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定量评价南方根结线虫趋性方法的建立及应用 被引量：1
1
作者 魏钰洋 谢佳 +5 位作者 王帅 丁晓帆 杨紫薇 白永霞 姚友植 孙然锋 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1068-1075,1046,共9页
为了能够定量评价南方根结线虫Meloidogyne incognita 2龄幼虫的趋化性,本研究以Pluronic F-127胶体为载体,建立了一种能够借助体式显微镜相机及ImageJ灰度值统计法对根结线虫移动轨迹进行量化检测,从而判断根结线虫2龄幼虫趋性的测试方... 为了能够定量评价南方根结线虫Meloidogyne incognita 2龄幼虫的趋化性,本研究以Pluronic F-127胶体为载体,建立了一种能够借助体式显微镜相机及ImageJ灰度值统计法对根结线虫移动轨迹进行量化检测,从而判断根结线虫2龄幼虫趋性的测试方法,并用10种已报道的具有趋性活性的化合物验证了方法的可靠性。另外,采用该方法测定了40种化合物对南方根结线虫的趋性活性。研究结果表明,10μg/mL质量浓度下,22种测试化合物具有吸引活性、11种化合物具有驱避活性,其中对茴香胺和间苯三酚分别具有较强的吸引和驱避线虫活性。进一步研究表明,对茴香胺对南方根结线虫2龄幼虫具有低浓度吸引和高浓度驱避的趋性活性,而间苯三酚对该幼虫的驱避活性随浓度增高而增强。该研究为快速定量评价化合物对南方根结线虫2龄幼虫的趋性及发现高活性根结线虫驱避剂提供了一种可靠的方法。 展开更多
关键词 定量评价 根结线虫 趋性活性 引诱剂 驱避剂
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茎瘤固氮根瘤菌甲基化受体蛋白Tlp1的功能 被引量：2
2
作者 杨金保 刘卫 +5 位作者 姜南 吴海龙 李岩 李润植 张红梅 解志红 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期648-654,共7页
【目的】考察茎瘤固氮根瘤菌中趋化基因簇上游的受体蛋白Tlp1编码基因的突变表型,初步探究其功能机理。【方法】利用同源重组和三亲本接合转移的方法构建突变株,在TY培养基中测定生长情况,半固体平板法观察趋化圈,刚果红固体培养基观察... 【目的】考察茎瘤固氮根瘤菌中趋化基因簇上游的受体蛋白Tlp1编码基因的突变表型,初步探究其功能机理。【方法】利用同源重组和三亲本接合转移的方法构建突变株,在TY培养基中测定生长情况,半固体平板法观察趋化圈,刚果红固体培养基观察胞外多糖和次生代谢产物的分泌,乙炔还原法测定菌株的固氮酶活性。【结果】与野生型菌株相比,tlp1突变株的生长速率没有影响。在以甘油为碳源的L3半固体平板上突变株的趋化圈变小,其回补菌株能部分回补趋化能力。突变株的胞外多糖分泌与野生型没有区别,但其次生代谢产物黑色素出现的时间比野生型稍早。在固氮酶活性测定中,发现突变株酶活性明显比野生型降低,回补菌株能够部分回补。【结论】茎瘤固氮根瘤菌Tlp1蛋白对甘油表现出一定的趋化能力,并且影响细菌的次生代谢产物和固氮能力。 展开更多
关键词 茎瘤固氮根瘤菌ORS571 趋化 黑色素 固氮酶活性
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人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系
3
作者 罗丝 杨克恭 +4 位作者 刘长征 邓艳春 苏林 孔燕 陈松森 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第2期144-148,共5页
目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coliBL21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行... 目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coliBL21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。 展开更多
关键词 人造血增效因子 C末端缺失变异体 趋化活性
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补阳还五汤通过调控PI3K/Akt、JAK2/STAT3信号促进BMSC趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠神经元活性及认知功能的影响 被引量：6
4
作者 宋颖军 李旭 +1 位作者 刘小舟 张国福 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期4206-4213,共8页
目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健... 目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健康大鼠53只,随机分为健康组(健康大鼠常规饲养)、损伤组(建立脊髓损伤模型)、干预组(补阳还五汤治疗)、对照组(甲泼尼龙治疗),每组12只,剩余5只大鼠用于补阳还五汤含药血清制备。流式细胞术鉴定BMSCs细胞。Transwell小室法测大鼠BMSCs迁移。高架十字迷宫和Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态。TUNEL测脊髓组织神经细胞凋亡。免疫组化检测p-JAK2、p-STAT3。Western印迹测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt。结果传代后的培养细胞呈旋窝状或放射状贴壁生长,细胞多呈星形、梭形或三角状,培养3代后,细胞贴壁加快、形态均一,呈旋窝状或单层放射状生长。培养细胞表面抗原CD29、CD90为阳性,CD31、CD45为阴性,提示其为BMSCs细胞。与健康组相比,损伤组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著降低,不同时间的潜伏期显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组与对照组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著升高,不同时间的潜伏期显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标对比无统计学差异(P>0.05)。健康组脊髓组织结构完整。损伤组脊髓组织疏松水肿,有细胞空泡变性产生。相较于损伤组,干预组与对照组大鼠脊髓组织病理形态有所改善。与健康组相比,损伤组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著降低,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著升高,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标水平无统计学差异(P>0.05)。结论� 展开更多
关键词 补阳还五汤 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt) 内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3 骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移 神经元活性 认知功能
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Rg1皂苷单体对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)的趋化作用及酶活性的影响
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作者 陈彦霏 张善铭 +4 位作者 许永华 宫赫阳 田义新 张连学 卢宝慧 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期110-116,共7页
收集吉林省人参主产区锈腐病病样,对其进行病原菌的分离鉴定,确定优势病原菌。采用菌丝生长速率法、孢子萌发法、菌丝干质量测量法3种方法相结合,测定Rg1不同质量浓度条件下对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)的致病力影响。通过测定... 收集吉林省人参主产区锈腐病病样,对其进行病原菌的分离鉴定,确定优势病原菌。采用菌丝生长速率法、孢子萌发法、菌丝干质量测量法3种方法相结合,测定Rg1不同质量浓度条件下对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)的致病力影响。通过测定施加不同质量浓度Rg1后人参粗壮柱孢菌(I.robusta)侵染相关酶活力测定试验确定最佳Rg1添加量。开展了Rg1最适质量浓度条件下,pH值以及碳氮源对人参锈腐病菌菌丝生长的影响。研究结果表明,当Rg1质量浓度为2 mg/L时对粗壮柱孢菌的生长具有较强的促进作用。在此条件下,病原菌最适生长pH值为5.0,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸钾。明确了Rg1对人参锈腐病菌(I.robusta)具有明显的趋化性。 展开更多
关键词 粗壮柱孢菌 Rg1皂苷 趋化作用 酶活测定 人参
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