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rhBMP-2体外诱导骨质疏松大鼠BMSCs成骨及VEGF表达的研究 被引量：12
1
作者 李军 王云 +2 位作者 鲍小明 卫鹏斌 张民 《中国骨伤》 CAS 2015年第5期446-449,共4页
目的 :观察骨形态发生蛋白-2对骨质疏松时骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成骨及成骨因子VEGF表达的影响,为骨质疏松证的防治提供新的方法。方法:将20只6月龄,体重(300±20)g雌性SD大鼠双侧卵巢切除,术后3个月利用双能X线骨密度仪测量大... 目的 :观察骨形态发生蛋白-2对骨质疏松时骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成骨及成骨因子VEGF表达的影响,为骨质疏松证的防治提供新的方法。方法:将20只6月龄,体重(300±20)g雌性SD大鼠双侧卵巢切除,术后3个月利用双能X线骨密度仪测量大鼠全身骨密度并与术前比较,确保造模成功,并运用全骨髓贴壁法培养骨质疏松大鼠BMSCs,倒置相差显微镜下观察BMSCs形态。随机把骨质疏松大鼠BMSCs第2代(p2)细胞分成实验组和对照组,分别加入完全培养基(含rh BMP-2)、成骨诱导液进行成骨诱导。2周后茜素红染色法检测各组细胞钙结节的形成,酶标仪测定碱性磷酸酶活性及RT-PCR法检测VEGF的表达量。结果:(1)大鼠全身骨密度:手术前后大鼠全身骨密度分别为(0.179±0.007),(0.158±0.006)g/cm2,差异有统计学意义(t=4.180,P<0.05)。(2)茜素红染色:BMSCs(P2)成骨诱导2周后实验组染色效果明显强与对照组。(3)碱性磷酸酶活性:BMSCs(P2)成骨诱导2周后碱性磷酸酶活性实验组明显高于对照组,分别为(15.62±1.27),(8.62±0.93)μg/prot,差异有统计学意义(t=7.709,P<0.01)。(4)BMSCs(P2)成骨诱导2周后VEGF表达:实验组明显高于对照组,分别为3.723±0.143,0.950±0.072,差异有统计学意义(t=29.462,P<0.01)。结论 :rh BMP-2能提高去卵巢骨质疏松大鼠BMSCs的体外成骨能力,可促进成骨因子VEGF的表达,调控VEGF的表达可能是骨形态发生蛋白-2参与骨代谢的机制之一。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2 骨质疏松 血管内皮因子 骨髓基质干细胞
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地黄饮子孵育BMSCs移植对脑梗死大鼠MMP-9和TIMP-1的影响 被引量：2
2
作者 潘政 程小丽 +1 位作者 程小锋 刘永琦 《甘肃中医学院学报》 2014年第2期1-4,共4页
目的研究地黄饮子孵育骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植对脑梗死大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探讨其对大脑的保护作用。方法将健康SPF级Wistar大鼠随机分... 目的研究地黄饮子孵育骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植对脑梗死大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探讨其对大脑的保护作用。方法将健康SPF级Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组,用线栓法制成Wistar大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),术后24 h假手术组、模型组大鼠经尾静脉注射生理盐水,其余各组大鼠经尾静脉输入相应药物孵育的BMSCs。移植后7 d,14 d断头取脑,用免疫组化法检测脑组织中MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果与假手术组比较,模型组MMP-9表达明显增加(P<0.05);地黄饮子组、维甲酸组、BMSCs组与模型组比较,MMP-9的表达均降低(P<0.05),但仍高于假手术组。模型组TIMP-1的表达明显降低(P<0.05),各治疗组均增高(P<0.05)。结论地黄饮子孵育BMSCs可通过调节MMP-9与TIMP-1的表达,进而发挥脑保护作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 脑梗死 地黄饮子 基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶组织抑制剂-1
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TNFR Ⅰ-IgGFc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及其在骨髓基质干细胞的表达
3
作者 温茜 马骊 +3 位作者 金丹 崔建德 罗微 王小宁 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2007年第12期1143-1147,共5页
目的构建携带人肿瘤坏死因子受体Ⅰ-胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体（Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc），体外转染兔骨髓基质干细胞（BMSCs），探讨转TNFR Ⅰ-IgGFc基因的BMSCs治疗类风湿关节炎的可行性。方法将TNFR Ⅰ-I如Fc基因插入腺病... 目的构建携带人肿瘤坏死因子受体Ⅰ-胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体（Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc），体外转染兔骨髓基质干细胞（BMSCs），探讨转TNFR Ⅰ-IgGFc基因的BMSCs治疗类风湿关节炎的可行性。方法将TNFR Ⅰ-I如Fc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316，与辅助质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染HEK293细胞，重组产生Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc，PCR鉴定毒种正确后，进行扩增、纯化和滴度测定，转染培养至第2代BMSCs，利用RT—PCR、原位杂交、免疫组化方法，检测转染后细胞中TNFR Ⅰ-IgGFc的转录和表达。结果成功构建了Ad-TNFR Ⅰ-IgGFc，感染性滴度达3×10^10 TCID50／mL，转染后BMSCs在mRNA和蛋白水平均有TNFR Ⅰ-IgGFc表达。结论构建的Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc可有效转染BMSCs，并在其中高效表达，为将表达TNFR Ⅰ-IgGFc基因的BMSCs用于类风湿关节炎治疗的实验研究提供了基础。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 腺病毒载体 骨髓基质干细胞 类风湿关节炎
原文传递
骨髓间充质干细胞体内定向诱导分化及对肝功能影响的实验研究
4
作者 罗衍波 陈斌 +2 位作者 金丽华 马经野 倪勇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第14期2147-2150,2155,共5页
目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞功能的细胞分化并探讨其对大鼠受损肝脏修复作用的可行性。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质... 目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞功能的细胞分化并探讨其对大鼠受损肝脏修复作用的可行性。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒转染第3代BMSCs后从门静脉植入同种异体肝损伤大鼠体内,分别于移植后7、14和28d行血清肝功能检测。于移植后的第28天取出肝脏,通过冷冻切片行荧光检测,研究BMSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果BMSCs体内移植后定居于肝脏内。ALB在术后第7、28天,A组与B组比较差异有显著性[7d:(18.81±0.96)vs(17.94±1.13),P<0.05]。[28d:(20.08±0.56)vs(19.28±0.50),P<0.05]。AST在术后第7天,A组与B组之间比较差异有显著性[7d:(213.50±45.35)vs(262.20±44.15),P<0.01],第14天差异有显著性[14d(:176.50±33.53)vs(230.30±68.45),P<0.05]。术后第14天,A组ALB、ALT、ALP与C组比较均无明显差异。结论经门静脉移植的BMSCs能在受损肝脏内定居、增殖,BMSCs移植可以在一定程度上修复受损肝脏。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞移植 肝细胞 分化 慢病毒
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联合G418筛选构建GFP转基因骨髓基质干细胞系的实验研究
5
作者 王亮亮 孙婧 +2 位作者 刘强和 邓铭 彭文丽 《海南医学》 CAS 2018年第20期2813-2815,共3页
目的联合G418筛选构建绿色荧光蛋白(GFP)转基因SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)系,用于骨髓基质干细胞体外培养及向内耳神经细胞诱导分化的进一步研究。方法制备大鼠骨髓基质干细胞,选用脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染方法将含有pcDNA3.... 目的联合G418筛选构建绿色荧光蛋白(GFP)转基因SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)系,用于骨髓基质干细胞体外培养及向内耳神经细胞诱导分化的进一步研究。方法制备大鼠骨髓基质干细胞,选用脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染方法将含有pcDNA3.1-GFP的重组质粒转染至大鼠骨髓基质干细胞中,荧光显微镜检测GFP蛋白表达,通过G418筛选法建立稳定、含pcDNA3.1-GFP的单克隆骨髓基质干细胞系。结果 500μg/mL的G418压力筛选后,获得了具有G418抗性的绿色荧光蛋白(GFP)转基因SD大鼠骨髓基质干细胞系。结论成功地培育了G418抗性的GFP转基因大鼠骨髓基质干细胞系,为进行下一步体外特异微环境下的诱导分化提供实验基础。 展开更多
关键词 G418 绿色荧光蛋白 转染 骨髓基质干细胞
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