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Na^+,K^+-ATPase调节肝再生增强因子促HepG2细胞增殖 被引量：2
1
作者 林莹 佟明华 +2 位作者 汪嵘 孔祥平 梁世中 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第1期1-5,共5页
采用四甲基噻唑盐(M TT)法检验肝再生增强因子(ALR)对H epG 2细胞增殖作用;[3H]-T dR掺入测定细胞DNA合成;采用无机磷比色法测定细胞N a+,K+-ATPase的酶活力。结果表明:ALR通过促进H epG 2细胞DNA合成,使细胞增殖,并存在剂量效应正相关... 采用四甲基噻唑盐(M TT)法检验肝再生增强因子(ALR)对H epG 2细胞增殖作用;[3H]-T dR掺入测定细胞DNA合成;采用无机磷比色法测定细胞N a+,K+-ATPase的酶活力。结果表明:ALR通过促进H epG 2细胞DNA合成,使细胞增殖,并存在剂量效应正相关性(P<0.01);ALR对N a+,K+-ATPase酶活呈剂量时间依赖型影响;奎巴因可以通过抑制细胞N a+,K+-ATPase影响ALR对H epG 2细胞增殖促进作用。因此,N a+,K+-ATPase能参与调节ALR促进H epG 2细胞的增殖。 展开更多
关键词 肝再生增强因子(alr) Na^+ K^+-ATPase 酶活力 增殖
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脐血干细胞移植与肝再生增强因子联合治疗急性肝衰竭的实验研究 被引量：1
2
作者 田佳 张墨阳 +1 位作者 周忠义 谢晓红 《海南医学》 CAS 2016年第19期3105-3108,共4页
目的观察脐血干细胞移植与肝再生增强因子联合治疗急性肝衰竭大鼠的疗效,以期为肝脏组织工程修复提供依据。方法建立肝衰竭大鼠模型40只,按照随机数表法将大鼠随机分为对照组(采用腹腔注射生理盐水)、脐血干细胞移植组(移植组,采用腹腔... 目的观察脐血干细胞移植与肝再生增强因子联合治疗急性肝衰竭大鼠的疗效,以期为肝脏组织工程修复提供依据。方法建立肝衰竭大鼠模型40只,按照随机数表法将大鼠随机分为对照组(采用腹腔注射生理盐水)、脐血干细胞移植组(移植组,采用腹腔移植2×107脐血干细胞)、脐血干细胞移植联合肝再生增强因子组(联合组,采用腹腔移植2×107脐血干细胞联合注射肝再生增强因子50μg·kg-1·d-1)和肝再生增强因子组(增强因子组,采用腹腔注射肝再生增强因子50μg·kg-1·d-1),每组各10只。用DAPI标记肝细胞。大鼠肝衰竭造模成功后,经治疗一个月后分别取四组大鼠的肝组织制作冰冻切片,并于荧光显微镜下观察肝组织中DAPI标记的细胞计数。结果移植组肝脏归巢及定植的干细胞为(12.6±2.0)个细胞/100倍视野,多于增强因子组的(8.1±3.4)个细胞/100倍视野,差异有统计学意义(P<0.05),增强因子组到肝脏归巢及定植的干细胞又多于对照组的(3.1±3.4)个细胞/100倍视野,差异有统计学意义(P<0.05),而联合组肝脏归巢及定植的干细胞为(18.1±3.4)个细胞/100倍视野,多于以上各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同干预手段对脐血干细胞归巢、定植于肝脏有一定影响,联合组的干细胞归巢率优于单行移植组和增强因子组。因此脐血干细胞移植联合肝再生增强因子是一种较为理想的急性肝衰竭治疗手段。 展开更多
关键词 脐血干细胞 肝脏归巢 急性肝衰竭 肝再生增强因子 定植
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肝再生增强因子单克隆抗体的制备与初步鉴定
3
作者 刘瑞 雷鸣 +4 位作者 杨华 楚元奎 杨洋 田盼 廖国玲 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第4期63-65,279,共4页
为了制备重组人肝再生增强因子（rh ALR）单克隆抗体（Mc Ab）,并鉴定其特异性,从而研发一种特异性较好的检测试剂,试验以纯化的rh ALR为抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合建立能稳定分泌抗rh ALR单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗... 为了制备重组人肝再生增强因子（rh ALR）单克隆抗体（Mc Ab）,并鉴定其特异性,从而研发一种特异性较好的检测试剂,试验以纯化的rh ALR为抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合建立能稳定分泌抗rh ALR单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,用免疫荧光法对自行制备的单克隆抗体与购买的商品化多克隆抗体进行比较。结果表明：筛选出的5株稳定分泌抗rh ALR的单克隆抗体酶联免疫吸附方法（ELISA）鉴定其培养上清液和腹水中效价分别为1×10~3、1×10~3、1×10~3、2×10~3、2×10~3和1×10~4、1×10~5、1×10~3、1×10~4、5×10~5。说明与商品化多克隆抗体相比,自行制备的单克隆抗体具有较好的敏感性。 展开更多
关键词 肝再生增强因子(alr) 单克隆抗体(McAbs) 特异性 敏感性 制备与鉴定
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绵羊乳腺特异表达hALR基因载体的构建
4
作者 马玉珍 扈廷茂 +2 位作者 扈会平 陈明杰 苏慧敏 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期653-656,共4页
以绵羊β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)基因5'端0.8kb片段,作为目的基因人肝再生增强因子(Humanaugmenterofliverregeneration,hALR)乳腺特异表达启动子,人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,CMV)启动子为绿色荧光蛋白基因(Enhanc... 以绵羊β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)基因5'端0.8kb片段,作为目的基因人肝再生增强因子(Humanaugmenterofliverregeneration,hALR)乳腺特异表达启动子,人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,CMV)启动子为绿色荧光蛋白基因(EnhancedGreenfluores-cenceprotein,EGFP)的启动子,构建了ALR基因乳腺特异表达而EGFP基因非组织特异性真核表达载体.这将为利用乳腺生物反应器生产人肝再生增强因子转基因动物及转基因早期胚胎鉴定奠定基础. 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因 Β-乳球蛋白基因 肝再生增强因子基因 表达载体 乳腺
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绵羊乳腺特异表达人肝细胞再生增强因子载体的构建及表达
5
作者 马玉珍 张继英 +2 位作者 阿玫 白雁 扈廷茂 《内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版）》 CAS 2005年第2期200-203,共4页
用PCR技术分别从人和绵羊基因组DNA中扩增人肝细胞再生增强因子(Humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因和绵羊β-乳球蛋白(sheepbeta-lactoglobulin,BLG)基因启动区序列,从pEGFP-C1质粒中扩增增强绿色荧光蛋白(EnhancedGreenfluo... 用PCR技术分别从人和绵羊基因组DNA中扩增人肝细胞再生增强因子(Humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因和绵羊β-乳球蛋白(sheepbeta-lactoglobulin,BLG)基因启动区序列,从pEGFP-C1质粒中扩增增强绿色荧光蛋白(EnhancedGreenfluorescenceprotein,EGFP)基因及其表达调控元件.由质粒p7zf(+)构建成ALR基因乳腺特异表达、EGFP基因非组织特异性表达载体.同时体外培养绵羊胎儿成纤维细胞(sheepfetalfibroblastcells,SFFCs),脂质体介导载体DNA转染SFFCs,激光共聚焦显微镜观察和PCR检测转基因细胞,结果表明,增强绿色荧光蛋白基因在SFFCs中表达,转基因细胞中可扩增出BLG、ALR、EGFP基因条带. 展开更多
关键词 乳腺特异表达 增强因子 细胞再生 绵羊 构建 增强绿色荧光蛋白 绿色荧光蛋白基因 EGFP基因 羊β-乳球蛋白 胎儿成纤维细胞 特异性表达载体 转基因细胞 基因组DNA 肝 PCR技术 Green DNA转染 脂质体介导 PCR检测 显微镜观察
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人肝再生增强因子的克隆及表达 被引量：3
6
作者 易学瑞 孔祥平 +5 位作者 佟明华 杨联萍 李茹冰 曾平鲁 万华印 张宜俊 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期197-199,共3页
根据同源克隆的原则，依照大鼠ALRcDNA编码区两端核苷酸序列合成一对引物，以人胎肝细胞mRNA的RT产物为模板扩增出一条380bpcDNA片段，测序结果表明与大鼠ALR有85％同源性，将人ALRcDNA插入PBV220质粒转化E．coliJM109感受态细胞，筛选... 根据同源克隆的原则，依照大鼠ALRcDNA编码区两端核苷酸序列合成一对引物，以人胎肝细胞mRNA的RT产物为模板扩增出一条380bpcDNA片段，测序结果表明与大鼠ALR有85％同源性，将人ALRcDNA插入PBV220质粒转化E．coliJM109感受态细胞，筛选到的阳性克隆经温度诱导后，SDS-PAGE结果表明目的蛋白含量占菌体总蛋白的25％左右。 展开更多
关键词 alr 克隆 胎肝细胞 表达 肝细胞再生
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大鼠肝再生增强因子的基因克隆
7
作者 霍红旗 黄志刚 +3 位作者 王晓梅 邢继英 刘殿武 刘树贤 《中国航天工业医药》 2001年第2期7-10,共4页
目的克隆大鼠肝再生增强因子 (ALR)编码序列 ,并在原核细胞表达。方法按文献报道大鼠肝再生增强因子核苷酸序列合成引物 ,从2周龄大鼠肝组织提取RNA ,利用RT_PCR扩增大鼠肝再生增强因子基因编码区 ;将PCR扩增片断亚克隆到pBV221质粒 ,... 目的克隆大鼠肝再生增强因子 (ALR)编码序列 ,并在原核细胞表达。方法按文献报道大鼠肝再生增强因子核苷酸序列合成引物 ,从2周龄大鼠肝组织提取RNA ,利用RT_PCR扩增大鼠肝再生增强因子基因编码区 ;将PCR扩增片断亚克隆到pBV221质粒 ,构建原核表达重组载体 ,导入到大肠杆菌后热诱导表达目的蛋白。结果从大鼠肝脏的RNA中扩增到长约400bp的ALRcDNA编码区基因 ,序列分析表明与文献报道一致 ;重组克隆经热诱导表达出分子量约15kD大小的蛋白质 ,与预期值一致。结论从2周龄大鼠肝组织中成功克隆肝再生增强因子基因 。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 基因克隆 RT-PCR 蛋白基因 肝损伤修复作用 保肝药
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肝再生增强因子促进HepG2细胞增殖对细胞Na^+,K^+ATP酶的影响(英文)
8
作者 林莹 佟明华 +1 位作者 孔祥平 梁世中 《陕西科技大学学报（自然科学版）》 2006年第2期26-30,共5页
为了研究rhALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+,K+ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rhALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+,K+ATPase的酶活力。结果显示:rhALR能以浓度依赖的... 为了研究rhALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+,K+ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rhALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+,K+ATPase的酶活力。结果显示:rhALR能以浓度依赖的方式促进HepG2的细胞增殖,对细胞Na+,K+ATPase的酶活呈剂量时间依赖型影响;rhALR提高HepG2细胞Na+,K+ATPase的酶活符合MichaelisMenten方程作用机制,Vmax由0.84±0.11μmol·mg-1·min-1上升到1.68±0.07μmol·mg-1·min-1(p<0.01,差异有极显著性),而Km则由23.54±0.12mM变为20.86±0.13mM(p>0.05,差异无显著性),rhALR提高了细胞Na+,K+ATPase的转化效率;Na+,K+ATPase的专一性抑制剂(奎巴因)可以抑制rhALR促进HepG2细胞增殖的作用;ALR能以浓度时间依赖的方式激活细胞的Na+,K+ATPase,ALR引发的细胞增殖与了Na+,K+ATPase的活化有关。该为进一步研究rhALR的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 重组人肝再生增强因子(rh- alr) Na^+ K^+-ATPase 酶活 剂量-时间依赖
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EGFP和ALR融合基因表达载体构建及其在HeLa细胞中的表达
9
作者 马玉珍 石玉涛 +3 位作者 白雁 张继英 阿荣 李玲 《内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版）》 CAS 2006年第3期340-343,共4页
从人血液中提取总DNA,利用PCR技术扩增人肝细胞再生增生因子基因,将其插入表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein gene,EGFP)和人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver reg... 从人血液中提取总DNA,利用PCR技术扩增人肝细胞再生增生因子基因,将其插入表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein gene,EGFP)和人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver regeneration gene,ALR)融合基因表达载体pEGFP/ALR,并将其转染Hela细胞系,用含G 418的DMEM/F12培养液筛选转基因细胞,然后利用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测转基因细胞中ALR基因的存在及其表达,用荧光显微镜检测EGFP基因的表达.结果显示:得到了构建正确的EGFP和ALR融合基因表达载体;在转基因细胞中,PCR扩增得到1.7 Kb的ALR条带,蛋白电泳得到57 KD大小条带,与ALR和EGFP融合蛋白大小相符;荧光显微镜下观察到发绿色荧光的Hela细胞.在转基因细胞中,EGFP和ALR同时存在并表达,绿色荧光蛋白可作为报告基因指示目的基因的表达,从而简化了目的基因繁琐的检测手段. 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 肝细胞再生增强因子 融合基因
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