序列分析 蛋白结构预测

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蛹虫草多糖对鸡脾脏淋巴细胞的影响 被引量：6

10

作者 王米 杨锐乐 +6 位作者 张丽芳 张赛奇 孟新宇 张可煜 费陈忠 薛飞群 胡元亮 《中国家禽》 北大核心 2014年第5期20-23,共4页

试验将7种浓度蛹虫草多糖（CMP）单独或与刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖（A570值）的变化;将5种浓度的CMP 40％乙醇提取物（CMP40）、CMP 50％乙醇提取物（CM... 试验将7种浓度蛹虫草多糖（CMP）单独或与刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖（A570值）的变化;将5种浓度的CMP 40％乙醇提取物（CMP40）、CMP 50％乙醇提取物（CMP50）分别与ConA加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定白细胞介素-2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ的含量.结果显示,CMP在31.25～2 000 μg/mL时,CMP40＋ConA组的A570值显著高于ConA对照组;CMP在31.25～500μg,/mL时,CMP50＋ConA组A570值显著高于ConA对照组,CMP40＋LPS组、CMP50＋LPS组的A570值显著高于LPS对照组;CMP40在125～1 000μg/mL时、CMP50在500 μg/mL时,各多糖组的A570值显著高于细胞对照组;CMP40和CMP50在250～1 000 μg/mL时,各多糖组的IL-2和IFN-γ浓度显著高于对照组.结果表明,CMP40和CMP50在合适的剂量能单独或协同ConA、LPS刺激鸡的T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫能力. 展开更多

关键词 蛹虫草多糖 鸡脾脏淋巴细胞 增殖 白细胞介素-2 Γ-干扰素

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鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达 被引量：3

11

作者 周继勇 陈吉刚 +2 位作者 王金勇 张德勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期419-423,共5页

鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达... 鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%. 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 基因表达 Pichia-methanolica酵母 细胞因子

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艾维茵商品肉用鸡白细胞介素-2基因的克隆及其二级结构分析 被引量：2

12

作者 陈吉刚 周继勇 +5 位作者 王金勇 程丽琴 陈庆新 叶菊秀 郑肖娟 商绍彬 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第1期19-24,共6页

根据Sundick等发表的鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因序列设计一对特异性引物 ,从伴刀豆球蛋白A (ConA)体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法获得艾维茵商品肉用鸡IL 2cDNA基因。将其连接到测序载体 pGEM TEasyVector ,测序后用... 根据Sundick等发表的鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因序列设计一对特异性引物 ,从伴刀豆球蛋白A (ConA)体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法获得艾维茵商品肉用鸡IL 2cDNA基因。将其连接到测序载体 pGEM TEasyVector ,测序后用Pcgene和DNAstar软件分析。结果显示 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2基因长 734bp ,编码一由 14 3个氨基酸组成的前体蛋白 ,与来自GenBank的另外 3个品系 (Kestrelleghorn ,Obese和SC)鸡IL 2比较 ,其核苷酸和氨基酸序列同源性为 98.9%～ 10 0 %和 97.2 %～ 10 0 %。二级结构预测表明 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2N端存在一条由 2 2个氨基酸组成的前导肽及 4个半胱氨酸形成的链内二硫键 ,并存在类似人IL 2的 4个α螺旋 ,这些结构很可能在维持IL 2生物学活性中发挥重要作用。基因系统进化树分析表明 ,艾维茵商品肉用鸡与SC鸡IL 2的亲缘关系较近 ,与火鸡、Kestrelleghorn和Obese鸡IL 2的亲缘关系较远。 展开更多

关键词 艾维菌 商品肉用鸡 白细胞 介素-2 基因 克隆 二级结构 基因系统进化树

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究 被引量：4

13

作者 杨晓璐 闫若潜 +4 位作者 李勤楠 赵雪丽 谢彩华 刘梅芬 张书阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3153-3159,共7页

为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应... 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。 展开更多

关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素-2 重组融合蛋白 体外活性

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鸡白细胞介素-6-2嵌合基因的融合表达及其表达产物活性的研究 被引量：4

14

作者 张书阳 谢彩华 +7 位作者 闫若潜 吴志明 赵明军 赵雪丽 刘梅芬 杨晓璐 张代宝 张林海 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期974-980,共7页

为研制具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方... 为研制具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化。采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体的特异性免疫反应活性,采用MTS法检测重组融合蛋白体外促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示,成功构建了ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒rpQE-30-ChIL-6-linker-ChIL-2,表达的重组融合蛋白的分子质量约为40ku,纯化后的纯度在96%以上。该重组融合蛋白可分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一重组蛋白对照。本研究结果初步证明了rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在对鸡免疫细胞的增殖作用方面与rChIL-6和rChIL-2蛋白的作用相似,为进一步研究rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的活性奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 白细胞介素-6基因 白细胞介素-2基因 嵌合基因 融合表达 活性

原文传递

鸡白细胞介素-2抗家禽病毒病作用及机制研究进展

15

作者 沈金艳 郭晶 +3 位作者 孙晓虹 王丙敬 李文溪 李旭勇 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期158-164,共7页

家禽病毒病严重危害我国养殖业的发展和公共卫生安全。鸡白细胞介素-2(Chicken interleukin-2,ChIL-2)是一类具有免疫活性的细胞因子,广泛参与非特异性免疫和特异性免疫应答,发挥重要的抗病毒作用,在动物疾病防治、新型免疫佐剂研发、... 家禽病毒病严重危害我国养殖业的发展和公共卫生安全。鸡白细胞介素-2(Chicken interleukin-2,ChIL-2)是一类具有免疫活性的细胞因子,广泛参与非特异性免疫和特异性免疫应答,发挥重要的抗病毒作用,在动物疾病防治、新型免疫佐剂研发、提高动物抗病能力等方面具有广阔的应用前景。文章对ChIL-2的结构、ChIL-2介导的免疫信号通路及其在家禽病毒病的应用进行综述,旨在为研发新型家禽抗病毒药物和疫苗佐剂提供理论参考。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素-2 家禽病毒病 信号通路 抗病毒活性

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鸡白细胞介素2基因的克隆、原核表达及功能研究 被引量：2

16

作者 郭川 郑忠辉 +3 位作者 吴国平 林由 苏文金 曹敏杰 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期760-765,共6页

以RT-PCR法从鸡脾脏细胞中扩增出鸡白细胞介素2编码基因,通过双酶切、连接步骤克隆进原核表达载体pQE30及pGEX-4T-3,构建了鸡白细胞介素2基因的重组原核表达质粒pQE30-chIL-2及pGEX-chIL-2.重组质粒转化大肠杆菌JM109后经诱导表达,分别... 以RT-PCR法从鸡脾脏细胞中扩增出鸡白细胞介素2编码基因,通过双酶切、连接步骤克隆进原核表达载体pQE30及pGEX-4T-3,构建了鸡白细胞介素2基因的重组原核表达质粒pQE30-chIL-2及pGEX-chIL-2.重组质粒转化大肠杆菌JM109后经诱导表达,分别得到两种表达产物.以SDS-PAGE和Westernblot检测确认表达产物为带6组氨酸标签及GST蛋白的融合鸡白细胞介素2,分子量分别为16 kDa及39.5 kDa.表达蛋白与抗鸡白细胞介素2单抗均有良好的免疫结合性,进一步证实为鸡白细胞介素2.表达产物经过纯化复性后,具有明显促进鸡脾淋巴细胞增殖的作用. 展开更多

关键词 鸡白细胞介素2 克隆 原核表达 免疫印迹

原文传递

单克隆抗体的制备及鸡白细胞介素 2的纯化(英文) 被引量：4

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作者 曹敏杰 Jimmy Kwang 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第4期232-237,共6页

通过将鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因克隆至表达载体pQE30 ,此蛋白在大肠杆菌中得到表达并被纯化。用纯化ChIL 2作为抗原免疫BALB/C鼠 ,得到了抗ChIL 2单克隆抗体。以单克隆抗体制备免疫亲和层析柱 ,作者首次从植物血凝素刺激的鸡淋巴... 通过将鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因克隆至表达载体pQE30 ,此蛋白在大肠杆菌中得到表达并被纯化。用纯化ChIL 2作为抗原免疫BALB/C鼠 ,得到了抗ChIL 2单克隆抗体。以单克隆抗体制备免疫亲和层析柱 ,作者首次从植物血凝素刺激的鸡淋巴细胞上清液中高度纯化了鸡白细胞介素 2天然蛋白。纯化蛋白在SDS PAGE上呈现分子质量分别为 16ku和 14ku的两条带 ,提示鸡白细胞介素 2可能为糖基化蛋白。 展开更多

关键词 鸡 白细胞介素2 表达 单克隆抗体 纯化

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共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力研究 被引量：4

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作者 云水丽 张伟 +5 位作者 刘武杰 张小荣 陈素娟 吴艳涛 彭大新 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期430-436,共7页

将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病... 将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病毒转移载体质粒转染至已感染野生型鸡痘病毒282E4株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,经蓝斑筛选获得纯化的重组鸡痘病毒rFPV-H5AIL2。间接免疫荧光试验表明重组鸡痘病毒能够表达H5亚型AIV HA;RT-PCR和间接免疫荧光试验证实重组鸡痘病毒可表达chiIL-2。SPF鸡和商品蛋鸡的免疫攻毒保护试验表明,经rFPV-H5AIL2免疫的试验鸡的抗体水平显著高于经rFPV-H5A免疫的试验鸡;在SPF鸡中rFPV-H5AIL2免疫组和rPFV-H5A免疫组的攻毒保护率和排毒率相当,但在商品鸡中rFPV-H5AIL2免疫组的攻毒保护率显著高于rFPV-H5A免疫组,而排毒率显著低于后者。本研究为研制新型禽流感重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素 鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒 免疫效力

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鸡干扰素γ与白介素2对外周血中Th1细胞分化相关细胞因子的影响 被引量：3

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作者 刘玲 焦鹏涛 +4 位作者 王萌 李晶 孙蕾 范文辉 刘文军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3329-3343,共15页

为了探讨鸡干扰素γ(chicken interferon-γ,ChIFN-γ)与白介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)对1型辅助性T细胞(type 1 helper T lymphocytes,Th1)分化的影响,本研究原核表达、纯化了ChIFN-γ与ChIL-2,并以不同浓度刺激刀豆球蛋白A(c... 为了探讨鸡干扰素γ(chicken interferon-γ,ChIFN-γ)与白介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)对1型辅助性T细胞(type 1 helper T lymphocytes,Th1)分化的影响,本研究原核表达、纯化了ChIFN-γ与ChIL-2,并以不同浓度刺激刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)活化的鸡外周血淋巴细胞,检测其对Th1细胞分化相关细胞因子表达的影响。结果表明,不同浓度的ChIFN-γ与ChIL-2均可上调Th1细胞分化相关细胞因子的转录水平,最佳刺激浓度分别为12.5μg/mL和25.0μg/mL。然后将ChIFN-γ和ChIL-2分别与H9N2灭活疫苗联用,以口服或肌肉注射方式免疫无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡,检测其对Th1细胞分化相关细胞因子表达的影响。结果表明,与单独使用H9N2疫苗相比,ChIFN-γ和ChIL-2均能显著上调H9N2疫苗诱导的Th1细胞分化相关细胞因子的转录水平,且肌肉注射的效果优于口服。本研究通过对Th1细胞分化相关细胞因子进行检测,从体外和体内水平证实了ChIFN-γ与ChIL-2能够增强ConA或H9N2灭活疫苗诱导的Th1细胞分化,为其作为疫苗佐剂使用提供了理论依据。 展开更多

关键词 鸡干扰素γ 鸡白介素2 Th1细胞分化 细胞因子 疫苗佐剂

原文传递

鸡IL-2基因的克隆及GST-chIL2融合蛋白的表达 被引量：2

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作者 王文成 舒秀伟 +1 位作者 宣华 陆承平 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第1期14-17,共4页

根据Sundick等发表的鸡IL-2基因(chIL2)序列设计合成特异性引物,用RT-PCR从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞扩增出450 bp的目的片段,酶切鉴定及序列测定结果表明为鸡IL-2基因。该基因包括鸡IL-2基因的全部开放阅读框,编码142个氨基酸组成的蛋白... 根据Sundick等发表的鸡IL-2基因(chIL2)序列设计合成特异性引物,用RT-PCR从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞扩增出450 bp的目的片段,酶切鉴定及序列测定结果表明为鸡IL-2基因。该基因包括鸡IL-2基因的全部开放阅读框,编码142个氨基酸组成的蛋白质,与GenBank鸡IL-2基因相比,在编码氨基酸的49位有一个氨基酸缺失;而与Broiler、SC、Chenren和Xiaoshan鸡在编码氨基酸上完全一致,具有较近的亲缘关系;与Kestrel来航鸡、来航SPF鸡、Obese、Silky和Xianju鸡等有1-4个氨基酸的差异;与火鸡和鹌鹑的氨基酸同源性分别为69.9%和59.4%。将克隆到的基因插入到融合蛋白原核表达载体pGEX-6p-1中,得到重组表达质粒pGEX-IL2。将此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,表达出了大小约为40 ku的GST-chIL2融合蛋白,其中GST部分为26 ku,鸡IL-2为14 ku,与预期的鸡IL-2成熟蛋白大小一致。 展开更多

关键词 鸡 IL-2 融合蛋白 表达

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