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在血清饥饿条件下CHP2调节NHE1活性减少细胞死亡 被引量：4
1
作者 李庆华 庞天翔 +1 位作者 袁文肃 韩忠朝 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第5期573-577,共5页
钠氢离子交换蛋白(NHE)是维持细胞内pH值等内环境稳定的重要蛋白;钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE的一个活性调节亚单位。研究CHP2对NHE1的调节作用时发现,在血清饥饿的条件下,PS120细胞依赖于CHP2的表达来调节外源性NHE1的活性,使细胞... 钠氢离子交换蛋白(NHE)是维持细胞内pH值等内环境稳定的重要蛋白;钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE的一个活性调节亚单位。研究CHP2对NHE1的调节作用时发现,在血清饥饿的条件下,PS120细胞依赖于CHP2的表达来调节外源性NHE1的活性,使细胞维持必要的钠氢交换生理活性和较高水平的细胞内pH值(pHi7.4),明显减少细胞因自身的胞浆酸性化而死亡,延长细胞存活时间(70%以上的细胞存活时间超过7天)。实验结果提示,通过研究减少CHP2表达或抑制其活性,可望找到加速细胞死亡的新方法。 展开更多
关键词 血清 饥饿条件 蛋白活性 细胞死亡 钠氢离子交换蛋白 钙调磷酸酶b同源蛋白2
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CHP调节NHE1活性影响细胞生长和死亡 被引量：3
2
作者 李庆华 庞天翔 韩忠朝 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期63-67,共5页
钠氢离子交换蛋白(NHE)定位于细胞膜,它的重要功能是调节细胞内pH值。钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE必要的活性调节亚单位。研究了NHE1结合CHP与否对细胞生长和死亡的影响。结果显示,CHP结合于NHE1细胞质调节区域之中靠近细胞膜部位,... 钠氢离子交换蛋白(NHE)定位于细胞膜,它的重要功能是调节细胞内pH值。钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE必要的活性调节亚单位。研究了NHE1结合CHP与否对细胞生长和死亡的影响。结果显示,CHP结合于NHE1细胞质调节区域之中靠近细胞膜部位,二者以疏水键结合而形成蛋白IV级结构。在细胞内pH5.4的非生理条件下,表达没有CHP结合能力的突变体NHE1-4R细胞只有表达野生型NHE细胞7.6%的最大摄取钠活性;在细胞内pH7.2的生理条件下,这个比例降至1.2%的摄取钠活性。与野生型NHE1比较,有血清时表达突变体NHE1-4R的细胞生长速度减慢;在血清饥饿时这些细胞因自身的胞浆酸性化而死亡数增加。实验结果证明,CHP是NHE1生理活性的必要调节因子,它能影响细胞生长和死亡。 展开更多
关键词 生物活性 细胞生长 细胞死亡 钠氢离子交换蛋白 钙调磷酸酶b同源蛋白
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EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响 被引量：1
3
作者 张洪菊 李庆华 +3 位作者 王立洪 蔺亚妮 常国强 庞天翔 《中国医药导报》 CAS 2012年第35期28-31,共4页
目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法... 目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2+的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2(NHE1/CHP2-EF3m/4m)对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2+减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2+;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸(EDTA)剥夺CHP2携带的Ca2+之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2+的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2+的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2+,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2+能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2+的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶b同源蛋白2 钠氢交换蛋白1 EF-HAND CA2+
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黑鲷钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)基因克隆及表达差异 被引量：1
4
作者 陈淑吟 张志勇 +5 位作者 孙瑞健 贾超峰 孟乾 祝斐 张志伟 吴国均 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期661-669,共9页
钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整... 钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90d、180d黑鲷,杂交F_(2)(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F_(1)(黑鲷♂×杂交F_(1)♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达。研究结果表明:(1)AsCHP2cDNA序列全长1722bp,5'-非编码区(UTR)长度69bp,3'-UTR长度1069bp,开放阅读框长度为585bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构。AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86%~81%,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80%~72%。邻接系统树显示了黑鲷CHP2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系。序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构。(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5~35d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90d个体各组织中的表达量均高于在180d个体各组织中的表达量;在180d黑鲷、杂交F_(2)及回交F_(1)的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达。这些结果显示,CHP2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能。 展开更多
关键词 黑鲷 钙调磷酸酶b同源蛋白2基因 基因克隆 MRNA表达
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