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纤维二糖差向异构酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究 被引量：5
1
作者 韩亮 杨瑞金 +3 位作者 赵伟 沈秋云 张文斌 华霄 《工业微生物》 CAS CSCD 2016年第1期16-21,共6页
首先将来源于Caldicellulosiruptor saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶基因CsCEm进行密码子优化,然后进行全基因合成,再将其引入到载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-Cs CEm并转化入毕赤酵母GS115,得到酵母工程菌株。经微孔板筛选、... 首先将来源于Caldicellulosiruptor saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶基因CsCEm进行密码子优化,然后进行全基因合成,再将其引入到载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-Cs CEm并转化入毕赤酵母GS115,得到酵母工程菌株。经微孔板筛选、摇瓶筛选得到酶活最高的重组工程菌GS115-4-19。该菌株经甲醇诱导144 h后,摇瓶发酵液上清酶活达到0.42 U/m L。酶学性质研究结果表明：该酶的最适pH为7.5,且在pH 6.0~8.0范围内相对酶活都在80%以上;在pH 4~9的缓冲液中放置24 h后仍保持原酶活力的80%以上;最适温度为80℃,在60℃~80℃保温30 min后,相对酶活在80%以上。动力学研究结果表明该酶对底物乳糖的Km和Vmax分别为（120.27±9.96）mmol/L和（1.035±0.05）mmol/L/min。纤维二糖差向异构酶在毕赤酵母中的成功表达为生物酶法合成乳果糖提供了重要参考。 展开更多
关键词 纤维二糖差向异构酶 毕赤酵母 性质
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嗜热网球菌纤维二糖差向异构酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化 被引量：4
2
作者 王鑫淼 张康 +1 位作者 陈晟 吴敬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期24-31,共8页
通过化学方法合成嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)来源的纤维二糖差向异构酶基因ce,将其引入到载体pBSuL3-ce,构建重组质粒pBSuL3-ce并转化进枯草芽孢杆菌,发酵48h后测定胞内酶活为7. 5U/ml。酶学性质结果表明:该酶的最适pH为8.... 通过化学方法合成嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)来源的纤维二糖差向异构酶基因ce,将其引入到载体pBSuL3-ce,构建重组质粒pBSuL3-ce并转化进枯草芽孢杆菌,发酵48h后测定胞内酶活为7. 5U/ml。酶学性质结果表明:该酶的最适pH为8. 5;最适温度为85℃,85℃的半衰期为120min。为降低发酵成本,对发酵培养基进行优化:以35g/L豆粕粉为氮源、5g/L甘油为碳源时,酶活力最高可达12. 3U/ml。依据摇瓶优化的条件在3L发酵罐中扩大培养,胞内酶活达到56U/ml,比摇瓶培养酶活提高了8倍。利用发酵所得酶制备乳果糖,在乳糖浓度为400g/L、反应温度为85℃、初始pH 8. 5、加酶量为20U/ml的条件下,乳果糖转化率可达51%。 展开更多
关键词 嗜热网球菌 纤维二糖差向异构酶 枯草芽孢杆菌 酶学性质 发酵优化
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利用纤维二糖差向异构酶制备乳果糖的研究进展 被引量：3
3
作者 徐铮 张倩 +1 位作者 李克文 徐虹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期279-291,共13页
乳果糖是由D-半乳糖和D-果糖两个基团通过β-1,4糖苷键连接而成的还原型二糖;乳果糖口服液具有治疗慢性便秘和肝性脑病的功效,在100多个国家作为常见非处方药(OTC)使用,需求量十分巨大;乳果糖还可以作为益生元改善人体肠道菌群关系。乳... 乳果糖是由D-半乳糖和D-果糖两个基团通过β-1,4糖苷键连接而成的还原型二糖;乳果糖口服液具有治疗慢性便秘和肝性脑病的功效,在100多个国家作为常见非处方药(OTC)使用,需求量十分巨大;乳果糖还可以作为益生元改善人体肠道菌群关系。乳果糖的生产依赖化学法,其催化剂对人体有害,下游分离难度大。近年来,纤维二糖差向异构酶被发现能够高效催化乳糖制备乳果糖,该技术绿色环保、步骤简单,具有很强的产业化前景。本文结合自身研究经历对纤维二糖差向异构酶的研发情况进行总结,并综述了乳果糖酶法制备技术的现状。 展开更多
关键词 乳果糖 纤维二糖差向异构酶 生物催化 益生元 便秘 肝性脑病
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纤维二糖2-差向异构酶的酶学性质及在乳制品中的应用 被引量：2
4
作者 方正 肖雅琴 +3 位作者 陈秋铭 张涛 江波 沐万孟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1121-1128,共8页
近年来,对纤维二糖2-差向异构酶(CE)的研究取得了许多突破性的进展。针对不同的寡糖,CE表现出不同程度的差向异构化和异构化活性,催化乳糖生成的依匹乳糖和乳果糖,两种都是有益生元性质的乳糖衍生物,在保健食品及药品中具有非常广阔的... 近年来,对纤维二糖2-差向异构酶(CE)的研究取得了许多突破性的进展。针对不同的寡糖,CE表现出不同程度的差向异构化和异构化活性,催化乳糖生成的依匹乳糖和乳果糖,两种都是有益生元性质的乳糖衍生物,在保健食品及药品中具有非常广阔的前景。因此,CE在工业应用的中游和下游工艺越来越引起重视,来自嗜温和嗜热微生物的CE也被应用于不同需求的生产中。尤其是嗜温微生物来源的CE能在较低温中保持活性,推进了CE在乳制品行业中的应用。作者针对性总结了CE的酶学性质和催化产物的最新研究进展,及其在乳制品行业中的发展。 展开更多
关键词 纤维二糖2-差向异构酶 依匹乳糖 乳果糖 乳制品
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乳果糖生产方法及其在肉鸡生产中的应用 被引量：1
5
作者 吕路芳 谢文惠 +1 位作者 姜宁 张爱忠 《中国饲料》 北大核心 2018年第19期15-19,共5页
乳果糖的工业生产主要是乳糖在碱性溶液中通过化学法获得,由于考虑到环境污染和繁琐的分离过程,所以酶法催化合成乳果糖一直被视为更好的选择。本文介绍了化学异构法和酶法催化合成乳果糖的方式,并对乳果糖在肉鸡生产中的应用进行了总结... 乳果糖的工业生产主要是乳糖在碱性溶液中通过化学法获得,由于考虑到环境污染和繁琐的分离过程,所以酶法催化合成乳果糖一直被视为更好的选择。本文介绍了化学异构法和酶法催化合成乳果糖的方式,并对乳果糖在肉鸡生产中的应用进行了总结,同时对乳果糖生产技术未来的发展进行了展望,以期为乳果糖的后续开发与利用提供一定的参考。 展开更多
关键词 乳果糖 转糖基作用 化学异构法 Β-半乳糖苷酶 纤维二糖差向异构酶 肉鸡
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纤维二糖差向异构酶的研究与应用概述 被引量：1
6
作者 徐铮 诸亚锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期248-254,共7页
纤维二糖差向异构酶(cellobiose 2-epimerase)是近年来颇受关注的一种工业酶,主要应用于乳果糖(lactulose)的生物法制备,也适用于D-甘露糖的生产。全球年需求量近10万t,具有较高的商业价值,其中乳果糖可用于治疗便秘和肝性脑病,是一种... 纤维二糖差向异构酶(cellobiose 2-epimerase)是近年来颇受关注的一种工业酶,主要应用于乳果糖(lactulose)的生物法制备,也适用于D-甘露糖的生产。全球年需求量近10万t,具有较高的商业价值,其中乳果糖可用于治疗便秘和肝性脑病,是一种常见的非处方药,效果显著。该文针对纤维二糖差向异构酶制备乳果糖工艺的酶源挖掘、蛋白质工程改造、固定化酶研究等方面进行了综述,为制备乳果糖的理论和应用研究提供参考。 展开更多
关键词 纤维二糖差向异构酶 乳果糖 依匹乳糖 乳糖 酶催化
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来源于 Dictyoglomus sp.NZ13-RE01的纤维二糖差向异构酶酶学性质和乳果糖制备研究
7
作者 诸亚锋 徐铮 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期9-15,共7页
为高效制备纤维二糖差向异构酶,用于乳果糖生产,将来源于网团菌属Dictyoglomus sp.NZ13-RE01的纤维二糖差向异构酶基因引入到载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-NZ13-CE并转化表达宿主E.coli BL21(DE3),得到生产菌株BL21(DE3)-V1。该... 为高效制备纤维二糖差向异构酶,用于乳果糖生产,将来源于网团菌属Dictyoglomus sp.NZ13-RE01的纤维二糖差向异构酶基因引入到载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-NZ13-CE并转化表达宿主E.coli BL21(DE3),得到生产菌株BL21(DE3)-V1。该菌株在摇瓶中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导24 h后得到最高酶活力为0.53 U/mL的发酵液,在7.5 L发酵罐中高密度发酵,表达酶活力提升了8.1倍,达到4.30 U/mL发酵液。通过镍离子亲和层析柱纯化重组酶,研究NZ13-CE的酶学性质:该酶的最适反应温度为80℃,最适pH为8.0,分子质量为45.5 kDa,80℃下重组酶的活性半衰期为182 min,催化乳糖至乳果糖的最高转化率为52.5%,且依匹乳糖占总糖含量仅为9%。研究结果表明,NZ13-CE酶具有工业化生产乳果糖的应用潜力。 展开更多
关键词 纤维二糖差向异构酶 酶学性质 乳果糖 重组大肠杆菌 酶催化
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乳糖诱导纤维二糖差向异构酶的表达及热处理纯化 被引量：1
8
作者 汪明明 杨瑞金 +3 位作者 华霄 沈秋云 张文斌 赵伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期1-7,共7页
以Caldicellulosiruptor saccharolyticus纤维二糖差向异构酶(Cs CE)高效表达菌株E.coli BL21(DE3)为表达载体,研究乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Cs CE表达的效果。结果表明,在菌体培养至OD600=0.6时加入终浓度为10 g/L... 以Caldicellulosiruptor saccharolyticus纤维二糖差向异构酶(Cs CE)高效表达菌株E.coli BL21(DE3)为表达载体,研究乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Cs CE表达的效果。结果表明,在菌体培养至OD600=0.6时加入终浓度为10 g/L的乳糖,25℃下诱导20 h,最终发酵液中Cs CE酶活达801 U/L,较最优条件下IPTG诱导的酶活力提高1.4倍,粗酶液的比酶活提高37%。然后,根据Cs CE的热稳定性,采用热处理工艺对粗酶液进行纯化。经70℃、2 h热处理,绝大部分的杂蛋白变性沉淀,粗酶液中可溶性蛋白浓度降低85.9%,比酶活由0.89 U/mg提高到5.46 U/mg,纯化倍数达到6.14倍,酶活回收率为86.6%。乳糖诱导Cs CE的高效表达结合热处理的初步纯化工艺,为Cs CE的工业化生产提供有益的借鉴。 展开更多
关键词 纤维二糖差向异构酶(CsCE) 乳果糖 乳糖 诱导表达 热处理纯化
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