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饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答观察 被引量：1
1
作者 刘宇坤 胡杨 +5 位作者 卯升义 许安永 邹迪 熊喆 成文敏 赵红业 《山东医药》 CAS 2020年第18期21-24,共4页
目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-... 目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-A1(自噬阻断)组在EBSS培养液中加入100 nM的Baf-A1,四组均处理8 h后,分别采用实时荧光定量法和Western blotting法检测各组微管相关蛋白轻链3(LC3B)、自噬相关蛋白7(ATG7)和自噬相关蛋白4A(ATG4A)的mRNA及蛋白。结果与对照组比较,EBSS组LC3B、ATG7 mRNA相对表达量升高,ATG4A mRNA相对表达量降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3B mRNA相对表达量升高、ATG7 mRNA相对表达量降低,与Baf-A1组对比,EBSS+Baf-A1组中LC3B mRNA相对表达量增加,ATG7和ATG4A mRNA相对表达量降低。与对照组比较,EBSS组LC3BⅡ/LC3BⅠ升高,ATG4A蛋白表达降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低;与Baf-A1组相比,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低。结论EBSS处理的MDA-MB-231细胞自噬水平升高,细胞自噬体形成增多,在此过程中EBSS可能通过增加ATG7 mRNA的表达量增加细胞自噬水平。 展开更多
关键词 细胞自噬 饥饿 微管相关蛋白轻链3 自噬相关基因ATG7 自噬相关蛋白4A 三阴性乳腺癌
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橡胶树胶孢炭疽菌细胞自噬相关基因CgAtg4的克隆与序列分析 被引量：2
2
作者 翟李刚 林春花 +2 位作者 蔡志英 时涛 黄贵修 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第9期2189-2191,2223,共4页
细胞自噬（Autophagy）有助于植物病原真菌渡过营养饥饿、供氧不足等不良环境,有研究发现其与植物病原真菌的致病性相关。利用橡胶胶孢炭疽菌HBCg01全基因组数据库,采用PCR和RT-PCR克隆细胞自噬相关基因CgAtg4（Genebank登录号：KC73512... 细胞自噬（Autophagy）有助于植物病原真菌渡过营养饥饿、供氧不足等不良环境,有研究发现其与植物病原真菌的致病性相关。利用橡胶胶孢炭疽菌HBCg01全基因组数据库,采用PCR和RT-PCR克隆细胞自噬相关基因CgAtg4（Genebank登录号：KC735125）,并对其序列进行分析,研究细胞自噬在胶孢炭疽菌侵染橡胶树过程中的作用。结果表明,CgAtg4的开放阅读框（ORF）为960 nt,编码319个aa序列,预测含有一个由213个aa组成的高度保守的Peptidase_C54蛋白酶结构域,与另外19种真菌的Atg4氨基酸序列同源性为38%-87%。推测CgAtg4可能与橡胶树胶孢炭疽病菌的产孢能力、分生孢子萌发以及附着胞膨压的形成相关。 展开更多
关键词 橡胶树 胶孢炭疽菌 自噬相关基因 CgAtg4
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miR-144调控Atg4a在巨噬细胞清除结核分枝杆菌中的作用研究 被引量：2
3
作者 彭乐 李萌 席向宇 《预防医学情报杂志》 CAS 2020年第12期1621-1628,共8页
目的研究miR-144调控自噬相关基因4a(autophagy related gene,Atg4a)在巨噬细胞(macrophage)清除结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)中的作用。方法选取单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)作为研究对象,用MTB感染RAW264.7细胞,miR-... 目的研究miR-144调控自噬相关基因4a(autophagy related gene,Atg4a)在巨噬细胞(macrophage)清除结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)中的作用。方法选取单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)作为研究对象,用MTB感染RAW264.7细胞,miR-144抑制剂进行转染。实验为RAW264.7细胞组、MTB+RAW264.7细胞组、miR-144阴性对照组、miR-144抑制剂组。实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法测定各组细胞miR-144表达水平,蛋白印迹(western blotting,WB)法测定转染后Atg4a、Bcl-2、Bax、caspase3、caspase9表达水平,流式细胞仪测定各组细胞凋亡率、1.7LC3B-Ⅱ^+和/或Ag85A^+水平,TargetScan数据库预测miR-144的靶基因并用双荧光素酶实验验证。结果与正常RAW264.7细胞组相比,经MTB感染后,MTB+RAW264.7细胞组miR-144、Bax、caspase3、caspase9表达水平和细胞凋亡率、LC3-ⅡB^+-细胞、Ag85A^+-细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05),Atg4a、Bcl-2表达水平和降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与MTB+RAW264.7细胞组、miR-144阴性对照组相比,miR-144抑制剂组miR-144、Bcl-2表达水平和Ag85A^+-细胞降低,差异有统计学意义(P<0.05),Atg4a、Bax、caspase3、caspase9表达水平和细胞凋亡率、LC3-ⅡB^+-细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示Atg4a是miR-144靶基因,双荧光素酶实验证实Atg4a是miR-144作用靶点。结论miR-144能够靶向调控Atg4a,通过抑制miR-144表达,上调Atg4a蛋白表达,可促进巨噬细胞自噬、清除MTB能力。 展开更多
关键词 miR-144 自噬相关基因4a 巨噬细胞 结核分枝杆菌
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过表达ATG4A对晶状体上皮细胞上皮-间质转化的影响 被引量：2
4
作者 闫楚凡 王静 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期391-395,共5页
目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和West... 目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和Western blotting方法分别检测2组细胞上皮-间质转化水平,并测定2组活性氧(ROS)水平。结果与NC组比较,OE-ATG4A组晶状体上皮细胞上皮-间质转化水平明显升高(P<0.05),但ROS水平无统计学差异(P>0.05),说明ATG4A能够促进上皮-间质转化水平,但不影响ROS水平。结论ATG4A能够促进晶状体上皮细胞中上皮-间质转化。 展开更多
关键词 自噬相关基因4A 晶状体 上皮-间质转化 活性氧
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miR-34a/ATG4B对db/db小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响 被引量：1
5
作者 郝建兵 唐杰 郝丽荣 《医学综述》 CAS 2021年第16期3298-3303,共6页
目的探讨miR-34a/自噬相关基因(ATG)4B对2型糖尿病(db/db)小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响。方法将30只4周龄健康雄性db/db小鼠适应性喂养2周,后采用随机数字表法将其分为5组:模型组(无任何干预)、miR-34a激动剂组(尾静脉注射miR-34... 目的探讨miR-34a/自噬相关基因(ATG)4B对2型糖尿病(db/db)小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响。方法将30只4周龄健康雄性db/db小鼠适应性喂养2周,后采用随机数字表法将其分为5组:模型组(无任何干预)、miR-34a激动剂组(尾静脉注射miR-34a激动剂,首次20 nmol,维持剂量每3天5 nmol)、miR-34a激动剂对照组(尾静脉注射miR-34a激动剂阴性对照物,方法剂量同激动剂)、miR-34a拮抗剂组(尾静脉注射miR-34a拮抗剂,首次200 nmol,维持剂量每3天50 nmol)、miR-34a拮抗剂对照组(尾静脉注射miR-34a拮抗剂阴性对照物,方法剂量同拮抗剂),每组6只;同时选取6只6周龄健康雄性db/m小鼠作为正常对照组(无任何干预)。4周后检测空腹血糖、血脂、尿白蛋白、肾脏组织中ATG4B、自噬标记蛋白[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和p62]和氧化应激水平[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和活性氧类(ROS)]。结果10周龄时,模型组小鼠的体重、空腹血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油水平及尿蛋白/尿肌酐比值以及肾脏miR-34a、p62蛋白、MDA和ROS水平均高于对照组,但ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平低于对照组(P<0.01)。miR-34a激动剂组、miR-34a拮抗剂组与模型组小鼠血糖和糖化血红蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但miR-34a激动剂组尿白蛋白/尿肌酐比值明显高于模型组,而miR-34a拮抗剂组尿白蛋白/尿肌酐比值明显低于模型组(P<0.01)。miR-34a激动剂组小鼠肾脏ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平低于激动剂阴性对照组,而p62、MDA和ROS水平高于激动剂阴性对照组(P<0.01);miR-34a拮抗剂组小鼠肾脏ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平高于拮抗剂阴性对照组,而p62蛋白表达水平低于拮抗剂阴性对照组(P<0.01)。结论miR-34a通过下调糖尿病小鼠肾脏中ATG4B蛋白表达抑制自噬和诱导氧化应激,导致肾脏损伤。 展开更多
关键词 糖尿病肾脏疾病 MIR-34A 自噬相关基因4B 自噬 氧化应激
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自噬相关基因4B在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠动物模型及细胞模型中的表达 被引量：1
6
作者 陈燕春 刘焕彩 +5 位作者 周风华 王巧真 丁昊宇 接琳琳 杜红梅 赵春艳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期520-520,封2,共5页
目的:检测自噬相关基因(Atg) 4B在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠动物模型、神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34(NSC-34)运动神经元细胞模型中的表达变化,探讨Atg4B调节的自噬与ALS发病的关系.方法:通过RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学检测... 目的:检测自噬相关基因(Atg) 4B在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠动物模型、神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34(NSC-34)运动神经元细胞模型中的表达变化,探讨Atg4B调节的自噬与ALS发病的关系.方法:通过RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学检测Atg4B在ALS转基因鼠发病不同时间点脊髓中的表达变化;应用pEGFP-G93A-SOD1和pEGFP-wt-SOD1转染NSC-34细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光显色检测转染后24、48 h和72 h Atg4B在细胞模型中的表达变化.结果:与野生型鼠相比较,ALS鼠脊髓中Atg4B mRNA及蛋白在发病早期变化不明显,发病中期和晚期均下调;与转染pEGFP-wt-SOD1的NSC-34细胞相比,转染pEGFP-G93 A-SOD1的NSC-34细胞在转染后24 h Atg4B mRNA及蛋白无明显变化,转染后48 h和72 h均下调.结论:自噬基因Atg4B表达下调与ALS发病密切相关. 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 自噬 自噬相关基因4B 转基因鼠 神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系-34
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携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定
7
作者 洪甜 晋帅 +7 位作者 张立 李玲 梁迎春 宋烨琼 董倩 刘阳 徐小洁 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2016年第1期73-75,共3页
目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒... 目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用Western印迹检测融合蛋白的表达,用免疫共沉淀检测ATG4B与LC3的相互作用。结果:菌液PCR和重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,免疫共沉淀结果表明表达的ATG4B能与LC3结合。结论:构建了pc DNA3.0-Flag-ATG4B真核表达质粒,表达的ATG4B蛋白对LC3的切割至关重要。 展开更多
关键词 自噬相关基因4B 真核表达 LC3 自噬
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