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壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路的影响 被引量:5
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作者 洪振强 滕方舟 +2 位作者 郭洁梅 何俊君 苏友新 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期4055-4059,共5页
目的:观察壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路关键信号分子及下游效应产物的影响,阐明该方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制。方法:取正常人及膝骨关节炎(KOA)患者软骨标本体外分离软骨细胞并培养至... 目的:观察壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路关键信号分子及下游效应产物的影响,阐明该方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制。方法:取正常人及膝骨关节炎(KOA)患者软骨标本体外分离软骨细胞并培养至第3代。将正常人软骨细胞设为正常组,KOA患者软骨细胞随机分为KOA组、阻滞剂组、含药血清组及含药血清+阻滞剂组。分别用20%空白血清、20%空白血清、20%空白血清+20μmol/L SB203580、20%含药血清、20%含药血清+20μmol/L SB203580进行干预;48h后,收集细胞;采用Western Blot检测细胞中caveolin-1、p-p38蛋白表达,RT-PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达。结果:与正常组比较,KOA组软骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05);与KOA组比较,阻滞剂组、含药血清组、含药血清+阻滞剂组软骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01);与阻滞剂组比较,含药血清组软骨细胞中caveolin-1蛋白及MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),p-p38蛋白及TNF-α、MMP-3 mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05);含药血清+阻滞剂组软骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+阻滞剂组软骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:壮骨健膝方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制可能与其抑制caveolin-p38MAPK信号通路中关键信号分子caveolin-1、p-p38蛋白表达,降低下游效应产物TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达有关。 展开更多
关键词 壮骨健膝方 人软骨细胞 caveolin-p38mapk信号通路 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β 基质金属蛋白酶-3 基质金属蛋白酶-13
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慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症模型建立及评价
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作者 李雪莲 余薇 周鹏程 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第24期5971-5978,共8页
目的建立一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法,并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型,分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养... 目的建立一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法,并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型,分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养及传代,然后加入10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β处理筛选的软骨细胞24 h诱导软骨细胞退变,建立COPD相关性气管支气管软化症模型。采用SB203580干预退变软骨细胞,流式凋亡和CCK8法分别检测软骨细胞凋亡、增殖活性;甲苯胺蓝染色和免疫组织化学法观察软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量;Western印迹检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、MMP-13表达水平。结果COPD大鼠支气管软骨细胞分离鉴定成功,10 ng/ml IL-1β即能诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型;通过CCK8法筛选确定第4代支气管软骨细胞、5μmol/L SB203580为最佳传代细胞和干预剂量,依上述条件分别处理各组软骨细胞48 h。甲苯胺蓝染色和免疫组织化学分析表明,SB203580处理可以有效提高COPD相关性气管支气管软化症细胞模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量;细胞流式检测结果显示:SB203580可以显著降低细胞凋亡,显著增强细胞增殖活性(P<0.05);Western印迹检测结果表明:SB203580可以有效抑制caveolin-1、p38MAPK、MMP-13、1L-1β蛋白表达;qPCR检测结果表明SB203580可以有效抑制MMP-13、p38MAPK、caveolin-1、IL-1β基因的表达。结论10 ng/ml IL-1β可诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型;SB203580可提高该模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量及提高细胞活性,同时减少软骨细胞凋亡。其作用可能与SB203580抑制caveolin-1-p38MAPK信号通路中关键信号分子caveolin-1、p38MAPK表达及降低下游效� 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症 试验模型 丝裂原活化蛋白激酶(p38mapk)抑制剂(SB203580) caveolin-1-p38mapk信号通路
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