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禽流感病毒分型基因芯片的研制 被引量：27
1
作者 韩雪清 林祥梅 +5 位作者 侯义宏 吴绍强 刘建 梅琳 贾广乐 杨泽晓 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1241-1249,共9页
【目的】禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义。本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法。【方法】根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型... 【目的】禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义。本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法。【方法】根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型和9个NA亚型)的基因序列,设计合成了25对特异性引物和1对通用引物,然后以各亚型病毒的参考株RNA作为模板,建立扩增不同亚型的多重RT-PCR方法。参考各亚型病毒靶cDNAs区域的保守序列设计了52条亚型特异的探针,进而利用扩增的各亚型病毒的靶cDNAs对其特异性进行评价。在此基础上,将设计好的探针点制到处理好的玻片上,制备了禽流感病毒分型鉴定基因芯片,结合所建立的扩增不同亚型的多重RT-PCR方法,开发了禽流感病毒亚型鉴定基因芯片试剂。利用收集自49个地区的2653份标本对其特异性和敏感性进行了初步评价。【结果】用于评价的各亚型参考毒株均出现良好的特异性杂交信号,检测的敏感度可达2.47PFU/mL或2.5ng靶DNA片段,而且与禽类常见的IBV、NDV等6种病毒均无交叉反应。【结论】证明该病毒分型基因芯片具有良好的特异性、敏感性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 分型 基因芯片 杂交 检测
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2014—2016年华东地区某市活禽市场禽流感流行病学调查与分析 被引量：22
2
作者 蒋文明 王艳 +6 位作者 李金平 侯广宇 彭程 刘朔 王素春 黄保续 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第1期14-18,共5页
为了解华东地区某市活禽市场中禽流感病毒的污染状况,2014—2016年对该市活禽市场的家禽进行了禽流感流行病学调查。结果显示:该市活禽市场禽流感病毒污染面较广,94.12%的市场存在禽流感病毒污染;H9N2亚型病毒感染率较高,样品总体阳性率... 为了解华东地区某市活禽市场中禽流感病毒的污染状况,2014—2016年对该市活禽市场的家禽进行了禽流感流行病学调查。结果显示:该市活禽市场禽流感病毒污染面较广,94.12%的市场存在禽流感病毒污染;H9N2亚型病毒感染率较高,样品总体阳性率为22.66%,场点总阳性率为94.12%;H7N9亚型病毒感染率经历了一个升降过程,2015年上半年达到高峰,之后显著降低;农贸市场中的H7N9亚型病毒分离率显著高于批发市场。本次调查未在活禽市场中检出H5亚型高致病性禽流感病毒。这些数据为深入了解活禽市场中禽流感病毒的污染状况和该病防控措施的制定提供了技术支持。 展开更多
关键词 活禽市场 禽流感病毒 H7N9 H9N2
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2011-2017年陕西省外环境中禽流感病毒污染情况分析 被引量：20
3
作者 史伟 张蕾 +6 位作者 李慎 许晶 马萍 徐艺 董建华 董丽芳 余鹏博 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期952-956,共5页
目的了解陕西省外环境禽流感病毒污染状况,为陕西省人感染禽流感疫情防控、预测和预警提供依据。方法在陕西省选取城乡活禽市场、家禽规模养殖场(户)、家禽屠宰加工厂等不同类型监测场所,采用PCR法对外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,... 目的了解陕西省外环境禽流感病毒污染状况,为陕西省人感染禽流感疫情防控、预测和预警提供依据。方法在陕西省选取城乡活禽市场、家禽规模养殖场(户)、家禽屠宰加工厂等不同类型监测场所,采用PCR法对外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,多组间率的比较采用χ2检验。结果 2011年1月至2017年12月,共采集外环境标本6 426份,检出A型禽流感病毒阳性率为7.61%。其中H9亚型阳性占74.23%,H5亚型阳性占15.34%,H7亚型阳性占3.89%,A型未分型及混合型阳性占5.73%。发现活禽市场禽流感病毒污染为主;宰杀或摆放禽肉案板表面擦拭标本和清洗禽类污水的禽流感病毒阳性率最高。结论陕西省禽类相关环境中存在禽流感病毒,以H9亚型为主,城乡活禽市场和家禽屠宰加工厂受病毒污染较重。 展开更多
关键词 禽流感病毒 外环境 污染
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的克隆及其DNA疫苗的动物免疫试验 被引量：15
4
作者 何宏轩 秦曦明 +4 位作者 张强哲 汤义 刘丽艳 郑昌学 段明星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-166,共4页
血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将H... 血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将HA基因插入pVAX1中 ,构建了真核表达质粒pVAX H9.采用活体电击法免疫 3周龄SPF鸡 1 0只 ,剂量为 5 0 μg/只 ,3周后加强免疫一次 ,5周后以 1 0 0倍鸡胚感染剂量 (EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒 .其间每周检测抗体水平变化 ,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离 .结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为 9log2～ 1 0log2 ,对照组为 2log2～ 4log2 ;免疫组病毒分离数为 0 / 1 0 ,对照组为 1 0 / 1 0 . 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验 被引量：14
5
作者 陈平 陈素娟 +1 位作者 彭大新 刘秀梵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期216-218,共3页
将禽流感病毒血凝素 H9A基因克隆入插入载体 p FG11S中 ,通过酶切鉴定获得了正向转移载体 p FG11SHA;将其与禽痘病毒疫苗株 (w FPV)共转染鸡成纤维细胞 (CEF) ,通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒 r FPV- Ps- HA;以间接免疫荧光法证实 HA... 将禽流感病毒血凝素 H9A基因克隆入插入载体 p FG11S中 ,通过酶切鉴定获得了正向转移载体 p FG11SHA;将其与禽痘病毒疫苗株 (w FPV)共转染鸡成纤维细胞 (CEF) ,通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒 r FPV- Ps- HA;以间接免疫荧光法证实 HA基因得到了表达。将该病毒经颈部皮下免疫 1日龄 SPF鸡 ,免疫后 15 d以 H9亚型禽流感病毒 F株翅静脉攻毒 ,攻毒后第 5天采集泄殖腔棉拭子样品进行病毒分离。将此重组病毒与以痘苗病毒 P7.5启动子表达相同基因的重组病毒 r FPV- P7.5 - HA作比较 ,结果表明 ,r FPV- Ps- HA相对于 r FPV- P7.5 - HA明显抑制了病毒的排出 ;攻毒后第 2、5、7、9、11天分别对 r FPV- Ps- HA、油乳剂灭活苗免疫鸡进行泄殖腔、气管排毒规律的检测 ,发现疫苗组均能很好地抑制排毒 。 展开更多
关键词 表达 H9亚型 禽流感病毒 HA基因 重组鸡痘病毒 免疫效力
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禽流感病毒在野鸟种群中的分布特点 被引量：16
6
作者 王玉龙 华育平 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期128-133,共6页
流感病毒在野生鸟类中分布广泛,特别是野生水禽被认为是流感病毒的天然储库,因此,野生鸟类在禽流感传播过程中具有不容忽视的作用。在总结分析以往有关禽流感病毒的研究文献资料的基础上,对全球各亚型禽流感病毒在野生鸟类中的流行情况... 流感病毒在野生鸟类中分布广泛,特别是野生水禽被认为是流感病毒的天然储库,因此,野生鸟类在禽流感传播过程中具有不容忽视的作用。在总结分析以往有关禽流感病毒的研究文献资料的基础上,对全球各亚型禽流感病毒在野生鸟类中的流行情况、流感病毒在野鸟中的分布特点、野鸭中的流感病毒、候鸟迁徙与流感病毒传播、野鸟禽流感病毒感染的季节性特征和自然环境介质在流感病毒传播中的作用等几个方面情况进行初步的探讨,旨在能够对禽流感病毒在野生鸟类中的生态分布情况、特点规律及其野生鸟类在禽流感传播和流行方面的作用有更深入的了解。 展开更多
关键词 野鸟 禽流感病毒 分布
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RT-PCR快速诊断禽流感 被引量：9
7
作者 王贵华 金梅林 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-70,共4页
目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高。本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录＿聚合酶链反应(RT＿PCR)快速诊断方法,该方... 目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高。本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录＿聚合酶链反应(RT＿PCR)快速诊断方法,该方法快速、灵敏,为RT＿PCR用于禽流感的临床早期确诊和分子流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感 NP基因 RT-PCR A型流感病毒核蛋白 分子流行病学调查 逆转录-聚合酶链反应
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乳胶凝集试验检测H5亚型禽流感病毒血凝素抗体的研究 被引量：12
8
作者 喻正军 金梅林 +2 位作者 徐晓娟 张瑞华 陈焕春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期942-946,共5页
利用原核表达并经过纯化的H5亚型禽流感病毒的血凝素蛋白做为抗原,经碳二亚胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的蛋白量和偶联时间进行合理选择,建立H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白乳胶凝集试验的方法。临床检测H5亚... 利用原核表达并经过纯化的H5亚型禽流感病毒的血凝素蛋白做为抗原,经碳二亚胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的蛋白量和偶联时间进行合理选择,建立H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白乳胶凝集试验的方法。临床检测H5亚型禽流感病毒实验免疫鸡血清126份,同血凝抑制试验相比,其敏感性为87.03%,特异性为88.8%,两者的符合率为87.30%。结果证明建立的方法可用于H5亚型禽流感抗体水平监测和流行病学调查。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素(HA)蛋白 羧化乳胶 乳胶凝集试验(LAT)
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2011-2012年江苏省职业暴露人群禽流感病毒抗体水平及影响因素 被引量：12
9
作者 秦圆方 许可 +4 位作者 祁贤 潘玉宁 李伟 邓斐 朱叶飞 《江苏预防医学》 CAS 2013年第4期6-8,共3页
目的了解2011-2012年江苏省职业暴露人群H5N1高致病性禽流感病毒抗体水平。方法采集职业暴露人群血清样本,分别用湖北株、广东株两种抗原株,采用血清凝集抑制法(HI)测定禽流感H5N1抗体水平,同时对研究对象进行职业暴露情况与方式问卷调... 目的了解2011-2012年江苏省职业暴露人群H5N1高致病性禽流感病毒抗体水平。方法采集职业暴露人群血清样本,分别用湖北株、广东株两种抗原株,采用血清凝集抑制法(HI)测定禽流感H5N1抗体水平,同时对研究对象进行职业暴露情况与方式问卷调查。结果用湖北株抗原检测血清标本679份,H5N1抗体几何平均滴度(GMT)为7.62,95%CI为7.24～8.02;用广东株抗原检测血清标本314份,H5N1抗体GMT为11.00,95%CI为9.92～12.19,两者差异有统计学意义。不同年龄、性别、年份、是否宰杀禽类或接触禽类、是否接种过禽流感疫苗、近一个月是否接触过病死禽,人群GMT差异均无统计学意义;不同监测点、近一个月接触不同种类禽类,人群GMT差异有统计学意义。结论禽流感有经由呼吸道传播的可能性,通风条件差,可能加剧传播。鸭与鹅在江苏禽流感传播过程中的传播媒介作用可能大于鸡与野禽。广东株抗原与江苏职业暴露人群禽流感病毒流行株的特异性抗原更接近。 展开更多
关键词 禽流感病毒 职业暴露人群 血清凝集抑制试验 影响因素 传播媒介
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禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达 被引量：7
10
作者 冉多良 施建忠 孟庆文 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期52-55,共4页
采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷... 采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷贝重组转化子及筛选His+Mut+表型转化子后 ,摇瓶培养 ,10mL/L甲醇诱导表达后 ,经SDS PAGE、Western blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明 ,获得了几株高效表达重组表达株 ,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 巴斯德毕赤酵母 NA基因 分泌表达
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禽流感病毒跨种属感染人的机制研究进展 被引量：10
11
作者 李靖 刘伯华 祝庆余 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期121-124,共4页
禽流感病毒(avian influenza virus,简称AIV)不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障(spec ies barrier)、引起人或其他哺乳动物感染和传播。近年来对人呼吸道抗禽流感病毒感染的非特异屏障机制、禽流感病毒对人感染的机制研究不... 禽流感病毒(avian influenza virus,简称AIV)不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障(spec ies barrier)、引起人或其他哺乳动物感染和传播。近年来对人呼吸道抗禽流感病毒感染的非特异屏障机制、禽流感病毒对人感染的机制研究不断取得新的进展。 展开更多
关键词 禽流感病毒 种属屏障 跨种属感染机制
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禽流感病毒抗原成份免疫活性的分析研究 被引量：6
12
作者 李海燕 于康震 +4 位作者 辛晓光 田国彬 李雁冰 张晶 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期94-97,共4页
用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ对纯化的禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｄｕｃｋ／Ｕｋｒａｉｎｅ／１／６３（Ｈ３Ｎ８）进行分析，该病毒主要有１４种多肽成份。其中１１种成份可被ＡＩＶ多克隆阳性血清特异性识别，分子量... 用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ对纯化的禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｄｕｃｋ／Ｕｋｒａｉｎｅ／１／６３（Ｈ３Ｎ８）进行分析，该病毒主要有１４种多肽成份。其中１１种成份可被ＡＩＶ多克隆阳性血清特异性识别，分子量分别为９５．７９ＫＤａ、７６ＫＤａ、７０．１ＫＤａ、６３．１７ＫＤａ、５８．７３ＫＤａ、５０．６２ＫＤａ、４４．５ＫＤａ、３１．８２ＫＤａ、２９．６７ＫＤａ、２３．６７ＫＤａ、１７．９６ＫＤａ，这些成份相对百分含量之和为 ８６．３３％；另有分子量为 ８４．５３ＫＤａ、１２．５０ＫＤａ和１０．０５ＫＤａ的三种多肽成份不具有抗原性。用０．０５％的ＮＰ－４０处理病毒蛋白作为间接酶联免疫吸附试验（间接－ＥＬＩＳＡ）、斑点－ＥＬＩＳＡ和琼脂凝胶扩散（ＡＧＰ）试验用抗原，能检出禽流感各亚型阳性血清，而与鸡新城疫（ＮＤ）、鸡马立克氏病（ＭＤ）、鸡传染性支气管炎（ＩＢ）、鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）、鸡传染性贫血（ＣＩＡ）、鸡白痢（ＰＤ）、鸡鼻炎（ＩＣ）、鸡腺病毒感染（ＡＤＶ）、鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）、病毒性关节炎（ＶＡ）、禽霍乱（ＦＣ）、鸡传染性喉气管炎（ＩＬＴ）、鸡白血病（ＡＬ）、鸡痘（ＡＰ），鸡慢性呼吸? 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 蛋白分析 抗原性 免疫活性
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禽流感病毒分子生物学检测技术研究进展 被引量：10
13
作者 但晓雅 董英 +1 位作者 邹明强 薛强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期213-216,共4页
禽流感(avian influenza,AI)是A型流感病毒引起的一种禽类传染病,同时也是一种人和动物之间的高度传染性疾病。近年来,禽流感病毒的分子生物学检测技术发展迅速,文章就此进行了综述。
关键词 禽流感病毒(aiv) 分子生物学 检测
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禽流感病毒快速检测方法研究进展 被引量：9
14
作者 陈晨 熊莹喆 +2 位作者 汪赛 肖玲慧 李招发 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期610-616,共7页
禽流感病毒是人类致病性病毒,其变异性强、传播速度快、病亡率高,严重威胁了人民健康和国民经济。目前全球对禽流感疫情防控的前提和关键是早发现、早隔离、早诊断、早控制。因此研发敏感、快速、特异、能进行高通量样品检测的禽流感病... 禽流感病毒是人类致病性病毒,其变异性强、传播速度快、病亡率高,严重威胁了人民健康和国民经济。目前全球对禽流感疫情防控的前提和关键是早发现、早隔离、早诊断、早控制。因此研发敏感、快速、特异、能进行高通量样品检测的禽流感病毒检测技术,使人类能在更短时间内监测、检测禽流感病毒的病原感染情况,对禽流感的防控具有重要意义。本文对禽流感病毒快速检测技术研究进展进行简要介绍。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 快速检测
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共表达H5N1、H7N1亚型AIV HA与鸡IL-18多价重组鸡痘病毒免疫保护性研究 被引量：4
15
作者 王振国 金宁一 +7 位作者 马鸣潇 费东亮 郑敏 尹革芬 贾雷立 金扩世 夏志平 金明兰 《中国病毒学》 CSCD 2005年第6期607-612,共6页
用本实验室构建的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18和rFPV-H5HA,经翼蹼免 疫1日龄SPF鸡和7日龄商品Leghorn蛋鸡,同时以H5亚型AIV全病毒灭活疫苗作为对照。免疫后测定HI抗 体效价、淋巴细胞转化指标、重组疫苗对增重的... 用本实验室构建的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18和rFPV-H5HA,经翼蹼免 疫1日龄SPF鸡和7日龄商品Leghorn蛋鸡,同时以H5亚型AIV全病毒灭活疫苗作为对照。免疫后测定HI抗 体效价、淋巴细胞转化指标、重组疫苗对增重的影响、免疫后的攻毒保护效力、免疫后的抑制排毒情况。免疫后不 同时间分别测定特异性抗体和淋巴细胞刺激指数。试验结果表明,3株重组鸡痘病毒株均能诱导鸡体产生血凝抑 制抗体(HI);共表达鸡IL-18的rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18诱导商品蛋鸡的细胞免疫水 平明显高于非共表达鸡IL-18的rFPV-H5HA。重组鸡痘疫苗免疫SPF和商品蛋鸡后第21d进行攻毒实验,rFPV- H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫攻毒保护率达10／10,rFPV-H5HA免疫攻毒保护率达9／10,与常 规疫苗相当。免疫的商品蛋鸡于攻毒后7d采集泄殖腔棉试子样品,检测排毒情况。结果表明,rFPV-H5HA- IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫组在攻毒后第7d无排毒,其抑制免疫鸡排毒效果优于常规疫苗和单独表达 HA的rFPV-H5HA重组鸡痘病毒。rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫组鸡,在14日龄时的体 重明显高于rFPV-H5HA免疫组和常规疫苗对照免疫组,表明共表达的鸡IL-18能降低鸡痘病毒载体对雏鸡增重 的影响。 展开更多
关键词 禽流感病毒 重组鸡痘病毒疫苗 实验免疫 血凝素 白介素 18
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禽流感病毒流式微球量子点探针免疫诊断新方法 被引量：8
16
作者 王楠 邹明强 +3 位作者 汪明 李锦丰 薛强 张帆 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期764-768,共5页
采用微波法水相中合成羧基化的绿色量子点,通过羧基与禽流感单克隆抗体氨基的共价结合,制备了检测禽流感病毒的探针,并结合流式微球技术,建立了量子点生物探针流式微球免疫检测禽流感病毒的新方法。以聚苯乙烯微球为蛋白质载体,将多克... 采用微波法水相中合成羧基化的绿色量子点,通过羧基与禽流感单克隆抗体氨基的共价结合,制备了检测禽流感病毒的探针,并结合流式微球技术,建立了量子点生物探针流式微球免疫检测禽流感病毒的新方法。以聚苯乙烯微球为蛋白质载体,将多克隆抗体包被到荧光微球上,依次加入待测抗原和量子点生物探针,形成双抗体夹心复合物,用流式细胞仪进行检测。实验结果表明,多抗和单抗的最佳质量浓度分别为92和4 mg/L,检测禽流感病毒比双抗体夹心ELISA灵敏16倍,比FITC标记单抗检测方法灵敏4倍。对阳性尿囊液的检测与ELISA呈现良好的相关性,不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡马力克氏病毒、新城疫病毒等发生交叉反应。 展开更多
关键词 量子点探针 流式微球 禽流感病毒 免疫诊断
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3株H9N2亚型禽流感病毒广西分离株全基因组序列的测定与分析 被引量：9
17
作者 谢芝勋 董建宝 +4 位作者 唐小飞 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期916-922,926,共8页
目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/... 目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/00的全基因序列,并对所得序列进行了比较分析。结果同源性分析及遗传进化分析发现,所分离的3个毒株的各基因与A/Chicken/Guangdong/4/00和A/Chicken/Jiangsu/1/00的相应基因的核苷酸序列有着较高的同源性和较近的亲缘关系,可能起源于同一种系。所分离毒株中每个毒株的8个基因,在遗传进化树上的分支不具有统一性,说明此3个毒株可能为不同基因亚系间发生自然重排的产物。氨基酸序列比较发现,A/Chicken/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/003株AIV的na基因核苷酸序列在开放性阅读框架的187～195位均缺失了ACAGAGATA共9个核苷酸,它们所编码的氨基酸为T、E、I。3个分离株的HA蛋白第226位氨基酸均为Gln,证明它们为人类非易感性的H9N2亚型AIV。结论此3株H9N2亚型流感病毒为基因自然重排的产物,其na基因均存在缺失,且从分子水平上证明它们对人类不具有易感性。 展开更多
关键词 禽流感 H9N2亚型 全基因组 测定与分析
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禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：8
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作者 何莹 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 李孟 谢丽基 邓显文 谢志勤 奉彬 黄娇玲 张艳芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2126-2131,共6页
为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通... 为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 鸡细小病毒(ChPV) 二重PCR 检测
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H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立 被引量：7
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作者 张万坡 程国富 +6 位作者 谷长勤 李德学 宋念华 毕丁仁 胡薛英 胡思顺 胡智斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-373,共3页
根据已知禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)核蛋白(NP)基因序列,选取其中保守区域设计出1对引物,以RT-PCR方法扩增出543bp的NP基因片段,采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后,不同时间取样制备细胞涂片,进... 根据已知禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)核蛋白(NP)基因序列,选取其中保守区域设计出1对引物,以RT-PCR方法扩增出543bp的NP基因片段,采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后,不同时间取样制备细胞涂片,进行原位杂交,研究了禽流感病毒对MDCK细胞的感染,探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性。结果显示,感染24h后,原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA,并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关。研究表明,原位杂交检测禽流感病毒,不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性,为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础。 展开更多
关键词 原位杂交 禽流感病毒 MDCK细胞
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鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用 被引量：6
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作者 何永强 云涛 +2 位作者 梁华丽 林林 华炯钢 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期296-299,共4页
对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483b... 对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。 展开更多
关键词 多重RT—PCR 鸭流感病毒 鸭新城疫病毒 鸭病毒性产蛋下降征侯群
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