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鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备
被引量：
9
1
作者
徐志本
余为一
+2 位作者
仲大莲
李槿年
周杰
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期51-55,共5页
用自行设计的1对引物,通过RT-PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798bp。核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%。将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了pGEX-4T-1-chMHCⅡβ。经...
用自行设计的1对引物,通过RT-PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798bp。核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%。将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了pGEX-4T-1-chMHCⅡβ。经诱导表达,获得分子大小约为53 000的融合蛋白,其中chMHCⅡβ链大小约27 000。经亲和层析,获得纯化GST-β融合蛋白,进一步用此蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡MHCⅡβ链抗体。经过琼扩和ELISA检测,表明该融合蛋白具有良好的抗原性。
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关键词
mhc
ⅱ
β链基因
克隆
原核表达
下载PDF
职称材料
鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
2
2
作者
叶平
余为一
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第28期15668-15669,共2页
[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆...
[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。
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关键词
鸡
mhc
ⅱ
类分子
单克隆抗体
鉴定
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职称材料
题名
鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备
被引量：
9
1
作者
徐志本
余为一
仲大莲
李槿年
周杰
机构
安徽农业大学动物科技学院
中国科技大学生命科学学院
出处
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期51-55,共5页
基金
国家自然科学基金(30270974)资助
文摘
用自行设计的1对引物,通过RT-PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798bp。核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%。将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了pGEX-4T-1-chMHCⅡβ。经诱导表达,获得分子大小约为53 000的融合蛋白,其中chMHCⅡβ链大小约27 000。经亲和层析,获得纯化GST-β融合蛋白,进一步用此蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡MHCⅡβ链抗体。经过琼扩和ELISA检测,表明该融合蛋白具有良好的抗原性。
关键词
mhc
ⅱ
β链基因
克隆
原核表达
Keywords
chicken
mhc
ⅱ
gene
of
β
chain
cloning
prokaryotic
expression
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
S852.4 [农业科学—畜牧兽医]
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职称材料
题名
鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
2
2
作者
叶平
余为一
机构
安徽农业大学
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第28期15668-15669,共2页
基金
国家自然科学基金(30671537)项目资助
文摘
[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。
关键词
鸡
mhc
ⅱ
类分子
单克隆抗体
鉴定
Keywords
chicken
mhc
class
ⅱ
molecules
Monoclonal
antibody
Identification
分类号
S831.49 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备
徐志本
余为一
仲大莲
李槿年
周杰
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
9
下载PDF
职称材料
2
鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定
叶平
余为一
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010
2
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职称材料
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