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日本结缕草ZjHCT基因的克隆及转录自激活检测 被引量:5
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作者 董笛 王焕英 +3 位作者 滕珂 檀鹏辉 晁跃辉 韩烈保 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4617-4622,共6页
莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(shikimate/quinate hydroxycinnamoyl transferase,HCT)是木质素生物合成的关键酶之一,也是不同类型木质素相互转化的调控物质。日本结缕草(Zoysia japonica)是一种应用广泛的暖季型坪草。以日本结缕草... 莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(shikimate/quinate hydroxycinnamoyl transferase,HCT)是木质素生物合成的关键酶之一,也是不同类型木质素相互转化的调控物质。日本结缕草(Zoysia japonica)是一种应用广泛的暖季型坪草。以日本结缕草为材料,利用PCR技术克隆日本结缕草ZjHCT基因完整编码区,结果显示,日本结缕草ZjHCT基因编码区全长1 284 bp,共编码428个氨基酸。生物信息学分析显示,ZjHCT蛋白组件中,随机线圈和α螺旋含量最多,其不具备信号肽,定位在细胞质内的概率最大。利用DNA重组技术,构建pBGKT7-ZjHCT载体并进行Y2H Gold酵母菌株转化及自激活检测,证明ZjHCT在Y2H酵母菌株中不具备自激活功能,可在日本结缕草中进行互作蛋白筛选实验,为深入研究日本结缕草木质素合成及提高日本结缕草草坪草耐践踏性,改善坪用质量提供帮助。 展开更多
关键词 日本结缕草 HCT基因 转录自激活 生物信息学
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日本结缕草ZjNOL基因的克隆及转录自激活检测 被引量:4
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作者 董笛 张宇昕 +6 位作者 刘畅 王焕英 李殷睿智 刘卓成 王梦迪 晁跃辉 韩烈保 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期15-21,共7页
NYC1-like(NOL)编码的短链氧化还原酶是叶绿素b降解的必需酶。对日本结缕草(Zoysia japonica)ZjNOL基因全长克隆结果显示,该基因开放阅读框为981个核苷酸,编码327个氨基酸。生物学分析显示,ZjNOL蛋白与高粱(Sorghum bicolor)中的NOL蛋... NYC1-like(NOL)编码的短链氧化还原酶是叶绿素b降解的必需酶。对日本结缕草(Zoysia japonica)ZjNOL基因全长克隆结果显示,该基因开放阅读框为981个核苷酸,编码327个氨基酸。生物学分析显示,ZjNOL蛋白与高粱(Sorghum bicolor)中的NOL蛋白的亲缘关系最近。利用pGBKT7载体,通过DNA重组技术成功构建pGBKT7-ZjNOL酵母表达载体,通过PEG介导的转化方法,成功导入Y2HGold酵母中,自激活检测显示含有pGBKT7-ZjNOL的Y2HGold酵母细胞能够在SD/-Trp培养基上正常生长,而在SD/-Trp/AbA培养基上不能生长,也不能在含有X-α-Gal培养基显蓝色,证明ZjNOL蛋白没有自激活活性。生物信息学分析及转录自激活检测有助于深入研究ZjNOL基因功能,为延长结缕草绿期,改善结缕草坪用质量奠定基础。 展开更多
关键词 日本结缕草 NOL基因 转录自激活 生物信息学
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AcMNPV e18基因酵母双杂交诱饵载体构建和转录自激活检测 被引量:3
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作者 史瑞丽 周晓伟 黎路林 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第10期2436-2438,2442,共4页
用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受... 用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受态细胞,被转化细胞在涂有X-gal的SD/-Trp营养缺陷型固体培养基上形成白色菌落;在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade固体培养基上均不形成菌落,表明诱饵基因表达产物BD-E18在这两种细胞中都不能激活报告基因转录。pGBKT7-e18转化的Y187细胞在SD/-Trp营养缺陷型液体培养基中的生长速度与空载体转化细胞相同,显示BD-E18对酵母细胞无细胞毒性。结果表明,AcMNPV ODV-E18可能不直接参与对宿主细胞或病毒基因表达的调节,其编码基因可以作为诱饵基因通过筛查病毒宿主cDNA文库识别与其相互作用的蛋白质。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV) ODV-E18 酵母双杂交 自激活 细胞毒性
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日本结缕草ZjTCP4基因的克隆、转录自激活检测及表达模式分析 被引量:1
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作者 杨卓雄 韩烈保 +6 位作者 晁跃辉 董笛 马媛 李舒文 王梦迪 尚骁尧 周玲芳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期834-842,共9页
TCP家族蛋白是植物中一种特有的转录因子,在植物的发育过程中起着重要的作用。本研究从日本结缕草(Zoysia japonica)中克隆ZjTCP4基因(GenBank登录号:MZ540773),该基因完整编码区为2097 bp,编码699个氨基酸。进化树及保守序列分析显示,Z... TCP家族蛋白是植物中一种特有的转录因子,在植物的发育过程中起着重要的作用。本研究从日本结缕草(Zoysia japonica)中克隆ZjTCP4基因(GenBank登录号:MZ540773),该基因完整编码区为2097 bp,编码699个氨基酸。进化树及保守序列分析显示,ZjTCP4蛋白含有TCP家族高度保守的螺旋-环-螺旋的TCP结构域,与玉米(Zea mays)中的ZmTCP4蛋白同源关系最高,且具有相似的保守基序构成,属于TCP转录因子家族中的CIN亚类。酵母自激活检测结果显示,ZjTCP4不具备自激活活性,可进行后续酵母双杂交实验及互做蛋白检测分析。ZjTCP4基因表达模式分析显示,其在结缕草衰老叶片及根系中的表达量较高。对ZjTCP4蛋白的烟草(Nicotiana tabacum)亚细胞定位实验显示,该蛋白定位于细胞质内。本研究为进一步研究日本结缕草ZjTCP4蛋白及TCP转录因子家族提供了科学依据。 展开更多
关键词 日本结缕草 TCP基因 转录自激活 生物信息学
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