一种高效提取棉花不同组织总RNA的热硼酸改良法 被引量：42

1

作者 武耀廷 刘进元 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第2期67-71,共5页

针对棉花组织中酚类化合物、多糖、次级代谢产物的含量较多,以及内源RNase活性高等特点,将硼酸缓冲体系、蛋白酶K消化蛋白和氯化锂选择性沉淀RNA步骤偶联在一起,发展成一种有效提取棉花不同组织特别是棉纤维组织总RNA的热硼酸改良法。... 针对棉花组织中酚类化合物、多糖、次级代谢产物的含量较多,以及内源RNase活性高等特点,将硼酸缓冲体系、蛋白酶K消化蛋白和氯化锂选择性沉淀RNA步骤偶联在一起,发展成一种有效提取棉花不同组织特别是棉纤维组织总RNA的热硼酸改良法。在提取RNA过程中,不需用酚/氯仿/异戊醇进行抽提,简化了RNA提取的操作步骤。从不同棉花组织提取的RNA质量均能满足cDNA文库的构建、差异显示、cDNA末端的快速扩增(RACE)以及Northern杂交等分子实验。 展开更多

关键词 棉花组织 RNA 提取 热硼酸法 cdna文库 RACE NORTHERN杂交

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油茶总RNA及mRNA的分离与纯化 被引量：26

2

作者 张智俊 谭晓风 陈永忠 《中南林学院学报》 CSCD 2003年第2期76-78,共3页

　利用改良的CTAB法,从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总RNA,并从总RNA中,通过两次过Oligo(dT)柱分离纯化得到mRNA.实验结果证明:所提取的RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到油茶cDNA文库的构建.

关键词 油茶 总RNA MRNA 分离 纯化 改良CTAB法 提取 cdna文库

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提取蕨类植物蜈蚣草总RNA的一种有效方法 被引量：18

3

作者 何振艳 徐文忠 +1 位作者 杨学习 麻密 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2005年第2期198-202,共5页

介绍了一种提取蕨类植物蜈蚣草(Pteris vittata L.)总RNA的有效方法。由于蜈蚣草富含多酚和多糖,用普通的RNA提取方法很难获得高质量的RNA。本方法通过优化提取缓冲液的条件来抑制多酚氧化,并利用RNA与多酚、多糖在不同浓度的2-丁氧乙... 介绍了一种提取蕨类植物蜈蚣草(Pteris vittata L.)总RNA的有效方法。由于蜈蚣草富含多酚和多糖,用普通的RNA提取方法很难获得高质量的RNA。本方法通过优化提取缓冲液的条件来抑制多酚氧化,并利用RNA与多酚、多糖在不同浓度的2-丁氧乙醇中溶解度不同的特性来去除多酚和多糖。本方法简便、快速,所提取的RNA质量较高,可直接用于cDNA合成、cDNA文库的构建以及RACE等分子生物学操作。 展开更多

关键词 有效方法 总RNA 蕨类植物 蜈蚣草 RNA提取方法 cdna合成 cdna文库 分子生物学 RACE 多酚 多糖 缓冲液 溶解度 质量

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cDNA-AFLP法筛选红树植物盐应答基因 被引量：7

4

作者 陈银华 韩淑梅 +5 位作者 沙爱华 朱红林 范吉星 谢俊 符秀梅 李小靖 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期4257-4263,共7页

【目的】分析红树植物盐胁迫下基因表达谱,分离识别耐盐相关基因。【方法】分别对红树植物-秋茄进行海水和淡水处理。分时提取总RNA进行等量混合,获得两种不同处理的样品池。采用cDNA-AFLP技术进行表达差异分析。【结果】256对引物组合... 【目的】分析红树植物盐胁迫下基因表达谱,分离识别耐盐相关基因。【方法】分别对红树植物-秋茄进行海水和淡水处理。分时提取总RNA进行等量混合,获得两种不同处理的样品池。采用cDNA-AFLP技术进行表达差异分析。【结果】256对引物组合共筛选了约15 000个cDNA片段,获得差异片段61个。差异基因表达模式分为2类,即海水处理诱导上升和下调表达,其中上升表达的基因片段为36个,下调表达的基因片段为25个;其中38个可视为已知基因。按照其功能分类可分为8大类:基础代谢、跨膜蛋白、信号转导、蛋白质代谢、转录因子、细胞骨架、抗病蛋白、假想蛋白,而其中又以基础代谢相关基因所占比重最大。【结论】构建了红树植物-秋茄在盐胁迫下的基因表达谱,从基因组水平上识别了一批受盐胁迫诱导或抑制表达、与耐盐相关的基因,这些新基因可用于耐盐的分子机理研究。 展开更多

关键词 红树 耐盐性 基因分离 cdna-AFLP

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海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建 被引量：9

5

作者 张大栋 马鸿翔 +4 位作者 吉晓佳 周春霖 王茂文 汤日圣 杨永华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第2期113-116,共4页

为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量，将改良CTAB法与Tripure试剂盒方法相结合，从300mg海蓬子发芽后20d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA。并以无NaCl处理为Driver，以200mmol／LNaCl处理24h、48h、72h的幼苗... 为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量，将改良CTAB法与Tripure试剂盒方法相结合，从300mg海蓬子发芽后20d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA。并以无NaCl处理为Driver，以200mmol／LNaCl处理24h、48h、72h的幼苗为Tester，通过cDNA双链的合成及两次PCR扩增，富集到两组处理中差异表达的大小在200～1300bp的cDNA序列，pGEM-T的连接和蓝白斑筛选表明杂交文库滴度和重组率分别达到2，6×10^7和96％，共收集阳性克隆12000个，形成了抑制消减杂交的质粒cDNA文库。随机挑取酶切质粒的电泳分析表明，载体中均有插入片段。两种RNA提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的质量，高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础。 展开更多

关键词 盐生植物海蓬子 抑制消减抑制杂交 cdna文库 RNA分离

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枸杞中番茄红素β-环化酶基因(LycB)的分离 被引量：3

6

作者 张爱香 季静 +2 位作者 王罡 张艳贞 刘会清 《中国农学通报》 CSCD 2005年第1期46-49,共4页

以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATractmRNA Isolation System(Promega公司)分离mKNA,然后利用Universal Riboclone RcDNA SynthesisSystem(Promega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoR Ⅰ... 以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATractmRNA Isolation System(Promega公司)分离mKNA,然后利用Universal Riboclone RcDNA SynthesisSystem(Promega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoR Ⅰ接头,并与λExCell载体连接,利用Packagene Lambda DNA Packaging System进行包装,在国内外首次构建出滴度为2.78×10 5pfu／ml,重组效率为88.1％的枸杞叶片cDNA文库。用Digoxigenin(DIG)标记龙胆草LycB探针,并对枸杞叶片cDNA文库进行筛选,获得5个LycB cDNA阳性克隆。释放质粒后,进行酶切鉴定,LycB阳性克隆cDNA插入片段的大小为2.1kb左右。为利用基因工程手段来调控类胡萝卜素的生物合成奠定了基础。 展开更多

关键词 cdna文库 RNA 酶基因 滴度 首次 分离 番茄红素 叶片 利用 枸杞

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枸杞中IPP异构酶相关基因(IPI)的分离 被引量：3

7

作者 张爱香 季静 +1 位作者 王罡 抗艳红 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期186-189,共4页

以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATract mRNA I-solation System(Promega公司)分离mRNA,然后利用Universal RibocloneRcDNA Synthesis System(Pro-mega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoR... 以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATract mRNA I-solation System(Promega公司)分离mRNA,然后利用Universal RibocloneRcDNA Synthesis System(Pro-mega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头,并与λExCell载体连接,利用PackageneLambda DNA Packaging System进行包装,构建出滴度为2.78×105pfu/mL,重组效率为88.1%的枸杞叶片cDNA文库。用Digoxigenin(DIG)标记龙胆草IPI探针,并对枸杞叶片cDNA文库进行筛选,获得7个IPIcDNA阳性克隆。释放质粒后,进行酶切鉴定,IPI阳性克隆cDNA插入片段的大小为1.5 kb左右。 展开更多

关键词 枸杞 叶片 cdna文库 IPI 基因 分离

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长牡蛎Fem-1基因cDNA克隆和表达分析 被引量：4

8

作者 周祖阳 李琪 +1 位作者 于红 孔令锋 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期45-54,共10页

本研究通过RACE技术获得了长牡蛎(Crassostrea gigas)Fem-1b和Fem-1c基因cDNA全长序列,并分析了其编码蛋白和系统进化关系。通过RT-PCR技术对采集的长牡蛎周年样品(2015年5月~2016年4月的性腺样品,2015年夏季各组织样品以及不同胚胎幼... 本研究通过RACE技术获得了长牡蛎(Crassostrea gigas)Fem-1b和Fem-1c基因cDNA全长序列,并分析了其编码蛋白和系统进化关系。通过RT-PCR技术对采集的长牡蛎周年样品(2015年5月~2016年4月的性腺样品,2015年夏季各组织样品以及不同胚胎幼虫发育时期的样品)进行了表达分析。研究显示,长牡蛎Fem-1b全长2 580bp,编码636个氨基酸;Fem-1c全长2 417bp,编码622个氨基酸。蛋白结构预测显示,两基因分别含有6和7个典型的锚定蛋白重复序列(Anyrin repeat)。RT-PCR结果显示,目的基因在精巢中的表达量显著高于其他组织(P<0.05);Fem-1b在6、7月的精巢中和Fem-1c基因在3、4月的精巢中的表达量显著高于在其他组织中的表达量(P<0.05)。胚胎幼虫表达分析显示,目的基因在胚胎发育早期的表达量显著高于胚胎发育中后期,并在囊胚期达到最高值。我们推测Fem-1b和Fem-1c可能参与了性别决定和性别分化的过程。 展开更多

关键词 长牡蛎 Fem-1b Fem-1c 基因克隆 表达分析

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一种改进的珙桐(Davidia Involucrata)干种子总RNA提取方法(英文) 被引量：3

9

作者 黎云祥 陈利 《西南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期108-111,共4页

改进后的方法在提取缓冲液中加入了2%的PVP(分子量10000)和10mM的半胱氨酸以避免多酚类物质的氧化,减少了苯酚抽提的次数.使用该改进的方法可以从平均每克珙桐干种子中获得240μg的总RNA,这些总RNA适合用于体外反转录、Northern杂交以及... 改进后的方法在提取缓冲液中加入了2%的PVP(分子量10000)和10mM的半胱氨酸以避免多酚类物质的氧化,减少了苯酚抽提的次数.使用该改进的方法可以从平均每克珙桐干种子中获得240μg的总RNA,这些总RNA适合用于体外反转录、Northern杂交以及cDNA文库的构建. 展开更多

关键词 珙桐 干种子 总RNA 提取方法 提取缓冲液 苯酚抽提 cdna文库 Northem杂交

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小体鲟HSP70基因全长cDNA序列的分离及表达分析 被引量：2

10

作者 倪蒙 温海深 +5 位作者 步艳 迟美丽 钱焜 尹相菡 张冬茜 丁玉霞 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期21-28,共8页

采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号... 采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥作用。经过BLAST比对,认为该序列与西伯利亚鲟(Acipenserbaerii)、斑点叉尾鮰(Ietalurus punetaus)、斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲爪蟾(Xenopus lae-vis)、中华鳖(Pelodiscus sinensis)、原鸡(Gallus gallus)、家鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的同源性均在80%以上,表明HSP70具有高度的保守性。组织表达分析表明,HSP70mRNA在小体鲟肝脏、心、脾、脑、肾、肌肉、胃、肠、垂体、精巢和卵巢组织中均有表达,但表达量不同,心脏、脾和肝脏中表达量高,脑、垂体和性腺中表达较少,鳃中没有表达。小体鲟HSP70基因的表达分析为研究应激条件下鲟科HSP70基因的差异表达和抗逆机理提供了基础。 展开更多

关键词 小体鲟 HSP70基因 cdna 基因分离 序列分析 表达分析

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总RNA和mRNA来源的探针与cDNA芯片杂交的差异研究 被引量：1

11

作者 范保星 孙敬芬 +4 位作者 刘庆峰 陈良安 刘又宁 王升启 吴德昌 《生物技术通讯》 CAS 2004年第1期20-22,共3页

提取BEP2D细胞的总RNA并按两种方式进行cDNA芯片探针的标记,一种是将100μgBEP2D细胞的总RNA利用逆转录法直接标记成荧光探针,另一种是先从100μgBEP2D细胞的总RNA中分离出mRNA,然后再标记成荧光探针。将两份标记好的探针同时与含有230... 提取BEP2D细胞的总RNA并按两种方式进行cDNA芯片探针的标记,一种是将100μgBEP2D细胞的总RNA利用逆转录法直接标记成荧光探针,另一种是先从100μgBEP2D细胞的总RNA中分离出mRNA,然后再标记成荧光探针。将两份标记好的探针同时与含有230个基因的cDNA芯片杂交。杂交后的芯片经Axon4100B扫描仪扫描,发现两种方式标记探针的一致性为93.04%,并且mRNA来源探针杂交后的荧光信号值较总RNA的弱。探讨了这两种方法标记探针在基因芯片表达谱研究中的差异性,目的是为利用这两种方法标记探针进行基因表达谱研究者提供一些依据。 展开更多

关键词 cdna芯片 基因表达 反转录 mRNA分离 荧光探针

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登革热病毒基因组末端cDNA的克隆及序列分析 被引量：2

12

作者 王升启 马立人 +1 位作者 杨佩英 朱宝珍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第2期168-172,共5页

采用磁性分离技术从登革热病毒 (D2 0 4株 )感染的C6/36细胞中分离了D2 0 4病毒RNA .以该RNA为模板进行RT PCR ,分别扩增了D2 0 4RNA 5′和 3′端cDNA片段 ,该cDNA片段分别克隆到 pGEM 3Z质粒多聚接头的HincⅡ位点得到含有 5′端 2 8... 采用磁性分离技术从登革热病毒 (D2 0 4株 )感染的C6/36细胞中分离了D2 0 4病毒RNA .以该RNA为模板进行RT PCR ,分别扩增了D2 0 4RNA 5′和 3′端cDNA片段 ,该cDNA片段分别克隆到 pGEM 3Z质粒多聚接头的HincⅡ位点得到含有 5′端 2 84bp及 3′端 52 5bpcDNA的重组质粒 .通过荧光标记引物及双脱氧核苷酸PCR方法测定了上述cDNA插入片段的序列 .同源性比较结果证明D2 0 4株与其他不同株间的同源性较高 ,可达 93%～ 98% ;不同型间的同源性较差 ,仅 80 %左右 ; 展开更多

关键词 登革热病毒 基因组 cdna 克隆 序列分析

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吉氏巴贝斯虫mRNA的磁性分离及cDNA合成 被引量：2

13

作者 陈启军 李德昌 阎仲堂 《兽医大学学报》 CSCD 1993年第3期214-218,共5页

从感染吉氏巴贝斯虫的摘脾犬的红细胞内提纯虫体,用异硫氰酸胍法提取虫体总RNA,再以Poly(A)^+mRNA磁性分离系统提取mRNA.最后以NotⅠPrimer-Adaptor为引物反转录出cDNA片段.琼脂糖凝胶电泳显示,所合成的cDNA分子量范围由100到6500bP,且... 从感染吉氏巴贝斯虫的摘脾犬的红细胞内提纯虫体,用异硫氰酸胍法提取虫体总RNA,再以Poly(A)^+mRNA磁性分离系统提取mRNA.最后以NotⅠPrimer-Adaptor为引物反转录出cDNA片段.琼脂糖凝胶电泳显示,所合成的cDNA分子量范围由100到6500bP,且绝大部分大于500bP. 展开更多

关键词 吉氏巴斯虫 MRNA 分离 犬病

原文传递

利用cDNA-AFLP技术分析龙眼子叶胚基因表达差异 被引量：1

14

作者 卢秉国 申艳红 +3 位作者 蒋际谋 陈晓静 陈伟 吕柳新 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期562-566,共5页

分别提取‘红核子’龙眼(Dimdcarpus longan Lour.)谢花后35d(早期)和50d(晚期)子叶胚RNA,建立cDNA-AFLP分析体系,获得指纹图谱。对41个差异片段回收克隆和序列分析,表明其中21个与已知功能基因具有高度同源性,这些基因的功能主要涉及... 分别提取‘红核子’龙眼(Dimdcarpus longan Lour.)谢花后35d(早期)和50d(晚期)子叶胚RNA,建立cDNA-AFLP分析体系,获得指纹图谱。对41个差异片段回收克隆和序列分析,表明其中21个与已知功能基因具有高度同源性,这些基因的功能主要涉及侧生器官的离轴极性、糖酵解、能量代谢、离子转运、细胞壁伸长、细胞周期调控、RNA转录、RNA翻译和调控、蛋白磷酸化调控和降解、信号转导等;其余片段与已知基因的同源性较低或没有。 展开更多

关键词 龙眼 子叶胚 RNA提取 cdna-AFLP

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暗纹东方鲀性别相关基因dmrt1的分离、鉴定及表达分析 被引量：1

15

作者 高莹莹 黄滨 +2 位作者 胡鹏 刘新富 刘滨 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2020年第6期99-110,共12页

为探究暗纹东方鲀dmrt1基因的序列和结构信息,初步研究dmrt1基因在性腺发育和性别分化过程中的作用,我们利用RACE技术成功分离出暗纹东方鲀dmrt1基因cDNA的全长序列,并对其在成鱼不同组织和幼鱼不同发育期性腺组织中的表达进行了鉴定和... 为探究暗纹东方鲀dmrt1基因的序列和结构信息,初步研究dmrt1基因在性腺发育和性别分化过程中的作用,我们利用RACE技术成功分离出暗纹东方鲀dmrt1基因cDNA的全长序列,并对其在成鱼不同组织和幼鱼不同发育期性腺组织中的表达进行了鉴定和分析。结果表明:dmrt1基因cDNA全长1620bp(NCBI登录号:MH218816),编码294个氨基酸,与红鳍东方鲀及星点东方鲀序列相似性最高。dmrt1基因编码的蛋白是一种不稳定的亲水性蛋白,不存在信号肽序列和跨膜区;该蛋白最可能存在于线粒体、细胞质和细胞核;Dmrt1蛋白含有45个磷酸化位点,但不含N(糖基化位点和跨膜保守结构域,二级结构以无规卷曲为主;氨基酸多重序列比对结果显示Dmrt1氨基酸序列的DM结构域在哺乳动物和鱼类中均高度保守,且近C—末端的氨基酸序列也比较保守。荧光定量PCR分析显示dmrt1基因主要在雄鱼中表达,尤其是在精巢中表达量最高,而且dmrt1在幼鱼不同发育期精巢中的表达量呈现出先降低再迅速升高的表达趋势,而相对于精巢而言,卵巢中dmrt仅有微弱表达。研究结果表明,dmrt1可能在雄性性别分化和精巢发育等过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 暗纹东方鲀 DMRT1 cdna分离 组织表达 发育期

原文传递

黄条鰤MSTN基因的克隆及其在早期发育中的表达特征 被引量：1

16

作者 史宝 曹亚男 +4 位作者 柳学周 孙冉冉 徐永江 王滨 姜燕 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期35-43,共9页

为解析肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因在黄条鰤(Seriola aureovittata)生长发育过程中作用机制。本研究采用cDNA末端快速扩增法,克隆了黄条鰤MSTN基因的全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对MSTN mRNA在黄条鰤不同组织、... 为解析肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因在黄条鰤(Seriola aureovittata)生长发育过程中作用机制。本研究采用cDNA末端快速扩增法,克隆了黄条鰤MSTN基因的全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对MSTN mRNA在黄条鰤不同组织、胚胎发育过程以及仔稚幼鱼发育过程中的差异表达特征进行了研究。序列分析结果显示,MSTN基因全长cDNA为1828 bp,开放阅读框为1131 bp,编码了376个氨基酸。RT-qPCR分析表明,在检测的脑、垂体、肝脏、肌肉、脾脏、肾脏、鳃、心脏、胃、肠、头肾组织中MSTN mRNA均有表达,其在肌肉中表达量最高(P<0.05)。MSTN mRNA在胚体下包2/3时期至孵化期表达量显著升高,且在孵化期达到峰值(P<0.05)。MSTN mRNA在孵化后3天前表达量显著升高(P<0.05),在第20天降低至较低水平,25天后表达量再次显著升高,在第30天达到峰值(P<0.05)。研究结果首次揭示了MSTN基因在黄条鰤的胚胎及早期生长发育过程中发挥着重要作用,本研究为开展黄条鰤繁养殖、育种提供了理论参考。 展开更多

关键词 黄条鰤 MSTN基因 胚胎发育 仔稚幼鱼发育 基因克隆 表达特征

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SARS肺组织毒的分离及其全基因组cDNA文库的构建

17

作者 胡建和 赵坤 +4 位作者 王丽荣 杭柏林 李任峰 王三虎 刘兴友 《河南科技学院学报》 2006年第1期1-4,共4页

利用常规病毒分离方法,自死亡病人肺组织病料剖检样品中成功分离到了强致病性SARS-Cov肺组织毒。根据已发表的SARS-Cov Tor2株序列,设计并合成了38条覆盖全长基因组的PCR引物。应用RT-PCR技术从实验感染的Vero E6细胞上清中成功地扩增... 利用常规病毒分离方法,自死亡病人肺组织病料剖检样品中成功分离到了强致病性SARS-Cov肺组织毒。根据已发表的SARS-Cov Tor2株序列,设计并合成了38条覆盖全长基因组的PCR引物。应用RT-PCR技术从实验感染的Vero E6细胞上清中成功地扩增出了各相应的cDNA重叠片段,分别克隆至pGEM-T载体后,构建了SARS-Cov肺组织毒全基因组cDNA文库。SARS-Cov肺组织毒全基因组cDNA文库的构建为进一步研究SARS-Cov的分子生物学特性奠定了基础。 展开更多

关键词 非典型肺炎 冠状病毒 肺组织毒 病毒分离 cdna文库

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梅花鹿鹿茸尖端组织Tβ-4基因全长cDNA的分离与生物信息学分析

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作者 黄皓 郝丽 +4 位作者 肖向红 刘畅 李和平 柴龙会 张晶钰 《野生动物学报》 北大核心 2017年第2期162-167,共6页

胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ-4)是真核生物细胞中的一种具有多重生物学功能的肌动蛋白螯合分子。本研究首次从梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库中成功克隆了Tβ-4基因的全长cDNA序列,并结合生物信息学方法对该基因的氨基酸序列进行了分析... 胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ-4)是真核生物细胞中的一种具有多重生物学功能的肌动蛋白螯合分子。本研究首次从梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库中成功克隆了Tβ-4基因的全长cDNA序列,并结合生物信息学方法对该基因的氨基酸序列进行了分析。结果表明,梅花鹿Tβ-4基因cDNA全长为770 bp,编码44个氨基酸,相对分子质量为5 052.65 u,理论等电点为5.02,其一级结构中赖氨酸和谷氨酸残基所占比例最高,二级结构元件主要以α-螺旋和无规则卷曲为主。结构分析发现,Tβ-4蛋白氨基酸序列含有"Thymosin family"结构域,没有N端信号肽,没有跨膜区。同源序列分析表明,梅花鹿与白颊长臂猿、人、牛的亲缘关系较近,氨基酸同源性高于85%。Tβ-4在鹿茸尖端组织全长cDNA文库中高丰度表达,提示它可能在鹿茸生长发育中起到重要调节作用。 展开更多

关键词 鹿茸 胸腺素Β4 cdna文库 分离 生物信息学

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单叶省藤三种组织RNA提取和全长cDNA文库构建

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作者 杨帆 李发根 +3 位作者 翁启杰 李梅 洪亚辉 甘四明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第4期800-803,共4页

本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解严重;考虑到改良CTAB法成本较低,故推荐为首选方法。将茎、雄... 本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解严重;考虑到改良CTAB法成本较低,故推荐为首选方法。将茎、雄花序和根三种组织的RNA等量混合后,利用SMART策略构建了全长cDNA文库;通过涂平板培养后的菌落计数,测得初库滴度为2.91×105cfu/μL;从培养平板上随机挑取16个菌落进行PCR检测,文库重组率为87.5%,插入片段平均长度为1.5kb左右。所建文库的质量可靠,为下一步的EST测序和候选基因发现提供了材料基础。 展开更多

关键词 单叶省藤 RNA提取 cdna文库

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小金海棠总RNA提取方法比较及cDNA的LD-PCR扩增 被引量：49

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作者 张玉刚 成建红 +2 位作者 韩振海 许雪峰 李天忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期50-53,共4页

用CTAB和SDS-酚两种方法提取了小金海棠根的总RNA,以CTAB法提取的总RNA为模板,用长距离PCR(LD-PCR)的方法合成了双链cDNA并进行了扩增。结果表明,CTAB法比SDS-酚法提取的总RNA纯度高、完整性好,宜于进行RT-PCR和cDNA文库的构建,SDS-酚... 用CTAB和SDS-酚两种方法提取了小金海棠根的总RNA,以CTAB法提取的总RNA为模板,用长距离PCR(LD-PCR)的方法合成了双链cDNA并进行了扩增。结果表明,CTAB法比SDS-酚法提取的总RNA纯度高、完整性好,宜于进行RT-PCR和cDNA文库的构建,SDS-酚法操作简单易行,提取产物可以直接用于转膜进行Northern杂交。 展开更多

关键词 小金海棠 总RNA 提取方法 cdna LD-PCR扩增 酶活性

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