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抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性 被引量：66
1
作者 秦爱建 崔治中 +1 位作者 LEE LUCY FADLY ALY 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期556-562,共7页
:J亚群禽白血病病毒 (ALV -J)是一种主要感染肉用型鸡的反转录病毒。本研究用表达ALV -J囊膜蛋白基因产物的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠 ,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞NS1进行融合 ,获得了 4株特异性抗ALV -J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明... :J亚群禽白血病病毒 (ALV -J)是一种主要感染肉用型鸡的反转录病毒。本研究用表达ALV -J囊膜蛋白基因产物的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠 ,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞NS1进行融合 ,获得了 4株特异性抗ALV -J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明 ,3株单克隆抗体仅与所试验的ALV -J毒株反应 ,而不能与ALV的A、B、C、D和E亚群的毒株反应。有趣的是 ,有一株单克隆抗体可以与所有试验的外源性ALV毒株反应 ,但不与内源性的E亚群反应。WesternBlot和免疫沉淀试验结果表明 ,单克隆抗体识别的ALV -J囊膜糖蛋白的分子量为 90 - 94kD ,识别未糖基化的囊膜蛋白分子量约为 5 3kD。用这些单克隆抗体能检测出ALV -J病毒感染鸡胚成纤维细胞中的病毒抗原。这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 囊膜蛋白 单克隆抗体 囊膜糖蛋白
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J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果 被引量：22
2
作者 秦爱建 刘岳龙 +1 位作者 周绮雯 黄维嘉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期214-216,共3页
应用特异性抗J亚群禽白血病病毒 (ALV_J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV_J抗原和抗体的方法。结果表明 ,在ALV_JADOL_Hcl感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) 2 4小时后 ,可以用 1FA检测出阳性细胞 ,感染 72小时后 ,可以检测出最小病毒感... 应用特异性抗J亚群禽白血病病毒 (ALV_J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV_J抗原和抗体的方法。结果表明 ,在ALV_JADOL_Hcl感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) 2 4小时后 ,可以用 1FA检测出阳性细胞 ,感染 72小时后 ,可以检测出最小病毒感染量为≥ 1.2 5TCID50 /孔。对人工感染ALV_J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明 ,免疫荧光法可以检测出组织中的ALV_J抗原 ,表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817_env感染的Sf9细胞作抗原 ,可以检测出鸡血清中抗ALV_J的特异性抗体。该方法在ALV_J的控制中必将产生重要作用。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 单克隆抗体 免疫荧光试验
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贵州省禽白血病病毒J亚群感染的血清学检测与PCR鉴定 被引量：20
3
作者 岳筠 罗明星 +3 位作者 史开志 程振涛 周碧君 李永明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期516-521,共6页
采用禽白血病J亚群抗体检测试剂盒对8个鸡场的血清样本进行了检测,并对出现肿瘤病变的病死鸡进行了病理组织学检查;同时采集16份禽白血病病毒J亚群(ALV-J)抗体阳性鸡的血液或肝组织,提取DNA样本进行PCR扩增,并测序分析。结果显示,4个肉... 采用禽白血病J亚群抗体检测试剂盒对8个鸡场的血清样本进行了检测,并对出现肿瘤病变的病死鸡进行了病理组织学检查;同时采集16份禽白血病病毒J亚群(ALV-J)抗体阳性鸡的血液或肝组织,提取DNA样本进行PCR扩增,并测序分析。结果显示,4个肉种鸡场的ALV-J抗体阳性率平均为16.52%(3.33%～30.0%),而4个蛋种鸡场的ALV-J抗体阳性率均为0。病理组织学观察可见,在肝、肾、脾组织中出现大量增生的、含嗜酸性颗粒的髓细胞样瘤细胞。PCR检测发现,有14份样本扩增出ALV-J亚群特异性的病原核酸片段(545 bp),检出率达87.5%,其中在3份肝样本中同时扩增出ALV-A亚群特异性的病原核酸片段(691 bp);而ALV-J抗体阴性鸡、淋巴细胞性白血病和血管瘤型白血病的20份样本均未扩增出545 bp片段。扩增出的545 bp片段与ALV-J亚群毒株HPRS-103和ADOL-HcL的相应核苷酸序列的同源性分别达96.2%～96.8%和95.5%～96.8%。结果证实,贵州省鸡群中确实存在ALV-J亚群感染和骨髓细胞瘤病,且出现A亚群、J亚群混合感染的情况。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 血清学检测 病理组织学 聚合酶链式反应 肉鸡
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PCR/RFLP鉴别禽白血病病毒 被引量：13
4
作者 刘公平 赵振芬 刘福安 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期243-245,共3页
用 PCR方法从禽白血病病毒 ( avian leukosis virus,ALV)亚群毒株 RAV-1、RAV-2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞 ( CEF)分别扩增出 1 .2 kb基因片段。 RAV-1囊膜基因可被 Bgl 分为 2条相近的 60 0bp片段 ,RAV-2囊膜基因被 Bam H 分为 ... 用 PCR方法从禽白血病病毒 ( avian leukosis virus,ALV)亚群毒株 RAV-1、RAV-2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞 ( CEF)分别扩增出 1 .2 kb基因片段。 RAV-1囊膜基因可被 Bgl 分为 2条相近的 60 0bp片段 ,RAV-2囊膜基因被 Bam H 分为 2条约 60 0 bp片段 ,对照组基因片段 (内源性病毒 )不被 Bgl 和Bam H 切割。结果显示 ,ALV囊膜基因的 PCR/RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的 ALV毒株。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 囊膜基因 PCR/RFLP
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禽白血病病毒研究的过去、现在和将来 被引量：20
5
作者 崔治中 《生命科学》 CSCD 2012年第4期305-309,共5页
简要介绍了鸡的重要的肿瘤性病毒禽白血病病毒(ALV)研究的历史及其在现代分子生物学研究进展中的作用。对近10多年来,ALV在国内外鸡群中,特别是我国鸡群中的流行动态及相关研究做了综述。在此基础上,对ALV及其相关肿瘤方面有待进一步深... 简要介绍了鸡的重要的肿瘤性病毒禽白血病病毒(ALV)研究的历史及其在现代分子生物学研究进展中的作用。对近10多年来,ALV在国内外鸡群中,特别是我国鸡群中的流行动态及相关研究做了综述。在此基础上,对ALV及其相关肿瘤方面有待进一步深入研究的目标和内容提出了展望。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 肿瘤 病理发生
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禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定 被引量：11
6
作者 刘公平 赵振芬 刘福安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期17-19,共3页
用PCR从禽白血病病毒 (AvianLeukosisVirus ,ALV)RAV_1,RAV_2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞 (CEF)分别扩增出 1.2kb囊膜基因片段。分别将上述PCR产物的KpnⅠ /SaⅡ酶切片段克隆到质粒pGEM_3zf(+ )中得到 3个重组子即pGEM_3zf_RAV_1en... 用PCR从禽白血病病毒 (AvianLeukosisVirus ,ALV)RAV_1,RAV_2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞 (CEF)分别扩增出 1.2kb囊膜基因片段。分别将上述PCR产物的KpnⅠ /SaⅡ酶切片段克隆到质粒pGEM_3zf(+ )中得到 3个重组子即pGEM_3zf_RAV_1env、pGEM_3zf_RAV_2env和pGEM_3zf_Eenv。酶切分析和序列测定结果表明克隆的PCR片段分别来自ALVRAV_1,RAV_2和内源性E亚群病毒 。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 囊膜基因 克隆 gp85片段
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可视化的RT-LAMP方法检测禽白血病病毒 被引量：13
7
作者 刘业兵 张磊 +3 位作者 孙跃辉 毛娅卿 李俊平 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-156,共7页
本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异... 本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异性和敏感性,并对加入SYBR GreenⅠ肉眼判定与仪器监测结果进行比对。结果表明:建立的RT-LAMP方法在63℃水浴中36min可对ALV核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼判断结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有很强特异性,对其它相关鸡病病原检测结果均为阴性;其检出限量为14.2pg.μL-1,显示出很高的敏感性;用建立的LAMP方法对24个样品进行检测,结果表明LAMP法与其原检测结果基本一致;本研究建立了可对ALV进行快速检测并可肉眼判定结果的可视化RT-LAMP方法,其操作简便、无需昂贵设备,适用于ALV的快速检测。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) 检测
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地方鸡种禽白血病病毒感染动态及检测方法比较 被引量：13
8
作者 俞燕 朱鸿媛 +5 位作者 高明燕 范建华 龚建森 刘学贤 徐步 崔治中 《中国家禽》 北大核心 2014年第8期23-26,共4页
为了解我国地方鸡种禽白血病病毒自然感染动态,掌握其育雏及育成期带毒、排毒规律和检测敏感期,试验应用ELISA试剂盒检测泄殖腔拭子p27抗原和血浆病毒分离的方法,对来自保种群的1日龄胎粪p27抗原检测为阳性的绿壳蛋鸡,与同栏饲养在隔离... 为了解我国地方鸡种禽白血病病毒自然感染动态,掌握其育雏及育成期带毒、排毒规律和检测敏感期,试验应用ELISA试剂盒检测泄殖腔拭子p27抗原和血浆病毒分离的方法,对来自保种群的1日龄胎粪p27抗原检测为阳性的绿壳蛋鸡,与同栏饲养在隔离环境中的阴性全同胞,分别于1、3、5、7、9、11周龄进行采样跟踪检测。结果显示,该鸡群检测期内全程带毒、排毒。其中,泄殖腔拭子p27抗原检出率在5周龄达到最高峰,为67.7%;而血浆病毒分离对全群检出最高峰为9周龄,达25.8%,对公鸡和母鸡检出最高峰分别为11和9周龄,净化过程中可以此作为检测敏感期;各检测时间点,泄殖腔拭子p27抗原阳性率普遍高于血浆病毒分离率,二者符合率最高为65.0%,表明对我国地方鸡种实施禽白血病净化,泄殖腔拭子p27抗原检测不能完全取代病毒分离检测,多种方法联合运用意义重大。试验结果为快速、有效开展地方鸡种外源性禽白血病的检测与净化提供了可靠依据。 展开更多
关键词 地方鸡种 禽白血病病毒 感染动态 净化
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禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白env基因的克隆和表达 被引量：9
9
作者 秦爱建 崔冶中 +1 位作者 Lucy Lee Aly Fadly 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期54-59,共6页
禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 ... 禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 7kb。将克隆出的env基因与杆状病毒pBlue Bac4表达质粒DNA连接 ,构建成转移性载体 pBac4817env ,通过与Bac N Blue杆状病毒DNA共转染 ,获得了重组病毒rBac4817env 2。该重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,能高效表达env基因产物。免疫荧光分析结果证明 ,单克隆抗体G2或多价兔抗envgp37血清能识别Sf9细胞中重组env基因表达的特异性抗原 ;Westernblotting分析结果表明 ,表达的重组基因产物的分子量大小约为 90kD～ 94kD。用这些重组基因产物免疫鸡可以诱导鸡产生出高滴度的抗ALV J特异性抗体。这一结果提示 ,这种杆状病毒表达的重组基因产物有助于ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 ENV基因 克隆 表达
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不同品种禽类ALV和REV感染情况调查 被引量：11
10
作者 彭昊 吴元俊 +5 位作者 秦丽莉 石梦霞 毕玉彧 言天久 宋丽丽 韦平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1989-1993,共5页
为了解中国地方特有鸡种及其他禽类中ALV、REV的自然感染状态，通过采集6种特有的家养禽类（包括六画山鸡、大麻鸭、小麻鸭、右江鹅、凌云乌鸡、隆林雪花鸡）的血清及肛拭子各593份，利用禽白血病病毒P27抗原检测试剂盒、禽白血病病毒A... 为了解中国地方特有鸡种及其他禽类中ALV、REV的自然感染状态，通过采集6种特有的家养禽类（包括六画山鸡、大麻鸭、小麻鸭、右江鹅、凌云乌鸡、隆林雪花鸡）的血清及肛拭子各593份，利用禽白血病病毒P27抗原检测试剂盒、禽白血病病毒A／B亚群和J亚群抗体检测试剂盒、禽网状内皮组织增生症病毒抗体检测试剂盒分别进行检测。结果发现，不同品种禽类的P27抗原的检出率差异较大，属于水禽的鸭、鹅均未检出，而六画山鸡和两个地方品种鸡呈现15．4％～43．2％的阳性率；与P27抗原检出情况类似，鸭、鹅禽白血病A／B亚型、J亚型的抗体水平均相对较低，而各个地方品种的鸡群则阳性率相对较高（7．7％～71．6％）。调查还显示，一些种群同时存在着AI，V的P27抗原和抗体以及J亚型与A／B的多重感染，一些种群同时存在着ALV与REV共感染的情况，特别是雪花鸡群里甚至存在P27抗原、ALV-A／B抗体和REV抗体同时呈阳性的情况（9．47％）。通过此次流行病学调查，首次较为详尽地报道了中国地方特有品种鸡及家养非鸡禽类的ALV几种亚型、REV自然感染状态特别是混合感染情况，证实中国即使是一些纯地方品系的家禽也存在不同程度的ALV、REV感染。结果将有助于进一步明确禽白血病防控工作的重要性及紧迫性，为下一步的净化工作提供参考。 展开更多
关键词 禽类 禽白血病病毒 禽网状内皮细胞增生症病毒 感染 调查
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我国禽白血病病毒生物学特点及其控制 被引量：11
11
作者 蔡丽娅 秦爱建 《中国兽药杂志》 2009年第11期46-48,共3页
综述了我国流行的禽白血病病毒(ALV),总结了J亚群禽白血病病毒的流行病学、临床症状、组织病理学和病毒生物学特性,并阐述了ALV-J常用的分离鉴定方法,提出了控制和根除ALV的方法。
关键词 禽白血病病毒 生物学特性 控制
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抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条用于禽白血病病毒检测时的比较 被引量：12
12
作者 崔贺 孟凡峰 +2 位作者 常爽 赵鹏 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期453-457,共5页
为比较不同禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALV）抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度,本研究将A、B、J 3种不同ALV亚群分别以50,100,500TCID503种剂量接种培养于DF1细胞上,接种后2-8d,每天收取上清,每份上清用3种不同的抗... 为比较不同禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALV）抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度,本研究将A、B、J 3种不同ALV亚群分别以50,100,500TCID503种剂量接种培养于DF1细胞上,接种后2-8d,每天收取上清,每份上清用3种不同的抗原ELISA检测试剂盒（A、B、C）和2种胶体金试纸条（D、E）同时检测。结果显示,3种亚群3种剂量分别应用A、B、C 3种ELISA检测试剂盒,灵敏度基本一致,但在针对3种亚群的个别剂量时B试剂盒灵敏度略高于A和C;2种胶体金试纸条检测结果完全一致,但其灵敏度均比ELISA试剂盒低,检出时间延后1-2d。同时应用ELISA试剂盒A、B和胶体金试纸条D、E对60枚种蛋蛋清进行了检测,结果显示胶体金试纸条检出率远低于ELISA试剂盒检出率,在某些应用方面还无法完全替代ELISA检测试剂盒。本研究为广大种鸡场开展禽白血病净化选择灵敏度高、操作简便的检测方法及其适用范围提供了借鉴。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 酶联免疫吸附试验 胶体金试纸条
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A亚群禽白血病病毒QC6281株的分离与gp85基因序列分析 被引量：11
13
作者 乔彦华 王永强 +2 位作者 庞平 金铮 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第12期9-12,共4页
本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中... 本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中,扩增的env基因片段大小为1 239 bp,其中包括完整的gp 85基因,将gp 85基因亚克隆到pMD19-T-si mple载体中并测序,gp 85基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸。将env基因片段和推导的氨基酸序列与GenBank中9株ALV的env基因相应序列做同源性分析并制作进化树图谱。发现QC6281与已发表的A亚群禽白血病病毒株该区域核苷酸同源性在83.8%～98%,氨基酸同源性在86.9%～98.5%。其中与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)同源性最高,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98.5%;且与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病性研究打下基础。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 GP85基因 ENV基因 序列比较
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禽白血病病毒致病分子机制的研究进展 被引量：12
14
作者 邹敏妮 范颖 +3 位作者 张泽颖 贺健 周丽华 雷红宇 《中国家禽》 北大核心 2020年第8期88-92,共5页
禽白血病(Avian leukosis,AL)是一类由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类传染病。当机体感染ALV后,病毒侵入机体并在体内持续作用,从而诱导细胞损伤、肿瘤性病变形成和免疫抑制等。文章从ALV的感染复制、致瘤机制、免... 禽白血病(Avian leukosis,AL)是一类由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类传染病。当机体感染ALV后,病毒侵入机体并在体内持续作用,从而诱导细胞损伤、肿瘤性病变形成和免疫抑制等。文章从ALV的感染复制、致瘤机制、免疫抑制机制及相关信号通路等方面对其致病分子机制进行了初步综述,为AL的进一步研究提供参考。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 致病机制 分子机制
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地方特色蛋鸡配套系亲本群中不同亚群禽白血病病毒的混合感染 被引量：11
15
作者 沈海玉 窦新红 许明 《中国家禽》 北大核心 2018年第16期25-28,共4页
采用ELISA、病毒分离和多聚酶链式反应(PCR)方法对江苏某地方特色蛋鸡亲本群的禽白血病病毒(ALV)p27抗原、ALV-A/B和ALV-J抗体以及病原核酸进行了检测,结果显示该配套系母本群泄殖腔拭子p27抗原阳性率为40.6%,ALV-A/B抗体阳性率为3.8%;... 采用ELISA、病毒分离和多聚酶链式反应(PCR)方法对江苏某地方特色蛋鸡亲本群的禽白血病病毒(ALV)p27抗原、ALV-A/B和ALV-J抗体以及病原核酸进行了检测,结果显示该配套系母本群泄殖腔拭子p27抗原阳性率为40.6%,ALV-A/B抗体阳性率为3.8%;父本群泄殖腔p27抗原阳性率为24.4%,ALV-J抗体阳性率为19.4%;细胞培养物IFA检测显示父本分离株JS12JD03能与J亚群特异单克隆抗体Je-9反应,在荧光显微镜下产生绿色荧光,而母本分离株JS12JD01和JS12JD02则无;gp85氨基酸序列同源性分析显示母本鸡群分离株JS12JD01属于A亚群、JS12JD02属于B亚群,父本鸡群分离株JS12JD03属于J亚群ALV,提示了该地方特色蛋鸡亲本群存在A、B、J亚群ALV的混合感染。 展开更多
关键词 地方特色蛋鸡 亲本群 禽白血病病毒 混合感染
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荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用 被引量：11
16
作者 李佳桃 崔宝玉 +2 位作者 岳华 李明义 汤承 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第9期25-28,共4页
gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸... gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍。组内CV为0.28%～1.45%;组间CV为2.13%～3.84%;对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151)。随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8～98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,鸡群的阳性率为14/14。同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 GAG基因 实时荧光定量RT-PCR
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禽白血病病毒斑点杂交检测方法的建立 被引量：8
17
作者 周刚 牛成明 +1 位作者 司昌德 韩凌霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期53-55,70,共4页
为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样... 为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样品和18枚鸡胚进行检测,结果表明所有样品均为阳性,而且与PCR检测结果的符合率达到100%。该方法具有良好的特异性和敏感性,适应于ALV临床大规模检测。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 杂交检测 斑点 RT-PCR技术 地高辛标记探针 PCR产物 ALV 抗原基因
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一株新亚群禽白血病病毒全基因组序列分析 被引量：11
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作者 李久庆 刘强 +4 位作者 郭雷 许传田 崔宁 李冰 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1718-1723,共6页
为了解外源性禽白血病病毒(ALV)在山东省部分地区肉鸡中的流行状况,采集无菌抗凝血分离血浆接种DF-1细胞、ELISA p27抗原检测以及DNA提取进行PCR扩增等方法,从山东省某地区大型养殖场不同个体养殖场出栏肉鸡群中分离鉴定出1株ALV,命名为... 为了解外源性禽白血病病毒(ALV)在山东省部分地区肉鸡中的流行状况,采集无菌抗凝血分离血浆接种DF-1细胞、ELISA p27抗原检测以及DNA提取进行PCR扩增等方法,从山东省某地区大型养殖场不同个体养殖场出栏肉鸡群中分离鉴定出1株ALV,命名为FC1505。分析其囊膜糖蛋白gp85氨基酸序列与近年来从地方品种鸡中疑似新亚群ALV-K分离株的相似性最高,相似性均在95%以上,而与其他已知亚群ALV的相似性均低于90%。为了进一步分析该分离株分子特性,对其进行全基因组测序,并与已知亚群ALV分离株序列进行比较。结果表明,FC1505分离株整个基因组中gag、pol和gp37基因相对保守,与ALV参考毒株序列相似性都在90%以上,但均与疑似K亚群的ALV分离株相似性最高;全基因组序列分析进一步说明FC1505属于ALV-K。本研究继我国江苏省和华南地区K亚群ALV报道后,首次从山东地区肉鸡中鉴定到一株ALV-K并完成其全基因组序列分析。 展开更多
关键词 商品肉鸡 禽白血病病毒 分离鉴定 全基因组序列分析
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禽呼肠孤病毒与禽白血病病毒双重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：10
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作者 马超英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第2期53-56,共4页
根椐GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)、禽白血病病毒(ALV)基因序列,设计2对引物,在建立鉴别各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立2种病毒的双重RT-PCR。对同一样品中的ARV、ALV核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时... 根椐GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)、禽白血病病毒(ALV)基因序列,设计2对引物,在建立鉴别各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立2种病毒的双重RT-PCR。对同一样品中的ARV、ALV核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增ARV 485bp、ALV 673bp的特异性片段,而对其他5种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR技术能检出10pg的ALV和10pg的ARV模板。用31份临床病料对本研究双重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这2种病毒的同时检测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 双重聚合酶链反应 禽呼肠孤病毒 禽白血病病毒
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应用PCR/RFLP技术对广西禽白血病病毒的检测与分型研究 被引量：8
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作者 张爱玲 韦平 +2 位作者 李斌 李康然 王桂军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期152-154,共3页
对2000～2003年间从广西的南宁、玉林、桂林、钦州、柳州、梧州等地采集的有肿瘤/可疑肿瘤的250份鸡病例进行肿瘤病的检测。结果发现,外源性禽白血病阳性的有32份,阳性率为12.8%。其中,同时为马立克氏病阳性的有30份,两者共感染率高达93... 对2000～2003年间从广西的南宁、玉林、桂林、钦州、柳州、梧州等地采集的有肿瘤/可疑肿瘤的250份鸡病例进行肿瘤病的检测。结果发现,外源性禽白血病阳性的有32份,阳性率为12.8%。其中,同时为马立克氏病阳性的有30份,两者共感染率高达93.75%(30/32);根据禽白血病病毒囊膜糖蛋白gp85基因的限制性片段长度多态性分析,对其中20份外源性禽白血病病毒进行分型鉴定,结果证实全部属于A亚群。 展开更多
关键词 肿瘤病 禽白血病病毒 马立克氏病病毒 囊膜糖蛋基因gp85 PCR和RFLP技术 亚群分型
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