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构建兔软骨脱落细胞三维支架及与干细胞相容性评价的实验研究
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作者 徐菊菊 谢燕燕 +6 位作者 郭志义 马雨凯 王霖虹 杨美荣 邓昭玲 华宝来 闫振宇 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1012-1022,共11页
目的制备不同浓度的兔软骨脱落细胞支架,并评估其理化性能和干细胞的相容性,为软骨修复提供实验依据。方法Percoll密度分离法培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并进行流式细胞学鉴定和成骨、成软骨分化... 目的制备不同浓度的兔软骨脱落细胞支架,并评估其理化性能和干细胞的相容性,为软骨修复提供实验依据。方法Percoll密度分离法培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并进行流式细胞学鉴定和成骨、成软骨分化能力检测。从兔膝、股关节中切取软骨片,进行物理粉碎、反复冻融以及各种酶混合消化脱细胞。为比较并观察不同浓度脱细胞支架的理化性能差异,设计3组支架,浓度分别为100%(A组)、50%(B组)、30%(C组),每组3只。将第3代PKH26示踪的BMSCs接种于最适浓度支架上培养1周,观察细胞生长情况。结果流式技术检测BMSCs表面抗原,CD44、CD90呈阳性表达,CD45阴性表达;成骨诱导茜素红染色可见红色钙结节;软骨诱导阿利新蓝染色见软骨结节呈蓝色;3组支架经苏木素-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色后未观察到明显细胞形态。样本脱细胞后的DNA浓度与未脱支架的指标均值差异具有显著性(P<0.05)。糖胺聚糖含量较正常值稍偏低。3组支架两两比较孔径、吸水膨胀率、孔隙率、支架断裂强度、杨氏模量差异具有显著性(P<0.05);干细胞与支架共培养后细胞附着良好。结论Percoll密度分离法可获取高纯度的兔BMSCs;应用混合脱细胞方法脱细胞较彻底。B组支架可作为构建组织工程软骨修复的最适方案。体外培养的BMSCs在B组支架生长良好。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 组织工程 软骨脱细胞支架 共培养
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新型脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备 被引量：34
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作者 杨强 彭江 +8 位作者 卢世璧 孙明学 黄靖香 张莉 许文静 赵斌 眭祥 姚军 袁玫 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期359-363,共5页
目的探讨脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备方法以及将其应用于关节软骨组织工程的可行性。方法取天然人软骨粉碎后,采用梯度离心法取100 nm～5μm软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量体积比为3%的悬液,采用冷冻冻干法制备脱细胞软骨基质... 目的探讨脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备方法以及将其应用于关节软骨组织工程的可行性。方法取天然人软骨粉碎后,采用梯度离心法取100 nm～5μm软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量体积比为3%的悬液,采用冷冻冻干法制备脱细胞软骨基质三维多孔支架。254 nm紫外线和碳化二亚胺/ N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行交联。冷冻冻干后,对支架材料进行组织学及扫描电镜观察,测定支架孔径和孔隙率、吸水率,并采用MTT法分析支架浸提液毒性。分离培养犬BMSCs,用TGF-β1成软骨诱导后种植至支架,倒置显微镜、电镜观察细胞在支架上的生长、分化情况。结果组织学观察显示,三维多孔支架中无软骨细胞碎片残留,甲苯胺蓝染色、番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性。扫描电镜显示支架内孔洞相互连通,孔径为(155 ± 34)μm,孔隙率为91.3% ± 2.0%,吸水率为2 451% ± 155%。MTT 法显示不同浓度支架浸提液与对照DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P > 0.05),支架无细胞毒性。倒置显微镜观察,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下细胞在支架上均匀分布,细胞呈圆形或椭圆形,并有基质分泌。结论制备的脱细胞软骨基质三维多孔支架去细胞彻底,保留了软骨ECM主要成分,无毒,具备合适的孔径和孔隙率,生物相容性良好,是软骨组织工程良好的支架载体。 展开更多
关键词 组织工程软骨 ECM 脱细胞 支架 冷冻冻干法
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