鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响 被引量：19

1

作者 杨发龙 岳华 贾文祥 《中国家禽》 北大核心 2005年第19期17-20,共4页

为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使... 为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响;③人工感染法氏囊病的防治试验。在攻毒前后注射IL-2,均可明显降低发病率和死亡率。本研究结果表明,鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力,与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素2 体液免疫 细胞免疫 巨噬细胞 传染性法氏囊病 白细胞介素 免疫功能 雏鸡 鸡il-2 腹腔巨噬细胞

下载PDF 职称材料

重组鸡IL-2的抗球虫作用 被引量：17

2

作者 谢昆 李祥瑞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第8期7-9,共3页

鸡白细胞介素2(Ch IL-2)是一种重要的细胞因子,对Ch IL-2的抗球虫作用做了初步研究,分别在14日龄和21日龄给实验雏鸡胸部肌肉注射不同剂量的重组Ch IL-2蛋白,28日龄口服接种1×105个活球虫卵囊,结果表明,重组Ch IL-2蛋白能降低相对... 鸡白细胞介素2(Ch IL-2)是一种重要的细胞因子,对Ch IL-2的抗球虫作用做了初步研究,分别在14日龄和21日龄给实验雏鸡胸部肌肉注射不同剂量的重组Ch IL-2蛋白,28日龄口服接种1×105个活球虫卵囊,结果表明,重组Ch IL-2蛋白能降低相对卵囊产量、减少盲肠病变、提高相对增重。其中以注射250μg重组Ch IL-2蛋白的试验组抗球虫效果最好,相对卵囊产量为23.26%,盲肠病变记分分别为0.4,相对增重率为97.80%,综合抗球虫指数(AC I)达到192.8。抗球虫效果良好,明显的优于其他试验组。 展开更多

关键词 鸡il-2 球虫病

下载PDF 职称材料

鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达 被引量：11

3

作者 许健 樊拥军 +3 位作者 李龙 万旺军 李建荣 于涟 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期339-342,共4页

目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕... 目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果　SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论　表明重组鸡IL 展开更多

关键词 鸡il-2 pPIC9 毕赤酵母 免疫增强剂

下载PDF 职称材料

鸡白细胞介素2原核表达载体的构建及表达产物的鉴定 被引量：6

4

作者 提金凤 张艳梅 +2 位作者 郝贵杰 邵卫星 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2005年第14期15-17,共3页

将鸡白细胞介素2(IL-2)的cDNA克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,构建原核重组表达质粒pET-IL-2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,37℃用IPTG诱导3.5h后,SDS-PAGE检测表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。将诱导后的工程菌超声波裂解,离心... 将鸡白细胞介素2(IL-2)的cDNA克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,构建原核重组表达质粒pET-IL-2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,37℃用IPTG诱导3.5h后,SDS-PAGE检测表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。将诱导后的工程菌超声波裂解,离心后的沉淀用PBS洗涤5～6次,得到高纯度的目的蛋白。 展开更多

关键词 鸡 白细胞介素2 原核表达载体 包涵体 免疫增强剂

下载PDF 职称材料

Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备 被引量：4

5

作者 邓晨 郑海南 +5 位作者 于佩峰 张鑫 吴山力 王梦云 吕岩 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期889-894,共6页

鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表... 鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362bp的Intein基因融合在同一开放阅读框内,编码相对分子质量约为71 000的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-intein融合蛋白,应用chitin-sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western blot分析抗体特异性。结果,应用纯化的chIL-2-intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。 展开更多

关键词 INTEIN chicken il-2 pTYB1 多克隆抗体

原文传递

用DNA免疫研制鸡白细胞介素2单克隆抗体 被引量：4

6

作者 提金凤 张艳梅 +3 位作者 李志杰 宋宗好 郝贵杰 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期537-540,共4页

构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原... 构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原,通过间接ELISA法对杂交瘤进行筛选,经亚克隆后共获得3株针对鸡IL-2的特异性单克隆抗体,并对这3株单克隆抗体的特性进行了鉴定。 展开更多

关键词 DNA免疫 鸡白细胞介素2 重组表达质粒

下载PDF 职称材料

应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体 被引量：3

7

作者 邓晨 于佩峰 +3 位作者 张鑫 王梦云 吕岩 艾永兴 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期368-374,共7页

研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分... 研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。 展开更多

关键词 内肽酶 鸡白介素-2 pTYB1 多克隆抗体

原文传递

重组鸡白介素2和干扰素α融合蛋白的表达及生物学活性的检测

8

作者 苗天姿 赵款 +5 位作者 雷白时 张武超 庞敬红 梁飞 袁万哲 汪恩强 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期85-91,共7页

为表达鸡的白介素-2(Interleukin-2,IL-2)和干扰素α(Interferon-α,IFN-α)融合蛋白,并进一步探究融合蛋白的生物学活性,本试验根据GenBank登录的鸡IL-2和IFN-α基因序列,使用linker连接成为嵌合基因,合成pET-32a-rChIL-2-IFN-α原核... 为表达鸡的白介素-2(Interleukin-2,IL-2)和干扰素α(Interferon-α,IFN-α)融合蛋白,并进一步探究融合蛋白的生物学活性,本试验根据GenBank登录的鸡IL-2和IFN-α基因序列,使用linker连接成为嵌合基因,合成pET-32a-rChIL-2-IFN-α原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达。通过MTT法检测重组融合蛋白促鸡外周血淋巴细胞(PBLC)增殖活性;通过细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的抗病毒活性;通过RT-qPCR检测了融合蛋白对干扰素刺激基因和内源性干扰素的作用。结果表明,重组融合蛋白促PBLC增殖活性效果显著,在CEF上具有抗VSV活性;重组融合蛋白能够显著地上调CEF中5种干扰素刺激基因和内源性干扰素的mRNA转录水平。综上所述,本试验表达的重组融合蛋白具有促淋巴细胞增殖活性和抗病毒作用,试验结果为进一步探究融合蛋白在鸡体内的活性奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡il-2 鸡IFN-α 融合蛋白 抗病毒 干扰素刺激基因

下载PDF 职称材料

鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量：53

9

作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页

利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。

关键词 新城疫 F基因 鸡il-2 重组DNA疫苗

下载PDF 职称材料

传染性法氏囊病病毒VP2/4/3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究 被引量：7

10

作者 万旺军 谢荣辉 +3 位作者 李龙 许健 郑江涛 于涟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期137-143,共7页

应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pC... 应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2和pCI-IL-2-VP2/4/3。将其制备成DNA疫苗,肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫,定期测定鸡抗IBDV血清ELISA抗体效价及病毒中和抗体效价。加强免疫后3周用IBDV标准强毒株攻击,连续观察3天后全部扑杀,计算保护率及囊体比,并进行组织病理学检查。结果表明:1)融合基因重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3免疫后能明显增强IBDVDNA疫苗对强毒的攻击保护(保护率分别为83.3%、91.6%),显著高于pCI-VP2/4/3单独免疫对照组(58.3%);2)诱导产生的抗IBDV血清ELISA抗体效价明显增高(P<0.05),同时能提高DNA疫苗诱导产生的中和抗体效价(P<0.05);3)能显著促进鸡外周血液T淋巴细胞增殖反应。上述结果提示:IBDV VP2/4/3与ChIL-2基因融合后发挥了相互协同作用,ChIL-2产生了分子免疫佐剂效应;融合基因DNA疫苗能增强IBDV DNA疫苗的免疫原性,促进了机体特异性免疫应答。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 鸡白细胞介素2 基因融合 DNA疫苗 免疫原性

下载PDF 职称材料

鸡新城疫系疫苗诱导鸡IL-2基因转录及cDNA克隆的研究 被引量：2

11

作者 李银聚 程相朝 +1 位作者 吴庭才 张春杰 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第9期69-72,共4页

　应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的... 　应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列,与已发表的IL-2基因的同源性分别为97.7%～99.8%和95.1%～99.3%。其中第8位、68位和130位氨基酸(分别是L,V和S)的变异是其他品种鸡所没有的。 展开更多

关键词 鸡il-2基因 转录 克隆 序列分析

下载PDF 职称材料

IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：1

12

作者 万旺军 谢荣辉 +2 位作者 李龙 许健 于涟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期255-262,共8页

构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyov... 构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础. 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白 鸡白细胞介素2 融合基因 真核表达

下载PDF 职称材料

参考鸡IL—2的制备及理化特性研究

13

作者 李庆章 刘忠贵 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第4期354-359,共6页

采用健康鸡脾脏Ｔ淋巴细胞体外诱生粗制参考鸡白细胞介素２（ＩＬ—２），并进行５０％和８０％饱和度硫酸铵盐析，以去除大部分致分裂原伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和小牛血清蛋白．继用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤柱色谱，可得到... 采用健康鸡脾脏Ｔ淋巴细胞体外诱生粗制参考鸡白细胞介素２（ＩＬ—２），并进行５０％和８０％饱和度硫酸铵盐析，以去除大部分致分裂原伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和小牛血清蛋白．继用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤柱色谱，可得到两个ＩＬ—２活性峰．第１活性峰组分分子量（ＭＷ）２６．ｇＫＤ、等电点（ＰＩ）５．８５，为二聚体形式存在的高活性ＩＬ—２．第２活性峰组分ＭＷ１２．１ＫＤ，ＰＩ６．２５，为单体形式存在的低活性ＩＬ—２．经此法制备的高活性参考鸡ＩＬ—２使用过程中活性稳定，是可靠的ＩＬ—２检测参考系统． 展开更多

关键词 鸡 参考鸡 白细胞介素2 分子量 等电点 免疫

下载PDF 职称材料

鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用 被引量：16

14

作者 姜永厚 刘忠贵 +2 位作者 陈奖励 宋秀龙 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期22-24,共3页

利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2... 利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 鸡il-2 佐剂 基因疫苗 免疫

下载PDF 职称材料

共表达鸡IBDV VP2和IL-2基因的重组毕赤酵母的构建及免疫原性

15

作者 丁轲 余祖华 +3 位作者 张春杰 程相朝 刘一尘 王臣 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期74-78,共5页

通过重叠延伸PCR扩增IL2-VP2串联基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆正向插入到毕赤酵母表达质粒pPICZαA中,经PCR和双酶切鉴定表明成功构建了酵母重组表达载体pPICZαA-IL2-VP2。将该重组质粒线性化后电击转化入感受态毕赤酵母X-33菌株,... 通过重叠延伸PCR扩增IL2-VP2串联基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆正向插入到毕赤酵母表达质粒pPICZαA中,经PCR和双酶切鉴定表明成功构建了酵母重组表达载体pPICZαA-IL2-VP2。将该重组质粒线性化后电击转化入感受态毕赤酵母X-33菌株,构建成分泌型表达IL2-VP2的酵母工程菌株。经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE、Western-blot活性检测分析表明IL2-VP2基因长度为1.85kb,包含缺失了TAA终止密码子的IL-2基因和缺失了ATG起始密码子的VP2基因,两个基因之间以高度柔韧性的(Gly-Gly-Gly-Ser)编码核苷酸相连接,并在该体系中得到分泌表达,分子量约为50kD,且表达产物对传染性法囊病毒具有较好的反应原性。 展开更多

关键词 重叠延伸PCR 鸡il-2 IBDV VP2 融合表达 毕赤酵母

下载PDF 职称材料