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miR-502调控犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移和EMT的作用机制
1
作者 任晓丽 范玉营 +4 位作者 皇甫和平 王军 靳双星 刘云 石冬梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4379-4388,共10页
旨在探讨微小RNA-502(microRNA-502/miR-502)靶向RNA结合基序单链相互作用蛋白1(RNA-binding motif,single-stranded-interacting protein 1,RBMS1)对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)... 旨在探讨微小RNA-502(microRNA-502/miR-502)靶向RNA结合基序单链相互作用蛋白1(RNA-binding motif,single-stranded-interacting protein 1,RBMS1)对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测犬乳腺肿瘤细胞(CHMp和CHMm)和正常乳腺组织中miR-502和RBMS1的转录水平;利用脂质体转染法将miR-502模拟物(mimic)、抑制剂(inhibitor)、阴性对照(negative control,NC)分别转染至犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp细胞,用qRT-PCR方法检测细胞中miR-502的表达水平,以MTT法和Transwell试验分别检测细胞的增殖和迁移能力;通过qRT-PCR和Western blot方法检测转染miR-502后对上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)、细胞迁移标志物基质金属蛋白酶(MMP2)、增殖标志物增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA和蛋白表达水平;利用qRT-PCR和双荧光素酶报告试验验证miR-502与RBMS1基因的靶向关系。结果显示:与正常乳腺组织组相比,miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中表达显著上调,RBMS1在犬乳腺肿瘤细胞中转录下调;转染miR-502 mimic后miR-502的转录水平显著高于miR-NC组,反之转染miR-502 inhibitor后miR-502的转录水平显著下调;与miR-NC组相比,转染miR-502 mimic显著促进犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移,抑制E-cadherin mRNA和蛋白的表达,促进vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平升高;反之,转染miR-502 inhibitor可显著抑制犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移,促进E-cadherin mRNA和蛋白表达升高,降低vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR和荧光素酶报告试验显示,miR-502通过靶向RBMS13′-UTR抑制RBMS1 mRNA的表达。上述结果提示,miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中高表达,干扰miR-502的表达可以影响犬乳腺肿瘤CHMm细胞的增殖、迁移及EMT,且miR-502靶向调控RBMS1 mRNA的表达。 展开更多
关键词 miR-502 RBMS1 犬乳腺肿瘤细胞 增殖/迁移 上皮-间质转化
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紫杉醇对CHMm细胞G_2/M期的阻滞及对周期相关因子的影响 被引量：2
2
作者 李情 姚微 +3 位作者 杨超 卢婷 张立国 刘云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1306-1312,共7页
为探讨紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞的周期阻滞及周期相关因子的表达影响,采用不同浓度紫杉醇以不同作用时间处理细胞,通过倒置显微镜、流式细胞仪(FCM)、SYBR染料法实时荧光定量PCR,研究细胞的形态学变化、G2/M期阻滞以及对抑癌基因p27、p5... 为探讨紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞的周期阻滞及周期相关因子的表达影响,采用不同浓度紫杉醇以不同作用时间处理细胞,通过倒置显微镜、流式细胞仪(FCM)、SYBR染料法实时荧光定量PCR,研究细胞的形态学变化、G2/M期阻滞以及对抑癌基因p27、p53和原癌基因bcl-2表达的影响。结果显示,0.1μmol/L紫杉醇作用72h,犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)生长状况极差,细胞大量凋亡。同时,0.1μmol/L紫杉醇作用48h,G2/M期阻滞明显,比例高达78.69%。紫杉醇对周期相关因子的影响,具有时间-剂量关系,p27、p53的表达均呈上升趋势,bcl-2的表达呈下降趋势。结果表明,紫杉醇能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡;促使细胞G2/M期阻滞和抑制细胞有丝分裂;并有促进p27、p53表达、抑制bcl-2表达的作用。 展开更多
关键词 紫杉醇 犬乳腺肿瘤细胞 抑癌基因 原癌基因 流式细胞仪 实时定量PCR
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紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞bcl-2和p53的mRNA表达的影响 被引量：2
3
作者 张力国 李情 +4 位作者 陈萌 杨超 卢婷 姚微 刘云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期538-541,共4页
为研究紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)周期相关因子bcl-2、p53 mRNA表达的影响,本研究以不同浓度的紫杉醇在不同作用时间处理CHMm,通过SYBR荧光定量PCR检测bcl-2、p53的mRNA表达的变化。结果显示:紫杉醇作用后,CHMm细胞生长受到不同程度... 为研究紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)周期相关因子bcl-2、p53 mRNA表达的影响,本研究以不同浓度的紫杉醇在不同作用时间处理CHMm,通过SYBR荧光定量PCR检测bcl-2、p53的mRNA表达的变化。结果显示:紫杉醇作用后,CHMm细胞生长受到不同程度抑制,并引起细胞凋亡。在紫杉醇诱导CHMm产生细胞毒性导致细胞死亡率不高的情况下,1μmol/L作用12 h^24 h bcl-2 mRNA降低明显。1μmol/L紫杉醇作用24 h高于0.01μmol/L作用48 h时p53 mRNA升高的比值,差异显著(p<0.01)。表明1μmol/L紫杉醇对抑制原癌基因bcl-2、促进抑癌基因p53的表达效果最好,并具有诱导细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 紫杉醇 犬乳腺肿瘤细胞 BCL-2 P53
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RNAi沉默接触蛋白-1对犬乳腺肿细胞系CHMm增殖及迁移的影响
4
作者 刘佳 杨超 +6 位作者 王英雪 童津津 赵冰冰 肖敏 常宏建 任晓丽 刘云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期90-93,共4页
为探究接触蛋白-1(CNTN1)对体外培养的犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖及迁移能力的影响,本研究利用RNAi技术沉默CNNT1基因在犬乳腺肿瘤CHMm细胞中的表达,采用CCK8法检测CHMm细胞增殖能力、细胞划痕法检测CHMm细胞迁移能力,western blot检测CHM... 为探究接触蛋白-1(CNTN1)对体外培养的犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖及迁移能力的影响,本研究利用RNAi技术沉默CNNT1基因在犬乳腺肿瘤CHMm细胞中的表达,采用CCK8法检测CHMm细胞增殖能力、细胞划痕法检测CHMm细胞迁移能力,western blot检测CHMm细胞中E-cadherin蛋白含量。结果显示CNTN1沉默后,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖无明显影响,但能够导致使细胞迁移能力显著减弱,细胞中E-cadherin蛋白含量明显增加。研究表明CNTN1对犬乳腺肿瘤CHMm增殖调节无明显作用,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm作用主要是通过降低E-cadherin蛋白的表达增强体外培养的肿瘤细胞迁移力,为犬乳腺肿瘤的治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 犬乳腺肿瘤细胞 CNTN1 增殖 迁移 E-cadherin
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