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鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定 被引量：13
1
作者 古少鹏 王敏霞 +1 位作者 赵素芬 郑明学 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1699-1704,共6页
为研究鸡E.tenella的宿主细胞——盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲... 为研究鸡E.tenella的宿主细胞——盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量,筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法,并进行了纯化和培养,对培养细胞进行了鉴定。结果表明:嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法;分离纯化的细胞接种后分别于第3-5天、第10-11天进入对数生长期,可存活14 d以上;经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞,所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%。用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞。 展开更多
关键词 盲肠上皮细胞 细胞分离 体外培养 鉴定 鸡胚
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鸡胚盲肠上皮细胞的传代培养 被引量：7
2
作者 古少鹏 赵素芬 +2 位作者 王运盛 郑明学 侯金环 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期409-415,共7页
本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式... 本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式;筛选了传代细胞培养液中L-GLN和胰岛素的最佳浓度,通过贴壁差进一步纯化盲肠上皮细胞,探索其合适的培养条件。通过形态学观察、透射电镜、免疫组织化学技术、组织化学技术、糖原染色、流式细胞术的方法对传代细胞特性进行了鉴定。结果表明:胰酶-EDTA联合消化、15min贴壁差纯化除去成纤维细胞,72.5mg.L-1 L-GLN、0.05mg.L-1胰岛素和5%FBS的传代细胞培养液更有利于盲肠上皮细胞的生长;经形态学和透射电镜观察,AKP、Vimentin及PAS染色,所培养的传代细胞具有典型的上皮细胞特征,在传代后24～72h盲肠上皮细胞纯度达95%以上,贴壁细胞覆盖率达85%以上;细胞凋亡测定表明,细胞连传5代,活性较好,第6代细胞凋亡率显著增加,贴壁细胞覆盖率降低。本研究提示用该法传代可获得稳定、数量大、活性高、纯度高的鸡胚盲肠上皮细胞。 展开更多
关键词 盲肠上皮细胞 传代培养 特性 鸡胚
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不同浓度胰岛素对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响 被引量：3
3
作者 张琦 史文倩 +5 位作者 段步婷 崔小珍 郭露露 张昱 郑明学 白瑞 《山西农业科学》 2021年第1期93-96,共4页
为了探讨不同浓度的胰岛素对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞生长和增殖的影响,试验选用16日龄SPF鸡胚,采用嗜热菌蛋白酶消化法无菌分离鸡胚盲肠组织,以含不同质量浓度胰岛素(0、5、10、15、20μg/mL)的培养基对盲肠上皮进行体外培养,对细... 为了探讨不同浓度的胰岛素对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞生长和增殖的影响,试验选用16日龄SPF鸡胚,采用嗜热菌蛋白酶消化法无菌分离鸡胚盲肠组织,以含不同质量浓度胰岛素(0、5、10、15、20μg/mL)的培养基对盲肠上皮进行体外培养,对细胞克隆形成率、生长曲线和上皮细胞角蛋白18进行测定。结果表明,培养基中添加10μg/mL胰岛素时,鸡胚盲肠上皮细胞的增殖差异极显著,胰岛素质量浓度为15、20μg/mL时,鸡胚盲肠上皮细胞增殖略有升高,但与胰岛素10μg/mL组相比,细胞增殖差异不显著;角蛋白18鉴定结果为阳性。表明在体外鸡胚盲肠上皮细胞培养中,10μg/mL胰岛素能促进鸡胚盲肠上皮细胞分裂、生长和增殖。胰岛素作为一个体外细胞生长的关键因子,可促进鸡胚盲肠上皮细胞的生长和增殖。 展开更多
关键词 鸡 盲肠上皮细胞 嗜热菌蛋白酶消化法 胰岛素 细胞增殖
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鸡胚盲肠上皮细胞体外培养纯化方法的研究 被引量：3
4
作者 古少鹏 王敏霞 +1 位作者 赵素芬 郑明学 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第4期369-372,共4页
为探讨鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的纯化方法,采用低速离心去除单细胞、差速贴壁去除成纤维细胞纯化上皮细胞,并对培养细胞的纯度进行了测定。结果表明:采用1200r.min-1 5min的离心条件,利用贴壁差细胞种植1.5h后倒瓶的方法可去除部分单... 为探讨鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的纯化方法,采用低速离心去除单细胞、差速贴壁去除成纤维细胞纯化上皮细胞,并对培养细胞的纯度进行了测定。结果表明:采用1200r.min-1 5min的离心条件,利用贴壁差细胞种植1.5h后倒瓶的方法可去除部分单细胞和大部分纤维细胞,细胞种植第3天～第11天纯度可达72.00%以上。提示低速离心结合差速贴壁法可达到纯化盲肠上皮细胞的目的,可为试验研究提供较为理想的细胞模型。 展开更多
关键词 盲肠上皮细胞 体外培养 纯化 鸡胚
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人芽囊原虫感染肠上皮细胞超微结构变化动态观察 被引量：2
5
作者 裴培 辛致炜 +5 位作者 廖德君 卢韵宇 刘静 薛飒 刘登宇 傅晓茵 《热带医学杂志》 CAS 2020年第5期596-602,共7页
目的电镜下动态观察人芽囊原虫感染大鼠盲肠超微结构损伤,并探索其可能的损伤机制。方法30只SD大鼠随机分为:感染后1周组、3周组、6周组、9周组及对照组,每组6只。以108个/mL密度的人芽囊原虫滋养体经口感染各实验组大鼠,对照组经口灌... 目的电镜下动态观察人芽囊原虫感染大鼠盲肠超微结构损伤,并探索其可能的损伤机制。方法30只SD大鼠随机分为:感染后1周组、3周组、6周组、9周组及对照组,每组6只。以108个/mL密度的人芽囊原虫滋养体经口感染各实验组大鼠,对照组经口灌胃等体积磷酸缓冲液(PBS)。于感染后不同时间点取各组大鼠盲肠组织,利用透射电镜观察其结构变化,并采用qPCR检测盲肠组织中8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)、脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(Apex1)、信号传导与转录激活因子(Stat3)、蛋白酪氨酸激酶(Src)及紧密连接胞质蛋白(ZO⁃1)的mRNA表达水平。结果透射电镜下观察各组大鼠盲肠肠上皮细胞的超微结构,可见线粒体的形态改变最为明显:对照组中可见线粒体形态呈规则圆形,超微结构正常;1周组中可见线粒体明显肿胀,线粒体嵴弯曲或消失,损伤与其他感染组相比最为严重;3周组中线粒体的肿胀程度较一周组线粒体肿胀程度稍轻;6周组中仅部分线粒体出现肿胀变形,且病变程度明显减轻;9周组中出现异常形态的线粒体最少,且仅见轻微变形,损伤最轻。进一步采用qPCR检查线粒体损伤相关分子的表达,结果显示:与对照组相比,OGG1、Apex1及Stat3的mRNA表达于感染后1周和3周显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中1周升高最为明显,而感染后6周和9周时表达差异无统计学意义(P>0.05);Src于感染后1周显著升高(P<0.05),之后随着感染时间的延长表达量逐渐降低;ZO⁃1的表达于感染后第1周和第3周较对照组显著下降(P<0.05),而6周和9周表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论人芽囊原虫感染可导致大鼠盲肠上皮超微结构损伤,且急性感染期损伤程度最为严重,其损伤机制可能与线粒体损伤有关。 展开更多
关键词 人芽囊原虫 盲肠上皮细胞 线粒体氧化损伤 透射电子显微镜
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血清浓度对鸡胚盲肠上皮细胞原代培养的影响 被引量：1
6
作者 古少鹏 王敏霞 +1 位作者 赵素芬 郑明学 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第6期572-574,578,共4页
为探讨细胞培养基中血清浓度对鸡盲肠上皮细胞体外培养的影响，分别用舍0％、2．5％、5％和10％胎牛血清（FBS）的细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞，检测细胞活性；选择适宜的FBS浓度，并测定了该浓度条件下鸡盲肠上皮细胞的生长特性。... 为探讨细胞培养基中血清浓度对鸡盲肠上皮细胞体外培养的影响，分别用舍0％、2．5％、5％和10％胎牛血清（FBS）的细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞，检测细胞活性；选择适宜的FBS浓度，并测定了该浓度条件下鸡盲肠上皮细胞的生长特性。结果表明：用含2．5％和5％FBS的培养基培养鸡胚盲肠上皮细胞，第4天细胞贴壁率达最高，分剐为84％和80．33％，显著地高于无血清和10％FBS组（P〈0．01／0．05），第7天仍均维持在76％以上，两者间除了第2天外，其余差异均不显著；用含2．5％FBS的细胞培养基进行鸡胚盲肠上皮细胞原代培养，第2～3天为适应阶段，第3～5天处于对数生长期，第5～9天细胞进入减速期，第10～11天再次进入对数生长期，第11天以后细胞进入衰退期，整个过程持续14d左右。鸡胚盲肠上皮细胞培养的血清浓度以2．5％FBS为宜。 展开更多
关键词 鸡胚盲肠上皮细胞 体外培养 胎牛血清 浓度 生长特性
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柔嫩艾美耳球虫在鸡胚盲肠上皮细胞中体外培养营养条件的研究 被引量：8
7
作者 古少鹏 侯金环 +2 位作者 陈赵英 李宝钧 郑明学 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1622-1628,共7页
探讨E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的营养条件,观察其发育过程。用鸡胚盲肠上皮细胞体外培养E.tenella,对子孢子接种基础培养基、营养物质含量及血清浓度进行了优选,并对优化营养条件下E.tenella的发育过程进行了观察。MEM199培... 探讨E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的营养条件,观察其发育过程。用鸡胚盲肠上皮细胞体外培养E.tenella,对子孢子接种基础培养基、营养物质含量及血清浓度进行了优选,并对优化营养条件下E.tenella的发育过程进行了观察。MEM199培养基中24、48、72h的虫体感染率显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于DMEM培养基;MEM199培养基中叶酸、VB6、VB1的含量为6mg·L-1时,24、48、72h的虫体感染率显著(P<0.05)高于其他组,分别为25.33%、12.67%和12.33%;MEM199培养基中葡萄糖含量为3000mg·L-1,胰岛素含量为0.40mg·L-1时,有较多的成熟裂殖体形成;接种子孢子后于4、48、96h换液,接种时和4、48h血清浓度为2.5%,96h为1%,有利于子孢子的后期发育;优化营养条件下,细胞接种子孢子后4、24、48、72、96、120h的细胞虫体感染率分别为42%、28%、20%、15%、13.67%、13.67%,且E.tenella可在鸡胚盲肠上皮细胞中完成内生发育过程,并形成卵囊。结果表明,获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的体外培养营养条件。 展开更多
关键词 E.TENELLA 鸡胚盲肠上皮细胞 体外培养 营养条件 发育过程
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E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的影响因素 被引量：1
8
作者 古少鹏 郑明学 +4 位作者 侯金环 陈赵英 李宝钧 唐芳 霍乃蕊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期454-458,共5页
研究E.tenella子孢子的纯化方法、接种剂量以及细胞生长状态对E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中的影响,为E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养模型的建立提供依据。以子孢子回收率和细胞感染率为指标,对DE52纤维素层析法、蔗糖密... 研究E.tenella子孢子的纯化方法、接种剂量以及细胞生长状态对E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中的影响,为E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养模型的建立提供依据。以子孢子回收率和细胞感染率为指标,对DE52纤维素层析法、蔗糖密度梯度离心法和双层目筛过滤法纯化子孢子的效果进行比较;测定了子孢子接种剂量和细胞生长状态对虫体感染率的影响,并对各发育阶段的虫体进行观察。结果表明,采用双层目筛过滤法可得到纯净的子孢子,并且回收率和接种细胞后24、48h的虫体感染率均显著（P〈0.05）和极显著（P〈0.01）高于DE52纤维素层析法和蔗糖密度梯度离心法;在48孔细胞培养板中,子孢子的最佳感染剂量为每孔10万个;鸡胚盲肠上皮细胞覆盖率为85%~90%且贴壁细胞融合率在30%以上时接种子孢子,各时间段虫体的入侵率较高,且可以观察到E.tenella主要发育阶段的虫体。本研究获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的子孢子纯化方法、接种剂量和细胞生长状态。 展开更多
关键词 E.TENELLA 鸡胚 盲肠上皮细胞 体外培养 影响因素
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