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淡色库蚊中抗性相关羧酸酯酶的纯化及其生化性质 被引量:5
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作者 梁军 沈建华 +1 位作者 林国芳 符文俊 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期161-169,共9页
在库蚊Culexpipiens品系中 ,非专一性酯酶活性的升高是对有机磷杀虫剂产生抗性的重要机理之一。应用SDS/PAGE ,比较淡色库蚊Culexpipienspallens抗敌百虫品系 (RD)、敏感型品系 (S)和抗苄呋菊酯品系 (PY)中可溶性总蛋白质带型 ,显示RD... 在库蚊Culexpipiens品系中 ,非专一性酯酶活性的升高是对有机磷杀虫剂产生抗性的重要机理之一。应用SDS/PAGE ,比较淡色库蚊Culexpipienspallens抗敌百虫品系 (RD)、敏感型品系 (S)和抗苄呋菊酯品系 (PY)中可溶性总蛋白质带型 ,显示RD中含有一条特异蛋白带 ,其它两个品系中未检出。在RD成虫匀浆液总蛋白中含量高达 2 1%。分子量测定为 66kD。应用柱层析法分离得到了较纯的纯品。以α NA为底物测得Km =64 1mmol/L ,Vmax=2 4 9 8mmol/(L·mg·min)。与羧酸酯酶相比较 :其Km 值小于已报道的抗性品系及非抗性品系A 酯酶和B 酯酶。Vmax值比已报道抗性品系A 酯酶低 ,比B 酯酶高。较高浓度的敌百虫并不能抑制其酶活 ,属于A 酯酶。在昆虫体内可能主要通过结合隔离作用 (sequestration)提高昆虫对有机磷的耐受性 。 展开更多
关键词 淡色库蚊 抗药性 羧酸酯酶 纯化 酶动力学 结合隔离作用
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环氧苍耳素Ⅰ对菜青虫中肠消化酶和羧酸酯酶活性的影响 被引量:10
2
作者 周琼 魏美才 欧晓明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期729-733,共5页
【目的】探明苍耳Xanthium sibiricum活性物质——环氧苍耳素Ⅰ对菜青虫的作用机理。【方法】采用饲喂法处理4龄菜青虫Pieris rapae,测试从苍耳中分离提纯的环氧苍耳素Ⅰ(为倍半萜内酯类物质)对菜青虫中肠蛋白酶、淀粉酶和羧酸酯酶活性... 【目的】探明苍耳Xanthium sibiricum活性物质——环氧苍耳素Ⅰ对菜青虫的作用机理。【方法】采用饲喂法处理4龄菜青虫Pieris rapae,测试从苍耳中分离提纯的环氧苍耳素Ⅰ(为倍半萜内酯类物质)对菜青虫中肠蛋白酶、淀粉酶和羧酸酯酶活性的影响。【结果】环氧苍耳素Ⅰ对蛋白酶活性的抑制最强,处理后12,24和48h,菜青虫中肠蛋白酶抑制率分别为20.95%,29.38%和50.06%;其次为淀粉酶,抑制率分别为11.89%,39.01%和31.92%。同时,中肠羧酸酯酶活性在处理后12h与对照之间无显著变化,24h时活性被显著抑制,而48h时活性却明显高于对照。【结论】环氧苍耳素Ⅰ对昆虫中肠消化酶活性的抑制,可能是引起昆虫表现取食抑制和生长发育不良的重要原因之一。 展开更多
关键词 菜青虫 苍耳 环氧苍耳素Ⅰ 中肠 消化酶 羧酸酯酶 酶活性
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Cry1Ac毒素对小菜蛾幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响 被引量:6
3
作者 赵爱平 展恩玲 +2 位作者 孙聪 刘同先 李怡萍 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期713-720,共8页
为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察... 为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的变化,分析Cry1Ac毒素与昆虫中肠酶活性间的关系。结果表明,小菜蛾幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl、KH_2PO_4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH均为11.0;强碱性胰蛋白酶的最适pH分别为10.0、10.5和10.5;弱碱性胰蛋白酶的最适pH均为8.5;胰凝乳蛋白酶的最适pH分别为8.5、9.0和9.0。Cry1Ac毒素对小菜蛾的致死中浓度LC_(50)为0.343μg/mL。用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后,其中肠各蛋白酶活性均随时间的变化而变化。弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性明显升高,且随浓度升高呈上升趋势;在取食36~72 h期间低浓度处理组的羧酸酯酶活性与对照组间无显著差异,而高浓度处理组羧酸酯酶活性显著高于对照组。表明Cry1Ac毒素能够显著影响小菜蛾的中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性。 展开更多
关键词 小菜蛾 蛋白酶 羧酸酯酶 Cry1Ac毒素 酶活性
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茶尺蠖羧酸酯酶EoCarE592的重组表达及其对农药的降解能力测定
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作者 税良勇 赵忠祎 +4 位作者 冯印 谢晓倩 袁晓琴 毛新芳 刘忠渊 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期48-57,共10页
【目的】原核表达茶尺蠖Ectropis obliqua羧酸酯酶(carboxlesterase,CarE)基因EoCarE592,并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体pET-32a-EoCarE592,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21异源表达,SDS-PAGE和Western b... 【目的】原核表达茶尺蠖Ectropis obliqua羧酸酯酶(carboxlesterase,CarE)基因EoCarE592,并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体pET-32a-EoCarE592,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21异源表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,并对包涵体蛋白变复性;通过固蓝B盐比色法的含量标准曲线测定重组EoCarE592酶活性以及温度、pH和金属离子对酶活性的影响;利用气相色谱检测EoCarE592在30℃pH 7.0和0,4,8,12,16,20及24 h时对200 mg/L的高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲基对硫磷(methyl-parathion)和异丙威(isoprocarb)降解能力。【结果】通过大肠杆菌异源表达得到重组EoCarE592包涵体蛋白,经尿素变复性后得到酶活性29.8 U的重组EoCarE592,其最适温度30℃左右、最适pH 7.0~8.0左右、Mg^(2+)和K^(+)对酶活有促进作用;重组EoCarE592能在30℃,pH 7.0,24 h内对初始浓度为200 mg/L的高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威降解率分别为81.30%,83.94%和79.83%。【结论】羧酸酯酶EoCarE592能降解高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威,可能参与茶尺蠖的解毒过程。本研究为环境和果蔬中农药残留的降解奠定了基础。 展开更多
关键词 茶尺蠖 羧酸酯酶 原核表达 酶活性 农药降解
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亚洲小车蝗痘病毒与化学杀虫剂混用的杀虫效果及对寄主主要解毒酶活性的影响 被引量:5
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作者 杨新华 李永丹 +2 位作者 田兆丰 史雪岩 高希武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期498-503,共6页
亚洲小车蝗痘病毒(Oedaleus asiaticus entomopoxvirus,OaEPV)作为一种增效剂,分别与马拉硫磷、毒死蜱、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯化学杀虫剂混合饲喂亚洲小车蝗若虫,统计致死中浓度LC50和其混合使用后的增效比;测定虫体内与... 亚洲小车蝗痘病毒(Oedaleus asiaticus entomopoxvirus,OaEPV)作为一种增效剂,分别与马拉硫磷、毒死蜱、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯化学杀虫剂混合饲喂亚洲小车蝗若虫,统计致死中浓度LC50和其混合使用后的增效比;测定虫体内与抗性有关的两种重要酶---羧酸酯酶(CarE)和谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)的比活力。结果表明:OaEPV与化学杀虫剂混合饲喂亚洲小车蝗,OaEPV与毒死蜱、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯混用对亚洲小车蝗无明显的增效作用,OaEPV与马拉硫磷混用,具有一定的增效作用,增效比为1.42倍。混剂感染亚洲小车蝗,除与溴氰菊酯混用外,虫体的中肠部位CarE的比活力都受到了明显的抑制作用,其中OaEPV与马拉硫磷混用下降了4.21倍,抑制作用最大。当OaEPV与氟氯氰菊酯、溴氰菊酯化学杀虫剂混用后,中肠部位GSTs受到了明显的抑制作用,而其脂肪体部位CarE和GSTs的变化无一定的规律性。结果提示痘病毒与农药混合处理时,病毒主要通过抑制中肠部位CarE比活力而增加了农药的杀虫效果。 展开更多
关键词 亚洲小车蝗痘病毒 化学杀虫剂 增效作用 羧酸酯酶 谷胱甘肽S-转移酶 酶活性
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A Study on the Activity of Carboxylesterase and the Differential Expression of Its Gene in the Midguts of Bombyx mori Resistant to BmDNV-Z 被引量:1
6
作者 GAO Gui-tian CHEN Ke-ping +5 位作者 YAO Qin CHEN Hui-qing WANG Lin-ling XU Jia-ping ZHAO Yuan WANG Yong-jie 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第8期1018-1026,共9页
This study was to discuss the relationship among the change in the activity of Bombyx mori carboxylesterase (BmCarE) in the midguts, the differential expression of BmCarE gene (bmcare) in the midguts, and the abil... This study was to discuss the relationship among the change in the activity of Bombyx mori carboxylesterase (BmCarE) in the midguts, the differential expression of BmCarE gene (bmcare) in the midguts, and the ability of Bombyx mori resistant to densonucleosis virus (BmDNV), and to elucidate the molecular mechanism of resistance to BmDNV-Z. With two silkworm strains, HUABA, which is susceptible to BmDNV-Z, and BC8 (a near isogenic line of HUABA), which is completely resistant to the same virus, as materials, the activity of BmCarE in the midgut was determined by Bio-Tek Synergy, and the differential expression of bmcare between the two strains was investigated by real-time fluorescence quantitative PCR, both at 12, 36, and 72 h post oral inoculation of the two strains with virus (hereafter referred as inoculation). While the activity of BmCarE in the midguts of BC8 inoculation group at 12 h post inoculation was higher than that in the BC8 control group, the HUABA inoculated group, and the HUABA control group by 3.28, 2.26, and 3.02 times, respectively, with the difference being highly significant (P 〈 0.01), there was no statistical difference among the other groups. The relative expression level of bmcare in the midguts of BC8 inoculation group at 12 h post inoculation was higher than that in the BC8 control group, the HUABA inoculation group, and the HUABA control group by 17.714, 21.76, and 15.09 times, respectively, with the difference being highly significant (P 〈 0.01), and there was no statistical difference among other groups. The elevation of BmCarE activity and expression level of bmcare in the resistant strain at 12 h post inoculation may relate to the resistant gene (nsd/nsd) and the stimulation of BmDNV-Z. The molecular basis for the elevation of BmCarE activity in the resistant strain BC8 may be the change in the expression level of bmcare. 展开更多
关键词 Bombyx mori resistance BmDNV-Z MIDGUT carboxylesterase enzyme activity differential expression
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An overview of pyrethroid insecticides 被引量:2
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作者 Anudurga Gajendiran Jayanthi Abraham 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2018年第2期79-90,共12页
BACKGROUND: Pesticides are used to control various pests of agricultural crops worldwide. Despite their agricultural benefits, pesticides are often considered a serious threat to the environment because of their pers... BACKGROUND: Pesticides are used to control various pests of agricultural crops worldwide. Despite their agricultural benefits, pesticides are often considered a serious threat to the environment because of their persistence. Pyrethroids are synthetic derivates of pyrethrins, which are natural organic insecticides procured from the flowers of Chrysanthemum cinerariaefolium and C. coccineum. Pyrethroids are classified into two groups class Ⅰ and class Ⅱ-based on their toxicity and physical properties. These pyrethroids are now used in many synthetic insecticides and are highly specific against insects; they are generally used against mosquitoes. The prominent site of insecticidal action ofpyrethroids is the voltage-sensitive sodium channels. METHODS and RESULTS: Pyrethroids are found to be stable, and they persist in the environment for a long period. This article provides an overview of the different classes, structure, and insecticidal properties of pyrethroid. Furthermore, the toxicity of pyrethroids is also discussed with emphasis on bioremediation to alleviate pollution. CONCLUSIONS: The article focuses on various microorganisms used in the degradation ofpyrethroids, the molecular basis of degradation, and the role of carboxylesterase enzymes and genes in the detoxification of pyrethroid. 展开更多
关键词 pyrethrin carboxylesterase enzyme MINERALIZATION microbial degradation TOXICITY
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家蚕血液羧酸酯酶活力影响因素研究初报 被引量:2
8
作者 宋宏图 李兵 +1 位作者 王东 沈卫德 《江苏蚕业》 2007年第2期11-14,共4页
为了研究家蚕血液的羧酸酯酶活性变化规律,利用分光光度计法对家蚕血液中羧酸酯酶活性影响因素及在不同龄期的具体变化规律作了初步研究。结果表明:其最适温度为45℃;最适pH8.5;不同龄期的活性表现为各龄中期酶活力比较高,而在眠蚕、起... 为了研究家蚕血液的羧酸酯酶活性变化规律,利用分光光度计法对家蚕血液中羧酸酯酶活性影响因素及在不同龄期的具体变化规律作了初步研究。结果表明:其最适温度为45℃;最适pH8.5;不同龄期的活性表现为各龄中期酶活力比较高,而在眠蚕、起蚕期酶活力相对较低,其中尤其以5龄第3、4天活力最高;在同一浓度下的杀虫剂对羧酸酯酶活性离体抑制作用实验中,敌百虫的抑制作用最强,乙酰甲胺磷次之,敌杀死最弱。 展开更多
关键词 家蚕 血液 羧酸酯酶 酶活力
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氟化物对家蚕耐氟和氟化物敏感品种幼虫中肠羧酸酯酶及全酯酶活性的影响 被引量:2
9
作者 米智 阮成龙 +4 位作者 李姣蓉 付巧娟 武婧洁 SENDEGEYA Parfait 朱勇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期494-498,共5页
为了探讨氟化物在家蚕Bombyx mori体内的代谢途径,以家蚕耐氟品种T6和氟化物敏感品种734为研究材料,在5龄幼虫1-7d内分别添食经50,100,200和400mg/kg NaF溶液浸泡后的新鲜桑叶,检测家蚕中肠羧酸酯酶(CarE)和全酯酶活性的变化。结果表明:... 为了探讨氟化物在家蚕Bombyx mori体内的代谢途径,以家蚕耐氟品种T6和氟化物敏感品种734为研究材料,在5龄幼虫1-7d内分别添食经50,100,200和400mg/kg NaF溶液浸泡后的新鲜桑叶,检测家蚕中肠羧酸酯酶(CarE)和全酯酶活性的变化。结果表明:734添氟组的CarE活性是对照组的1.21~1.98倍,而T6添氟组约是对照组的0.72~1.10倍。734和T6添氟组的全酯酶活性数值变化规律与其各自对照组相似,且2品种之间的酶活性数值很相近。2品种在相同浓度下,不同天数之间的全酯酶活性差异均显著(P<0.05)。推测氟化物对敏感家蚕中肠CarE有促进作用,对耐氟家蚕中肠CarE有抑制作用,但是对全酯酶活性影响不大。 展开更多
关键词 家蚕 氟化物 中肠 羧酸酯酶 全酯酶 酶活性
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一种检测羧酸酯酶的Turn-off型荧光探针的制备
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作者 谢国旺 滕明刚 +2 位作者 游辉 刘家芳 柴慧芳 《江西化工》 2022年第4期93-97,共5页
羧酸酯酶(CES)是一种α/β-丝氨酸水解酶,能通过水解酯或酰胺来代谢药物(如卡培他滨)和农药(如拟除虫菊酯),或者是代谢内源性酯(如胆固醇酯)。本研究基于咔唑为原料,制备一种turn-off荧光探针TX-01用于检测羧酸酯酶,并通过探针分子与羧... 羧酸酯酶(CES)是一种α/β-丝氨酸水解酶,能通过水解酯或酰胺来代谢药物(如卡培他滨)和农药(如拟除虫菊酯),或者是代谢内源性酯(如胆固醇酯)。本研究基于咔唑为原料,制备一种turn-off荧光探针TX-01用于检测羧酸酯酶,并通过探针分子与羧酸酯酶反应前后的荧光强度变化检测该酶的活性。该有机小分子荧光探针的最大吸收波长为423 nm,最大发射波长为580 nm,斯托克斯位移为157 nm,其与羧酸酯酶反应前呈橙黄色荧光,反应后荧光淬灭。 展开更多
关键词 羧酸酯酶 荧光探针 酶检测 咔唑检测
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毛果杨羧酸酯酶基因家族的功能研究
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作者 金宇霆 王晓茹 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期756-765,共10页
羧酸酯酶(CXE)是一类具有α/β折叠结构域的水解酶类,在植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要作用。该研究以毛果杨(Populus trichocarpa)植株为材料,通过TBLASTN搜索和手动校正鉴定毛果杨CXE基因,并分析CXE基因家族基本特征、基因结构... 羧酸酯酶(CXE)是一类具有α/β折叠结构域的水解酶类,在植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要作用。该研究以毛果杨(Populus trichocarpa)植株为材料,通过TBLASTN搜索和手动校正鉴定毛果杨CXE基因,并分析CXE基因家族基本特征、基因结构和表达模式,通过亲和层析纯化大肠杆菌表达的毛果杨CXE蛋白,然后利用荧光法和pH指示剂法测定CXE蛋白酶学活性,为深入揭示林木CXE基因家族的功能奠定基础。结果表明:(1)从毛果杨基因组中共鉴定出52个CXE基因,且52个CXE蛋白都含有完整的α/β水解酶结构域;毛果杨52个CXE基因分为3个类型,每一类型分别有39、4和9个CXE基因。(2)毛果杨CXE基因在染色体上的分布不均匀,其中有28个CXE基因以基因簇的形式分布在6条染色体上,其余24个CXE基因分散分布在16个染色体上。(3)毛果杨8个CXE基因在木质部、韧皮部、叶、小枝和根等5个组织部位均未检测到表达,其余44个CXE基因在5个组织部位呈现差异性表达。(4)在大肠杆菌中表达并纯化了5个毛果杨CXE蛋白(PtCXE4、5、6、41、43),且5个蛋白对植物体内发现的24个天然底物的催化能力测定发现,PtCXE5可以催化天然底物的个数最多(11个);酶学性质分析表明,5个蛋白都可以催化4-甲基伞形酮乙酸酯(4-MU acetate)和4-甲基伞形酮丁酸酯(4-MU butyrate)水解,却都不能催化4-甲基伞形酮月桂酸酯(4-MU laurate)和4-甲基伞形酮棕榈酸酯(4-MU palmitate)水解,且随着底物碳链长度的增加,蛋白的催化活性也随之下降;酶活性的pH依赖性分析发现,在pH6.0~9.0范围内,随着pH的升高5个蛋白的催化活性均呈现升高的趋势。 展开更多
关键词 毛果杨 羧酸酯酶 基因家族 表达模式 酶学性质分析
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双表达解毒酶基因工程菌的酶活性分析及其应用 被引量:1
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作者 郑玉芝 郭成君 +2 位作者 张建亮 郭新民 乔传令 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期33-37,共5页
羧酸酯酶和有机磷水解酶可以水解不同的底物,为了获得降解谱广的解毒酶系,将两种酶共表达在同一载体。采用正交法对有机磷水解酶酶活性的分析条件进行了优化,以对硫磷为底物,底物浓度2×10-4mol/L、反应温度25℃、反应时间10min、pH... 羧酸酯酶和有机磷水解酶可以水解不同的底物,为了获得降解谱广的解毒酶系,将两种酶共表达在同一载体。采用正交法对有机磷水解酶酶活性的分析条件进行了优化,以对硫磷为底物,底物浓度2×10-4mol/L、反应温度25℃、反应时间10min、pH8.0是测定酶活性最佳条件。在pH7.0~8.0的体系中存放一年活力可以保持50%以上。用于蚊子解毒实验,95%以上的对硫磷中毒蚊幼虫可以救活。在生物传感器等其它领域也都有应用。 展开更多
关键词 羧酸酯酶 有机磷水解酶 酶活性测定
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