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汽车轮胎的突出质量问题与解决措施建议 被引量:6
1
作者 马良清 《轮胎工业》 CAS 2021年第3期137-142,共6页
以轿车和全钢载重子午线轮胎为例,介绍近年来轮胎使用过程中暴露出的主要质量问题。轮胎突出质量问题包括带束层脱层、胎面/胎侧龟裂、胎圈上方周向裂口、胎圈上方脱层、胎里凹陷和胎侧爆破,缺陷产生的原因包括原材料质量、生产工艺条... 以轿车和全钢载重子午线轮胎为例,介绍近年来轮胎使用过程中暴露出的主要质量问题。轮胎突出质量问题包括带束层脱层、胎面/胎侧龟裂、胎圈上方周向裂口、胎圈上方脱层、胎里凹陷和胎侧爆破,缺陷产生的原因包括原材料质量、生产工艺条件控制和操作技术以及轮胎结构设计等方面。对轮胎质量共性问题的解读可为轮胎企业提高轮胎制造水平和产品质量提供参考。 展开更多
关键词 轮胎 质量 带束层脱层 龟裂 胎圈裂口 胎圈脱层 胎里凹陷 胎侧爆破
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4种全自动核酸提取仪提取全血DNA效率的比较 被引量:6
2
作者 沙燕华 黄宪章 +5 位作者 黄小亭 曹顺旺 熊玉娟 柯培锋 林海标 陈曲波 《国际医药卫生导报》 2019年第15期2487-2490,共4页
目的比较4种全自动核酸提取仪在全血基因组检测中的核酸提取效果。方法分别用4个厂家的全自动核酸提取仪按预定的提取程序自动执行全血核酸提取,并与本实验室手工提取的核酸进行纯度和浓度比较。结果 4种全自动核酸提取仪提取全血核酸的... 目的比较4种全自动核酸提取仪在全血基因组检测中的核酸提取效果。方法分别用4个厂家的全自动核酸提取仪按预定的提取程序自动执行全血核酸提取,并与本实验室手工提取的核酸进行纯度和浓度比较。结果 4种全自动核酸提取仪提取全血核酸的260/280值均满足纯度1.7~2.0要求,并且核酸提取浓度高于本实验手工提取法或与本实验室手工提取法相当。结论 这4种全自动核酸提取仪提取效果优,自动化程度高,能满足临床标本应用。 展开更多
关键词 全自动核酸提取仪 磁珠分离 分子生物学 全血DNA
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磁稳定流化床干法选煤试验研究 被引量:4
3
作者 樊茂明 陈清如 +1 位作者 赵跃民 骆振福 《选煤技术》 CAS 北大核心 2002年第3期6-7,共2页
关键词 磁稳定流化床 干法选煤 磁场 分选原理 分选试验 磁珠
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Mesoporous TiO_2/Carbon Beads: One-Pot Preparation and Their Application in Visible-Light-Induced Photodegradation 被引量:2
4
作者 Xiaowei Li Yanqiu Jiang +3 位作者 Wenjing Cheng Yudong Li Xianzhu Xu Kaifeng Lin 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS 2015年第3期243-254,共12页
Mesoporous Ti O2/Carbon beads have been prepared via a facile impregnation-carbonization approach, in which a porous anion-exchange resin and K2 Ti O(C2O4)2were used as hard carbon and titanium source, respectively.Ch... Mesoporous Ti O2/Carbon beads have been prepared via a facile impregnation-carbonization approach, in which a porous anion-exchange resin and K2 Ti O(C2O4)2were used as hard carbon and titanium source, respectively.Characterization results reveal that the self-assembled composites have disordered mesostructure, uniform mesopores,large pore volumes, and high surface areas. The mesopore walls are composed of amorphous carbon, well-dispersed and confined anatase or rutile nanoparticles. Some anatase phase of Ti O2 was transformed to rutile phase via an increase of carbonization temperature or repeated impregnation of the resin with Ti O(C2O4)22-species. X-ray photoelectron spectroscopy, carbon, hydrogen, and nitrogen element analysis, and thermal gravity analysis results indicate the doping of carbon into the Ti O2 lattice and strong interaction between carbon and Ti O2 nanoparticles. A synergy effect by carbon and Ti O2 in the composites has been discussed herein on the degradation of methyl orange under visible light. The dye removal process involves adsorption of the dye from water by the mesopores in the composites, followed by photodegradation on the separated dye-loaded catalysts. Mesopores allow full access of the dye molecules to the surface of Ti O2 nanoparticles.Importantly, the bead format of such composite enables their straightforward separation from the reaction mixture in their application as a liquid-phase heterogeneous photodegradation catalyst. 展开更多
关键词 Ti O2nanoparticles Mesoporous carbon Composite bead Visible light Easy separation
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免疫纳米荧光碳点技术快速检测乙型副伤寒沙门菌 被引量:3
5
作者 夏圣 章佳英 +9 位作者 张元 成静 李小平 张苗苗 刘霞 杜凤仪 姜德立 陈敏 邵启祥 许化溪 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期568-570,共3页
目的建立一种以新型纳米材料——纳米荧光碳点(carbon dots,CDs)免疫示踪技术快速检测样本中细菌的方法。方法以检测乙型副伤寒沙门菌为例建立方法。用抗沙门菌Ha因子抗体耦联CDs制备成免疫纳米荧光碳点;用抗沙门菌O4因子抗体耦联磁珠... 目的建立一种以新型纳米材料——纳米荧光碳点(carbon dots,CDs)免疫示踪技术快速检测样本中细菌的方法。方法以检测乙型副伤寒沙门菌为例建立方法。用抗沙门菌Ha因子抗体耦联CDs制备成免疫纳米荧光碳点;用抗沙门菌O4因子抗体耦联磁珠粒对样本中乙型副伤寒沙门菌进行富集后,与抗Ha抗体耦联的CDs进行特异性结合,形成抗O4-磁珠粒-细菌-抗Ha-CDs"三明治"式免疫复合物;再用免疫亲和分离液移除复合物中的磁珠粒,借助荧光光谱仪测定分离液中CDs的荧光强度,推算出样品中致病菌的污染情况。结果抗Ha-CDs可有效结合抗O4-磁珠粒富集的细菌,对乙型副伤寒沙门菌的最低检测限为103CFU/mL,总时间约为2 h。结论建立的CDs技术可用于样本中乙型副伤寒沙门菌的快速检测。 展开更多
关键词 免疫荧光碳点技术 磁珠粒 乙型副伤寒沙门菌 免疫亲和分离
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半钢子午线轮胎胎圈脱层原因分析及解决措施 被引量:1
6
作者 余本祎 邢程 《轮胎工业》 CAS 2018年第12期733-736,共4页
分析半钢子午线轮胎胎圈脱层的原因,并从结构设计方面进行相应改进。结果表明,胎体第2层帘布采用正包结构,并在三角胶与胎体帘布之间加贴增强胶片,可调整胎圈区域各部件的应力分布,有效解决胎圈脱层问题,胎圈耐久性能显著提高,同时轮胎... 分析半钢子午线轮胎胎圈脱层的原因,并从结构设计方面进行相应改进。结果表明,胎体第2层帘布采用正包结构,并在三角胶与胎体帘布之间加贴增强胶片,可调整胎圈区域各部件的应力分布,有效解决胎圈脱层问题,胎圈耐久性能显著提高,同时轮胎充气外缘尺寸、强度性能、脱圈阻力和高速性能均满足国家标准要求。 展开更多
关键词 半钢子午线轮胎 胎圈脱层 结构调整 胎圈耐久性能
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不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究 被引量:2
7
作者 李文娇 阎俊 +2 位作者 杜娟 黄天娇 卢瑛 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 2017年第6期853-857,共5页
本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量... 本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量明显高于磁珠B。此外,免疫磁珠A对抗原的结合率和洗脱率分别为免疫磁珠B的1.5、1.8倍;免疫磁珠A对过敏原捕获率为47.9%,而免疫磁珠B仅为17.6%。对比两种磁珠的理化及其结构特点,发现粒径大、分散性差的磁珠在偶联过程会发生聚集,降低抗体偶联效率,从而影响纯化效果。结果显示,分散性好、抗体偶联率高的磁珠更适宜蛋白质的分离纯化。本研究为以后过敏原的纯化提供了一定的理论基础与实验依据。 展开更多
关键词 磁珠 过敏原纯化 原肌球蛋白 免疫磁分离技术
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利用锦纶包布增强技术提高轮胎抗载性能
8
作者 周天明 李振刚 《轮胎工业》 CAS 2009年第11期659-662,共4页
介绍全钢载重子午线轮胎胎圈脱层和胎圈裂产生的机理和原因,指出胎圈脱层是胎圈裂发展的前一阶段。为减少胎圈脱层和胎圈裂的产生,提出3种使用锦纶包布增强胎圈的方法。使用锦纶包布增强胎圈部位后,可增大与锦纶包布相连部位的胎侧和内... 介绍全钢载重子午线轮胎胎圈脱层和胎圈裂产生的机理和原因,指出胎圈脱层是胎圈裂发展的前一阶段。为减少胎圈脱层和胎圈裂的产生,提出3种使用锦纶包布增强胎圈的方法。使用锦纶包布增强胎圈部位后,可增大与锦纶包布相连部位的胎侧和内衬层刚性,从而降低胎圈脱层和胎圈裂产生的几率。 展开更多
关键词 全钢载重子午线轮胎 胎圈脱层 胎圈裂
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旋转式免疫磁珠细胞分离仪的研制 被引量:1
9
作者 梅剑春 范维佳 +3 位作者 刘晓华 崔迎进 么秀华 黄慧玲 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期7-10,共4页
提出了一种新型免疫磁珠细胞分离方法,通过让装有细胞与磁珠悬浊液的试管在环形磁铁中旋转的方式,使磁珠在离心力的作用下向管壁的方向运动,由于越靠近环形磁铁管壁的地方磁场强度越高,磁珠就越容易被吸附.通过对比,旋转分离方法具有更... 提出了一种新型免疫磁珠细胞分离方法,通过让装有细胞与磁珠悬浊液的试管在环形磁铁中旋转的方式,使磁珠在离心力的作用下向管壁的方向运动,由于越靠近环形磁铁管壁的地方磁场强度越高,磁珠就越容易被吸附.通过对比,旋转分离方法具有更高的分离效率.与此同时,基于该分离方法研制了一款细胞分离仪,将取枪头、脱枪头、移液、旋转试管等操作自动化,更方便临床使用. 展开更多
关键词 免疫磁珠 分离 纯化
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STUDY ON THE SEPARATION AND UTILIZATION TECHNOLOGY OF MAGNETIC BEAD IN FLY ASH
10
作者 边炳鑫 李哲 +2 位作者 吕一波 石宪奎 韦鲁滨 《Journal of Coal Science & Engineering(China)》 2000年第2期82-86,共5页
On the basis of study on physical and chemical properties of magnetic bead (MB) in fly ash (FA), the paper gives out the separation methods of MB and results of three separating process. The result of comparative test... On the basis of study on physical and chemical properties of magnetic bead (MB) in fly ash (FA), the paper gives out the separation methods of MB and results of three separating process. The result of comparative test in size, density, stability, magnetic material content, specific magnetic susceptibility (SMS), medium recovery oxidation resistance and wear resistance between MB and magnetic fines currently used in dense medium separation leads to that using MB recovered from fly ash is used as medium solids in coal cleaning in stead of magnetic fines not only have no influence upon taryests of separation, but can bring good economic and social benefits. 展开更多
关键词 magnetic bead (MB) fly ash (FA) specific magnetic susceptibility (SMS) separation
全文增补中
免疫磁性微球的研究进展 被引量:24
11
作者 徐辉 张国亮 张凤宝 《化学工业与工程》 CAS 2003年第1期27-32,58,共7页
免疫磁性微球是免疫学与磁性微球结合而发展起来的一类新型材料 ,免疫磁性分离法由于具有高效、快速、低毒、操作简单等优点 ,已广泛地应用于细胞学、免疫学、分子生物学等领域。本文简要介绍了免疫磁性微球的结构、性质、分离原理和特... 免疫磁性微球是免疫学与磁性微球结合而发展起来的一类新型材料 ,免疫磁性分离法由于具有高效、快速、低毒、操作简单等优点 ,已广泛地应用于细胞学、免疫学、分子生物学等领域。本文简要介绍了免疫磁性微球的结构、性质、分离原理和特点及其在国内外的制备现状 ,并对其在细胞分离与提纯、细胞体外扩增、免疫检测、核酸与基因工程、HLA分型。 展开更多
关键词 免疫磁性微球 研究进展 细胞分离 提纯 体外扩增 免疫检测 核酸 基因工程 HLA 分型
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免疫磁珠分离技术及其在食源性致病菌检测中应用的进展 被引量:19
12
作者 刘细霞 涂俊铭 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期956-960,共5页
免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)是利用磁珠上包被的特异性抗体与抗原发生亲和反应,从复杂的样品组份中分离目标抗原。再利用磁珠的磁响应性,实现对目标抗原的富集。该技术灵敏度高、特异性强、分... 免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)是利用磁珠上包被的特异性抗体与抗原发生亲和反应,从复杂的样品组份中分离目标抗原。再利用磁珠的磁响应性,实现对目标抗原的富集。该技术灵敏度高、特异性强、分离富集速度快、适用范围广。再结合最新的快速检测技术,使食源性致病菌的检测时间从传统的几天缩短到几小时,在食源性致病菌检测中得到广泛的应用。本文从免疫磁珠分离技术的原理,食源性致病菌免疫磁珠的类型,免疫磁珠分离技术在食源性致病菌检测中应用的进展几个方面进行综述。 展开更多
关键词 免疫磁珠分离技术 食源性致病菌
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回收粉煤灰中磁珠处理含磷废水 被引量:6
13
作者 王龙贵 《中国矿业》 北大核心 2003年第8期29-30,共2页
本文从综合利用角度 ,论述了回收粉煤灰中磁珠 ,利用磁珠作磁种 ,采用高梯度磁分离技术处理含磷废水的有效性和可行性 。
关键词 粉煤灰 磁珠 含磷废水 高梯度磁分离 废水处理 回收工艺 吸附 工艺流程 去除率
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免疫磁珠分离涂片和PCR检测痰内结核分枝杆菌的诊断价值研究 被引量:7
14
作者 郑玉群 许卫国 +2 位作者 陆伟 焦永军 肖占沛 《江苏预防医学》 CAS 2010年第2期14-17,共4页
目的:探讨免疫磁珠分离涂片染色镜检法和免疫磁珠分离-PCR法对痰标本中结核分枝杆菌的诊断价值。方法:利用纯化的兔抗H37Rv血清包被磁珠,对痰中结核分枝杆菌进行分离,再进行涂片和PCR检测。结果:免疫磁珠分离涂片法比直接涂片法(χ2=40.... 目的:探讨免疫磁珠分离涂片染色镜检法和免疫磁珠分离-PCR法对痰标本中结核分枝杆菌的诊断价值。方法:利用纯化的兔抗H37Rv血清包被磁珠,对痰中结核分枝杆菌进行分离,再进行涂片和PCR检测。结果:免疫磁珠分离涂片法比直接涂片法(χ2=40.83,P=0.039)、免疫磁珠分离-PCR法比常规PCR(χ2=23.31,P<0.01)的灵敏度高。结论:免疫磁珠分离涂片法和磁珠分离-PCR法因操作简单、阳性率高,适宜在临床上推广使用。 展开更多
关键词 免疫磁珠分离 结核分枝杆菌 涂片 聚合酶链反应
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免疫磁珠捕获法分离抗酸杆菌的实验研究 被引量:6
15
作者 杨江华 王文杰 +1 位作者 何自芳 喻艳林 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第3期168-169,F0002,共3页
目的建立免疫磁珠捕获法,用于分离抗酸杆菌,以提高痰菌阴性肺结核的诊断率。方法选取浸润型肺结核患者19例作为实验组,对照组6例,为肺部普通细菌感染者。受检者留取痰液,分别做直接涂片抗酸染色检查及免疫磁珠分选后抗酸染色检查。结果... 目的建立免疫磁珠捕获法,用于分离抗酸杆菌,以提高痰菌阴性肺结核的诊断率。方法选取浸润型肺结核患者19例作为实验组,对照组6例,为肺部普通细菌感染者。受检者留取痰液,分别做直接涂片抗酸染色检查及免疫磁珠分选后抗酸染色检查。结果 19例浸润型肺结核患者中,7例痰涂片抗酸染色检查阳性,免疫磁珠分选后抗酸染色仍阳性;在12例痰涂片阴性肺结核患者中,经免疫磁珠分选后6例抗酸染色阳性。6例普通细菌性肺炎患者经免疫磁珠分选后抗酸染色均为阴性。结论用免疫磁珠捕获法分离抗酸杆菌能显著提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。 展开更多
关键词 肺结核 抗酸染色 免疫磁珠
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基于免疫磁珠快速分离金黄色葡萄球菌的研究 被引量:6
16
作者 王程程 赵玲 +3 位作者 李敏通 王蓉晖 李延斌 胡耀华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期175-178,182,共5页
通过实验优化建立基于免疫磁分离技术对金黄色葡萄球菌的快速分离方法,为后续快速检测提供基础。利用金黄色葡萄球菌多抗制备的免疫磁珠对其捕获。结合平板菌落计数,考察包被磁珠时多抗加入量、免疫磁珠加入量及捕获时间等因素对捕获效... 通过实验优化建立基于免疫磁分离技术对金黄色葡萄球菌的快速分离方法,为后续快速检测提供基础。利用金黄色葡萄球菌多抗制备的免疫磁珠对其捕获。结合平板菌落计数,考察包被磁珠时多抗加入量、免疫磁珠加入量及捕获时间等因素对捕获效率的影响。在单因素实验基础上进行正交实验,并对该方法的灵敏度、特异性及其在食品中的应用效果初步探索。结果表明,最佳捕获条件为抗体加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕获时间45min,在此条件下捕获效率均超过30%,该方法捕获限可达到101CFU/mL,特异性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黄色葡萄球菌的快速分离,捕获时间小于1h。免疫磁分离作为一种快速的分离筛选方法,可用于食源性金黄色葡萄球菌的快速分离。 展开更多
关键词 免疫磁珠 金黄色葡萄球菌 捕获效率 快速分离
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微米级大孔径多孔硅珠的研制 被引量:3
17
作者 许德成 孙福璋 +3 位作者 姜洪波 朱铭 温庆 姜开 《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期336-339,共4页
采用尿素和甲醛在硅溶胶混溶下聚合形成新相聚合微球,烧掉有机物制成多孔硅珠。研究了对硅珠大小和均匀性的影响因素。主要影响因素是醛脲比、试剂的纯度特别是硅溶胶的纯化、pH值、温度、反应时间及搅拌情况。提出硅珠位径在5一1... 采用尿素和甲醛在硅溶胶混溶下聚合形成新相聚合微球,烧掉有机物制成多孔硅珠。研究了对硅珠大小和均匀性的影响因素。主要影响因素是醛脲比、试剂的纯度特别是硅溶胶的纯化、pH值、温度、反应时间及搅拌情况。提出硅珠位径在5一10μm、孔在在30一100nm之间或大于以上硅珠规格的制备工艺。这种硅珠可作为生物高分子及合成高分子的分离、分析的HPLC方法的载体。 展开更多
关键词 硅珠 生物高分子 分离 HPLC
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利用人免疫球蛋白构建免疫磁珠富集金葡菌条件优化 被引量:4
18
作者 梁光明 刘阳 +6 位作者 孙力军 王雅玲 徐德峰 刘唤明 罗林 陈宏 励建荣 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期265-271,共7页
利用人免疫球蛋白制备富集金黄色葡萄球菌的免疫磁珠及优化条件;利用化学键法制备免疫磁珠,并用矩阵法和单因素法优化免疫磁珠制备条件,通过磁珠对抗体饱和吸附量及加入量相关性评价磁珠与抗体固定化程度,根据免疫磁珠的特异性、灵敏性... 利用人免疫球蛋白制备富集金黄色葡萄球菌的免疫磁珠及优化条件;利用化学键法制备免疫磁珠,并用矩阵法和单因素法优化免疫磁珠制备条件,通过磁珠对抗体饱和吸附量及加入量相关性评价磁珠与抗体固定化程度,根据免疫磁珠的特异性、灵敏性及饱和捕捉量来考察IMBS.aureus对金葡菌的富集能力;结果显示采用MB-M型磁珠,加入质量浓度均为5 mg/L的活化剂EDC和NHS,于24℃偶联人IgG,24 h得到IMBS.aureus,其饱和吸附量为393.27μg,磁珠与人IgG加入量具有相关性,IMBS.aureus特异性好、灵敏度高(26 CFU/10 mL),0.2 mL IMBS.aureus饱和捕捉菌液浓度为106CFU/mL;通过优化,磁珠装载人IgG分子的能力提高了5倍,检测限提高了4倍,富集金葡菌的效率大大增强,成本降低,为人免疫球蛋白磁珠富集和分离金黄色葡萄球菌实际应用创造了条件。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 免疫磁法 人免疫球蛋白 富集
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应用免疫磁珠分离-改良罗氏培养技术检测痰结核分枝杆菌的研究 被引量:3
19
作者 张俊仙 梁艳 +4 位作者 刘银萍 阳幼荣 王杰 王兰 吴雪琼 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第8期724-726,共3页
目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核... 目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核病患者的痰液标本,通过免疫磁珠分离技术捕获、富集吸附结核分枝杆菌后用改良罗氏培养基培养,并与传统改良罗氏(L-J)培养法和痰涂片抗酸染色法作比较。结果 71例结核病患者痰涂片抗酸染色检查阳性26例,阳性率36.6%;传统改良L-J培养阳性34例,阳性率47.9%;免疫磁珠分离技术捕获、富集结核分枝杆菌后进行改良L-J培养阳性48例,阳性率67.6%。三者阳性率差异有统计学意义(P<0.05),改良L-J培养和痰涂片检查阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用免疫磁珠分离技术捕获、富集痰液中的结核分枝杆菌后进行培养,可显著提高痰培养的阳性率,该方法可用于结核病的快速诊断。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 免疫磁珠分离技术 培养
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在cDNA文库构建中探究癌症病人血浆外泌体miRNA的特异性扩增 被引量:3
20
作者 王娜 何飞 +5 位作者 郁宏伟 何栾樱 熊国良 卢建东 喻长远 王诗卉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2213-2223,共11页
血浆外泌体微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)与癌症的发生、诊断和治疗密切相关,但其分子机制尚不明晰。本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案。在酶切法中,采用核酸外切酶T (exonuclease T, EX... 血浆外泌体微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)与癌症的发生、诊断和治疗密切相关,但其分子机制尚不明晰。本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案。在酶切法中,采用核酸外切酶T (exonuclease T, EXOT)和phi29 DNA聚合酶降解引物;在磁珠法中,利用DNA结合磁珠分离模板和引物。随后,采取琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测磁珠分离情况,运用RT-qPCR检测癌症病人血浆外泌体miRNA和不同连接物的含量变化。结果显示,非特异性扩增来源于miRNA的连接物USR5SR;核酸外切酶T (EXOT)和phi29 DNA聚合酶虽可降解USR5SR,但模板链也会发生降解;磁珠分离法中以9%PEG沉淀引物片段、15%PEG沉淀模板链效果最佳。综上所述,磁珠分离法能够高效解决cDNA文库构建中的非特异性扩增,从而实现293T细胞和癌症病人血浆外泌体miRNA cDNA文库的成功构建。 展开更多
关键词 MICRORNAS CDNA文库 磁珠分离 非特异性扩增
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