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小麦抗病基因表达谱中的文库构建与筛选方法研究 被引量:26
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作者 骆蒙 孔秀英 +2 位作者 刘越 周荣华 贾继增 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期814-819,共6页
以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”BC5F4为材料 ,构建了白粉病菌诱导的普通cDNA文库和抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。分别对两文库进行了一定规模的测序 ,获得普通cDNA文库不重复ESTs 387条和SSHcDNA文库ESTs 76 0条。将获得的E... 以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”BC5F4为材料 ,构建了白粉病菌诱导的普通cDNA文库和抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。分别对两文库进行了一定规模的测序 ,获得普通cDNA文库不重复ESTs 387条和SSHcDNA文库ESTs 76 0条。将获得的ESTs与GenBank序列进行了BLASTn、BLASTx同源性分析。结果表明 :在普通文库中 ,一些参与光合作用与核糖体构成等的基因出现频率较高 ,而获得的抗病相关基因则较少。消减文库在构建方法、抗病相关基因的富集等方面具有明显的优越性 ,是目前抗病基因表达谱研究中的较好方法。利用高密度点阵膜杂交技术对两文库的筛选结果表明 ,该方法具有相对简便易操作、杂交膜可反复使用等优点 ;但也存在mRNA及同位素用量大等问题。经筛选 ,消减文库中有 5 4 1%的功能已知ESTs为抗病相关基因 。 展开更多
关键词 cdna文库 杂交筛选 小麦 抗病基因表达谱 文库构建 筛选方法
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美洲大蠊若虫cDNA表达文库的构建和初步鉴定 被引量:21
2
作者 刘志刚 黄炯烈 +3 位作者 朱振宇 周珍文 刘玉琳 龚十妹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第S2期9-11,共3页
目的 构建美洲大蠊若虫cDNA表达文库。方法 应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell NotⅠ EcoRⅠ CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点间 ,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果 已成功构建一个含 1.2 9× 10 6 个重... 目的 构建美洲大蠊若虫cDNA表达文库。方法 应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell NotⅠ EcoRⅠ CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点间 ,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果 已成功构建一个含 1.2 9× 10 6 个重组子的cDNA表达文库 ,重组率为 10 0 % ,插入片段大小平均约 1.12kb。 展开更多
关键词 美洲大蠊若虫 cdna表达文库 鉴定 重组变应原
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平颏海蛇毒腺cDNA表达文库的构建 被引量:13
3
作者 钟肖芬 卫剑文 +2 位作者 赵贵军 吴文言 徐安龙 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期66-69,共4页
以真核表达载体质粒pcDNA3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库 ,这是国内首个海蛇cDNA文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱... 以真核表达载体质粒pcDNA3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库 ,这是国内首个海蛇cDNA文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱氨酸丰富毒蛋白基因共 10个编码海蛇毒素蛋白的新基因 . 展开更多
关键词 平颏海蛇 毒腺 cdna表达文库
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Gateway~技术构建交链孢菌JH505 cDNA文库 被引量:12
4
作者 龙松华 张宁 +2 位作者 邱德文 黎定军 黄炜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期963-965,共3页
Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总... Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总容量为9×107cfu,平均插入片段为1510bp。通过LR重组把入门文库转换为表达文库,表达文库的滴度为1.58×106cfu/mL,文库总容量为6.32×106cfu,平均插入片段大小为1680bp。表达文库的构建为进一步克隆植物激活蛋白基因打下了基础。 展开更多
关键词 GATEWAY技术 交链孢菌 激活蛋白 cdna入门文库 cdna表达文库
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玫瑰红绿海葵触手cDNA表达文库的构建和初步分析 被引量:13
5
作者 刘文华 王义良 +5 位作者 陈慧萍 姜孝玉 涂洪斌 卫剑文 彭文烈 徐安龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期749-753,共5页
A cDNA expression library of the tentacles of Sagartia rosea was constructed. The cDNA was cloned into eukaryotical expression plasmid pcDNA3. SMART TM protocol was used for cDNA library construction and bioinformatic... A cDNA expression library of the tentacles of Sagartia rosea was constructed. The cDNA was cloned into eukaryotical expression plasmid pcDNA3. SMART TM protocol was used for cDNA library construction and bioinformatics analysis was carried out. 71 novel EST clones were obtained from 130 sequences in the library, of which there were 21 full-length clones, including cytolysin genes, flourescent protein, ubiquinol-cytochrome C reductase gene, elongation factor, ferritin gene riboflavin kinase gene, ribosomal protein. This provides a base for further investigating their biological activity and application. 展开更多
关键词 玫瑰红绿海葵 触手 cdna表态文库 构建
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赤魟尾刺cDNA表达文库的构建 被引量:11
6
作者 涂洪斌 卫剑文 +4 位作者 姜孝玉 陈慧萍 钟肖芬 吴文言 徐安龙 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期906-909,共4页
目的 以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法 应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果 通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得... 目的 以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法 应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果 通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得了 5 6个赤新EST序列 ,其中已确定的全长cDNA克隆有 2 4个 ,包括IPL肿瘤抑制因子、亲环素cyclophilinA、硒蛋白selenoproteinW、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatinA、tyrosyl tRNAsynthetase和calcineurin类似物蛋白等。结论 这些基因在赤中绝大多数均为首次发现。赤尾刺cDNA表达文库的成功构建 。 展开更多
关键词 赤魟 尾刺 cdna表达文库 海洋药物 中药
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华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定 被引量:13
7
作者 陈守义 余新炳 +5 位作者 徐劲 虢国泰 蒋忠军 吴德 胡旭初 李军涛 《热带医学杂志》 CAS 2003年第1期22-24,8,共4页
目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后... 目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4~4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30%左右,1kb~500bp占69%。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。 展开更多
关键词 华支睾吸虫囊蚴 cdna表达文库 构建 鉴定
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从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究 被引量:11
8
作者 袁明 王颖 +7 位作者 张惠珍 王树军 张笑人 尤强 马安伦 冯荻 周光炎 葛海良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期138-140,共3页
目的利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库SEREX,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA... 目的利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库SEREX,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RTPCR,分析正常组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果所获基因片段大多数为已知抗原基因20/27。根据其来源又可归类为结构基因、线粒体基因和调控基因。另外,获得6个未知的EST片段。RTPCR的结果表明,4个ESTEST8788、1750、1754和3533片段在肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法,所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。 展开更多
关键词 卵巢癌 cdna表达文加 SEREX筛选 肿瘤抗原 基因表达
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霜天蛾cDNA表达文库的构建和初步鉴定 被引量:11
9
作者 孙秀珍 刘昀 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期244-246,279,共4页
目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的... 目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的双链dscDNA经过凝胶柱层析,收集大于400bp的cDNA片段,加工后与UniZAPXRVector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5×105重组子的霜天蛾表达文库,重组率为67%,平均插入片段长度约为1.49kb。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA克隆。 展开更多
关键词 霜天蛾 cdna表达文库 鉴定
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用长距PCR法构建恶性疟原虫cDNA表达文库 被引量:10
10
作者 傅作申 程远国 +7 位作者 张玉静 阮承迈 单成启 古稀波 陈知航 侯禹男 陈泽建 李英 《热带医学杂志》 CAS 2002年第3期225-229,共5页
目的 构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法 用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶... 目的 构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法 用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶试剂盒回收 2 0 0bp以上DNA片断 ,经与载体λTriplEX2连接和蛋白抽提物体外包装后 ,构建成cDNA文库并对文库进行了初步的鉴定。结果 构建了高滴度 ,高重组率的恶性疟原虫cDNA表达文库。结论 所构建的疟原虫cDNA文库适合进一步筛选抗疟原虫药物结合蛋白基因。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 长距PCR cdna表达文库 玻璃奶试剂
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甜菜夜蛾肠粘蛋白cDNA基因的分子克隆与序列分析 被引量:13
11
作者 张霞 李国勋 郭巍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期3898-3904,共7页
【目的】围食膜(peritrophic membrane,PM)是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,它能够促进食物消化,保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白(ⅡM)是其重要组分之一。因此,作为中肠防御系统的PM已成为害虫... 【目的】围食膜(peritrophic membrane,PM)是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,它能够促进食物消化,保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白(ⅡM)是其重要组分之一。因此,作为中肠防御系统的PM已成为害虫生物防治的新靶标。分离和鉴定甜菜夜蛾肠粘蛋白基因cDNA。【方法】以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)中肠为材料,依据stratagene公司试剂盒方法,构建甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库。依据现代免疫学原理,利用粉纹夜蛾肠粘蛋白特异性多克隆抗体(anti-ⅡMantiserum)筛选该文库。【结果】cDNA表达文库滴度为8.51×106pfu/ml,重组率为99.97%。筛选文库得到一个编码甜菜夜蛾肠粘蛋白的cDNA克隆SeⅡM-8。核酸序列分析显示,该cDNA长为2234bp,在polyA末端上游24bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AAATTA。最长读码框(ORF)编码714个氨基酸,与粘虫肠粘蛋白(Mamestra configurata intestinal mucin)序列相似性为42%。结构域分析表明,它具有5个几丁质结合功能域;一个富含苏氨酸类粘蛋白结构域,重复序列为TTTQAPTTT,高度O-联糖基化;一个天冬氨酸富集区,序列DDDKPGCNGNCPE重复达12次,该区域在已知的昆虫肠粘蛋白中属首次发现。与已知肠粘蛋白比较,推测其5′端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。SeⅡM-8基因在GenBank登录号为EU047712。【结论】从本研究构建的高质量甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库中筛选得到一个新的围食膜蛋白基因SeⅡM-8。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 中肠 cdna表达文库 昆虫肠粘蛋白 SeⅡM-8
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黄芩bHLH转录因子基因家族生物信息学及表达分析 被引量:13
12
作者 陈媞颖 刘娟 +2 位作者 袁媛 周骏辉 黄璐琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期671-677,共7页
目的通过生物信息学方法,克隆黄芩Scutellaria baicalensis bHLH基因,并初步探究其功能。方法使用BLAST软件从黄芩cDNA文库中筛选出bHLH基因,克隆其全长cDNA序列,测序验证后使用ORF Finder预测开放阅读框,并进行蛋白序列特征分析,使用... 目的通过生物信息学方法,克隆黄芩Scutellaria baicalensis bHLH基因,并初步探究其功能。方法使用BLAST软件从黄芩cDNA文库中筛选出bHLH基因,克隆其全长cDNA序列,测序验证后使用ORF Finder预测开放阅读框,并进行蛋白序列特征分析,使用荧光定量PCR方法比较bHLH基因在不同器官以及受赤霉素刺激下的表达情况。结果克隆的6个bHLH转录因子基因(bHLH1~3,bHLH5~7),分属6个亚家族,其中2个有完整的开放阅读框。bHLH基因相对表达水平分析发现,100μmol/L GA3处理后bHLH2、bHLH3表达量升高,bHLH1、bHLH5~7表达量降低;bHLH基因在黄芩的根与花中表达量较高,其中bHLH1、bHLH2、bHLH5、bHLH7在花中表达量最高,bHLH3在根中表达量最高;bHLH基因与黄酮类成分生物合成及调控基因表达水平具有一定相关性。结论为进一步完善黄芩黄酮类成分的分子调控网络奠定基础。 展开更多
关键词 黄芩 bHLH转录因子 生物信息学 表达分析 cdna文库
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日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的构建和初步分析 被引量:8
13
作者 姜孝玉 涂洪斌 +4 位作者 陈慧萍 卫剑文 杨文利 吴文言 徐安龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期424-428,共5页
以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (EST... 以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 35个 ,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等 ,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现 .日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础 . 展开更多
关键词 日本鬼Yuo 毒腺 cdna表达文库 刺毒鱼类
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金钱鱼毒腺cDNA表达文库的构建及EST序列分析 被引量:9
14
作者 陈慧萍 姜孝玉 +4 位作者 涂洪斌 杜晶春 卫剑文 杨文利 徐安龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期166-170,共5页
以金钱鱼 (Scatophagusargus)毒腺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的金钱鱼毒腺cDNA表达文库 .应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术和生物信息学分析等方法 ,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得了 ... 以金钱鱼 (Scatophagusargus)毒腺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的金钱鱼毒腺cDNA表达文库 .应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术和生物信息学分析等方法 ,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得了 2 0 1个金钱鱼新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 2 7个 ,包括多个核糖体大小亚基蛋白 (ribosomalprotein)、细胞凋亡相关蛋白 (programmedcelldeath 10 ) ,G蛋白信号调控子 (Gproteinsignalingregulator)、胸腺素(thymosinbeta 4 )、延伸因子 (translationelongationfactor 1 alpha)和泛素 (ubiquitin)等 .金钱鱼毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为研究金钱鱼毒腺的活性组分及其作用机制奠定了基础 。 展开更多
关键词 金钱鱼 毒腺 cdna 表达文库 EST 序列分析 功能基因
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华支睾吸虫cDNA表达文库的构建及初步筛选 被引量:9
15
作者 陈守义 余新炳 +4 位作者 徐劲 蒋忠军 吴德 何东苟 林睿 《中国热带医学》 CAS 2003年第3期282-284,共3页
目的 构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。 方法 提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSp... 目的 构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。 方法 提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4~ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。 结果 未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。 结论 已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD 展开更多
关键词 华支睾吸虫 cdna表达文库 构建 筛选
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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆 被引量:6
16
作者 景志忠 郭爱疆 +2 位作者 海岗 宗瑞谦 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期391-396,共6页
研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。 展开更多
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 免疫原 cdna文库 克隆 构建 cdna表达文库 基因组DNA 发育阶段 质粒表达载体 特异性引物 BLAST 基因家族 快速筛选 库容量 代表性 重组率 转录本
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从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物 被引量:5
17
作者 王颖 葛海良 +5 位作者 袁明 张惠珍 王树军 马安伦 尤强 周光炎 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期371-374,共4页
采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该... 采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 。 展开更多
关键词 卵巢癌 cdna文库 肿瘤标志物 SEREX
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利用Gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库 被引量:8
18
作者 李晨 沈海涛 +2 位作者 张煜星 王爱英 祝建波 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第5期534-536,共3页
以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库。从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲en-try cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重... 以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库。从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲en-try cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重组反应将雪莲cDNA重组到植物表达载体pLEELA上,从而构建了天山雪莲cDNA表达文库。结果表明:cDNA入门文库滴度达到1.2×107cfu/mL,文库总容量为4.8×107cfu。表达文库的滴度为6.9×106cfu/mL,文库总容量为2.76×107cfu,插入片段平均大小1000 bp。阳性克隆率100%。天山雪莲cDNA表达文库的建立为进一步高通量筛选天山雪莲抗寒基因奠定了基础。 展开更多
关键词 天山雪莲 cdna入门文库 cdna表达文库 GATEWAY技术
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华北大黑鳃金龟中肠丝氨酸蛋白酶cDNA克隆、序列分析及表达 被引量:9
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作者 刘海明 郑桂玲 +1 位作者 李长友 周洪旭 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期147-155,共9页
丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDN... 丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDNA序列,命名为HoSP1(GenBank登录号为FJ573146)。序列分析表明,该基因长902bp,开放阅读框(ORF)长783bp,编码260个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.7kDa和4.19,不含有N-糖基化位点,但在Thr157处有一个O-糖基化位点,含有6个保守的半胱氨酸残基,组成3对二硫键,对于维持蛋白质的三级结构起着重要的作用。通过与几种丝氨酸蛋白酶的比对发现,该酶具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心,与褐新西兰肋翅鳃金龟Costelytra zealandica的14种丝氨酸蛋白酶有明显的相似性,其中与CzSP3的序列一致性最高,为52.47%。把该基因与pET21b载体重组后,进行体外表达,以BTEE为底物,测得该酶的活力为0.0378μmol/mg·min。HoSP1基因的克隆及体外表达为进一步研究该酶在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能提供了依据。 展开更多
关键词 华北大黑鳃金龟 cdna表达文库 丝氨酸蛋白酶 序列分析 体外表达
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碱蓬 c DNA表达文库的构建(英文) 被引量:8
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作者 马秀灵 王丽萍 张慧 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第6期1289-1294,共6页
以盐生植物盐地碱蓬 (Suaeda salsa)地上部分为材料 ,提取植物总 RNA,纯化出 m R-NA,合成 c DNA第一链 ,得到双链 c DNA后 ,连接入植物表达载体 ,构建 c DNA表达文库。该文库重组子约 1 0 6。将该文库转化农杆菌 GV31 0 1 ,可直接用以... 以盐生植物盐地碱蓬 (Suaeda salsa)地上部分为材料 ,提取植物总 RNA,纯化出 m R-NA,合成 c DNA第一链 ,得到双链 c DNA后 ,连接入植物表达载体 ,构建 c DNA表达文库。该文库重组子约 1 0 6。将该文库转化农杆菌 GV31 0 1 ,可直接用以转化拟南芥。 展开更多
关键词 cdna表达文库 表达载体 盐地碱蓬 耐盐性 抗逆性
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