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禽大肠杆菌耐药标记弱毒菌株O_2(Nor^r,Chl^s)和O_(78)(Chl^r,Nor^s)的培育 被引量：13
1
作者 黄青云 陈金顶 +2 位作者 任涛 罗贤忠 欧守杼 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期89-93,共5页
选择最常见的禽致病性大肠杆菌Ｏ２和Ｏ７８菌株，分别以常用的抗菌药物氟哌酸和氯霉素诱导，培育成遗传性稳定的耐药标记弱毒菌株Ｏ２（Ｎｏｒｒ，Ｃｈｌｓ）和Ｏ７８（Ｃｈｌｒ，Ｎｏｒｓ）。
关键词 家畜 大肠杆菌 耐药菌株 弱毒菌株
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用抗新城疫病毒膜蛋白特异多肽抗体鉴别强毒株和弱毒株 被引量：4
2
作者 王树双 孙书华 吴时友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1995年第3期239-242,共4页
利用ＪｅｆｆＧｏｒｍａｎ建立的用抗新城疫病毒（ＮＤＶ）膜蛋白特异多肽抗体鉴别强弱毒株的方法，对国内的Ⅰ系、Ⅱ系、ＬａＳｏｔａ和两株分离毒进行了毒力分析。结果证明，上述毒株的毒力顺序为：Ⅰ系＞Ⅱ系和ＬａＳｏｔａ＞Ｖ４（... 利用ＪｅｆｆＧｏｒｍａｎ建立的用抗新城疫病毒（ＮＤＶ）膜蛋白特异多肽抗体鉴别强弱毒株的方法，对国内的Ⅰ系、Ⅱ系、ＬａＳｏｔａ和两株分离毒进行了毒力分析。结果证明，上述毒株的毒力顺序为：Ⅰ系＞Ⅱ系和ＬａＳｏｔａ＞Ｖ４（澳大利亚弱毒疫苗株）＞临床分离株（青岛）。其结论为：Ⅰ系毒株与澳大利亚维多利亚分离株（ＡＶ）的Ｆ２蛋白片段有类似的氨基酸序列，属中发型毒株。虽然Ⅱ系和ＬａＳｏｔａ比Ｖ４和临床分离株（青岛）毒力稍强，但认为这４株均为缓发型毒株。该方法敏感、特异，结果精确可靠，不仅可用于临床分离野毒的致病性分析，而且也可用于疫苗株研究中毒力的评价。 展开更多
关键词 新城疫 病毒 膜蛋白 抗多肽抗体 毒株 家禽
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马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析 被引量：13
3
作者 王柳 于力 +3 位作者 张绍杰 仇华吉 王玫 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期1-6,共6页
从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、... 从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、鉴定，获得含有ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ片段的重组质粒ｐＬＴＲ。对该质粒的序列分析发现，在中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ的Ｕ３区含有４个与细胞转录因子结合的位点，其中有３个ＰＵ．１位点和１个ＡＰ－１位点，Ｕ３区还存在１个ＴＡＴＡＴＡＡ启动子序列；Ｒ区长为８１ｂｐ，含有１个帽位点ＧＧ和１个Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列ＡＡＴＡＡＡ；在帽位点下游是１个病毒Ｔａｔ蛋白结合位点，即ＴＡＲ位点；Ｕ５区长为３９ｂｐ。中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ序列与国外发表的其他毒株序列相比，在ＬＴＲ的一些调控部位有变异发生，中国ＥＩＡＶ弱毒株与美国ＥＩＡＶ原型株（Ｗｙｏｍｉｎｇ株）ＬＴＲ区核苷酸序列有１８．７２％的差异。 展开更多
关键词 马传染性贫血 克隆 病毒 弱毒株 序列分析
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猪繁殖呼吸综合征病毒S3毒株的分离及其免疫特性研究 被引量：5
4
作者 祁贤 张婉华 +2 位作者 叶向阳 朱永军 陆鑫芳 《动物医学进展》 CSCD 2002年第4期87-90,共4页
从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电... 从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 55～ 60 nm的病毒粒子 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但抗体检测阳性。命名该分离毒为 PPRSV-S3毒株。在 S3弱毒株分离鉴定的基础上 ,进一步在猪体上对其致病性和免疫力进行研究。S3毒株接种仔猪后 ,仔猪不表现任何症状 ,也不向外排毒。4～ 5周龄的仔猪接种 S3株后可产生坚强的免疫力 ,免疫后 4～ 6个月能抵抗强毒攻击。后备母猪配种前 2～ 3周免疫接种 S3株 ,怀孕 90～95d攻强毒 ,未发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍现象。结果表明 ,S3是一株自然分离的弱毒株 ,且具有良好的安全性和免疫力。 展开更多
关键词 猪 繁殖呼吸综合征病毒 S3毒株 分离 免疫特性
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传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的培育 被引量：3
5
作者 李建荣 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期255-258,共4页
传染性法氏囊病病毒 3个变异野毒株 (JD1、JD2 、NB)和 2个经典血清型Ⅰ毒株 (HZ1、SC)直接在鸡胚成纤维细胞上传代 ,均能不同程度地产生细胞病变效应 (CPE)。将 5个毒株 2 1代细胞毒连续回归鸡体 5代 ,除JD1外 ,其余毒株均能不同程度... 传染性法氏囊病病毒 3个变异野毒株 (JD1、JD2 、NB)和 2个经典血清型Ⅰ毒株 (HZ1、SC)直接在鸡胚成纤维细胞上传代 ,均能不同程度地产生细胞病变效应 (CPE)。将 5个毒株 2 1代细胞毒连续回归鸡体 5代 ,除JD1外 ,其余毒株均能不同程度导致法氏囊病变。HZ14 1、JD135、SC38、JD2 37、NB38代细胞毒在鸡体内回归 5代 ,均未见法氏囊的眼观病变和组织学变化 ,囊指数保持稳定 ,说明HZ1、SC、JD1、JD2 、NB 5个毒株分别经CEF传 41、38、2 1～ 35、37、38代 。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 变异毒株 弱毒株
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家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔抗体的消长规律及保护作用 被引量：8
6
作者 陈启军 刘俊华 《兽医大学学报》 CSCD 1990年第3期243-245,共3页
以家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔12只,然后进行攻虫试验。其中11只被保护,1只发病死亡。以BA-ELISA检测家兔免疫后及攻虫后特异性IgG、IgM的变化,发现免疫后IgG、IgM均于第21d达到峰值;攻虫后IgM于第6d达到峰值,IgG于第9d达到峰值。攻虫后... 以家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔12只,然后进行攻虫试验。其中11只被保护,1只发病死亡。以BA-ELISA检测家兔免疫后及攻虫后特异性IgG、IgM的变化,发现免疫后IgG、IgM均于第21d达到峰值;攻虫后IgM于第6d达到峰值,IgG于第9d达到峰值。攻虫后,随着免疫组家兔体内特异性IgG、IgM的不断上升,其血液内的锥虫也同时被清除。体外中和试验也表明,特异性抗体对锥虫的感染力具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 家畜 伊氏锥虫 家兔 抗体 免疫
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非洲猪瘟病毒细胞传代致弱株研究进展 被引量：8
7
作者 戈胜强 张潇月 +7 位作者 吕艳 王振忠 韩乃君 张永强 钱莺娟 蔡玉梅 吴晓东 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2021年第6期76-81,共6页
目前非洲猪瘟(African swine fever,ASF)仍无疫苗可用,使得该病防控难度较高。早期非洲猪瘟病毒(ASFV)的弱毒株研制主要通过细胞传代方式。经过国外多年研究积累,现已经在多种细胞上获得毒力致弱毒株。细胞传代致弱株是ASF疫苗研究的候... 目前非洲猪瘟(African swine fever,ASF)仍无疫苗可用,使得该病防控难度较高。早期非洲猪瘟病毒(ASFV)的弱毒株研制主要通过细胞传代方式。经过国外多年研究积累,现已经在多种细胞上获得毒力致弱毒株。细胞传代致弱株是ASF疫苗研究的候选方向之一,且对于基因敲除弱毒疫苗研究具有很好的指导借鉴作用。国内目前尚无这方面的调查研究,为此对国际上ASFV细胞传代致弱毒株相关研究进行整理,分析其传代致弱规律,以期为我国ASFV细胞适应株研究及新型疫苗研制提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 细胞传代 弱毒株
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鸡传染性法氏囊病一个自然病例的病原分离及其分子特征分析 被引量：4
8
作者 何秀苗 官丁明 +1 位作者 韦平 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2009年第14期18-22,共5页
设计针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因高变区(vVP2)的引物对湖南永州送检的一群疑似传染性法氏囊病病例的法氏囊组织通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对阳性样品进行病毒分离,同时... 设计针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因高变区(vVP2)的引物对湖南永州送检的一群疑似传染性法氏囊病病例的法氏囊组织通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对阳性样品进行病毒分离,同时对IBDV分离株中的vVP2进行限制性内切酶分析和核苷酸序列测定,分析关键位点的氨基酸特征和同源性,绘制遗传进化树。结果成功分离出了4个IBDV毒株,其中HuN0801、HuN0802和HuN0803的特征性位点的氨基酸为222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I和299S,属于vvIDBV的特征,并与vvIBDV参考株具有较高的同源性;HuN0804的则为222P、249Q、254G、256V、279N、284T、294I和299N,符合弱毒株的特征,与弱毒参考株的同源性较高;4个分离株与常用疫苗株的同源性普遍较低。遗传进化分析表明,3个vvIBDV分离株与vvIBDV参考株和中等偏强毒力株YSLMB同处于一个大的分支,并与欧洲株DV86、湖南株HuN亲缘关系最近;而HuN0804与弱毒株、经典毒株和常用疫苗株同处于一个大分支。研究表明,本病例中存在不同致病型IBDV毒株的混合感染。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 超强毒株 弱毒株 RT-PCR VP2基因高变区 分子特征
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腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒(IBV-D971株)致弱的研究 被引量：3
9
作者 荣骏弓 谷守林 +3 位作者 胡守萍 王成梅 付德霞 曲亚美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期466-469,共4页
将IBV_D971株病毒在SPF鸡胚上连续传至 12 0代 ,培育出了一株毒力明显减弱 ,并且具有良好免疫原性的腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒弱毒株 (IBV_D971株 )。IBV_D971F10 5代毒力明显下降 ,以 10 9.2 5EID50 接种 1日龄SPF鸡 5 / 5无不... 将IBV_D971株病毒在SPF鸡胚上连续传至 12 0代 ,培育出了一株毒力明显减弱 ,并且具有良好免疫原性的腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒弱毒株 (IBV_D971株 )。IBV_D971F10 5代毒力明显下降 ,以 10 9.2 5EID50 接种 1日龄SPF鸡 5 / 5无不良反应。IBV_D971F10 5代毒连续通过 1日龄SPF鸡体 5代 ,未见毒力返强。以 10 3EID50 免疫 1日龄SPF鸡 ,攻毒后 5 / 5保护 ,对照 5 / 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 腺胃病变型 弱毒株 致弱
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猪轮状病毒弱毒苗免疫研究 被引量：5
10
作者 何家惠 丁再棣 侯吉波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第5期439-441,共3页
用猪源轮状病毒弱毒株－Ｎａ８６Ｆ９０制成的疫苗先后免疫母猪２５０头，乳中抗ＲＶ的ＩｇＡ最高滴度为８１９２０，对照组最高滴度仅有１６０；产后１个月，免疫组滴度仍维持在５１２０以上，而对照组仅４０；免疫组仔猪哺乳期轮状病... 用猪源轮状病毒弱毒株－Ｎａ８６Ｆ９０制成的疫苗先后免疫母猪２５０头，乳中抗ＲＶ的ＩｇＡ最高滴度为８１９２０，对照组最高滴度仅有１６０；产后１个月，免疫组滴度仍维持在５１２０以上，而对照组仅４０；免疫组仔猪哺乳期轮状病毒检出率下降３７．２％，断奶仔猪育成率由７５％提高到９０％以上，断奶后窝重由平均１３０～１５０ｋｇ。 展开更多
关键词 猪 轮状病毒 弱毒株 疫苗 免疫
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艾美耳球虫弱毒虫株的返祖性 被引量：4
11
作者 樊生超 姚惠娟 《上海农业学报》 CSCD 1996年第4期63-65,共3页
将柔嫩艾美耳球虫鸡胚及药物适应株（Ｐ２５、Ｐ３０）和巨型艾美耳球虫早熟选育株（Ｐ２２、Ｐ２８），分别连续回鸡６代，测定试验鸡的肠道病变及肠道内容物的卵囊密度。结果显示，试验鸡的肠道平均病变程度（１．０以下）明显低于对... 将柔嫩艾美耳球虫鸡胚及药物适应株（Ｐ２５、Ｐ３０）和巨型艾美耳球虫早熟选育株（Ｐ２２、Ｐ２８），分别连续回鸡６代，测定试验鸡的肠道病变及肠道内容物的卵囊密度。结果显示，试验鸡的肠道平均病变程度（１．０以下）明显低于对照组，而肠道内容物的卵囊密度则基本相似，表明弱毒虫株无返祖现象。 展开更多
关键词 艾美耳球虫 弱毒虫株 返祖性
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鳗弧菌vah1缺失菌株构建及致病性评估 被引量：2
12
作者 胡存洁 车金远 +2 位作者 黄旭雄 罗土炎 鲍宝龙 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期481-490,共10页
通过基因重组技术,敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10^(5)cfu/... 通过基因重组技术,敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10^(5)cfu/mL,相比鳗弧菌野生菌株的半数致死量(3.16±0.80)×10^(5)cfu/mL提高了2.09倍;相比鳗弧菌野生菌株,Δvah1菌株在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺的定殖能力明显下降,对肝胰腺细胞造成溶解和空泡化的破坏程度也相对较小,肝胰腺免疫相关基因CAT、SOD、PO、LZM和ACP的表达水平降低。这些研究结果表明,vah1缺失影响鳗弧菌对凡纳滨对虾的致病能力,Δvah1菌株为后续鳗弧菌减毒疫苗或抗鳗弧菌免疫增强剂的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 鳗弧菌 vah1基因 致病性 凡纳滨对虾 减毒菌株
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马传染性贫血病毒弱毒株感染驴胎皮肤细胞(FDD)的前病毒DNA整合动态 被引量：4
13
作者 王柳 于力 +5 位作者 荣骏弓 童光志 贾斌 张绍杰 王玫 卢景良 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期235-239,共5页
马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检... 马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检出前病毒ＤＮＡ，证明ＥＩＡＶ弱毒株对感染细胞具有整合作用。在感染后第６天，整合的前病毒的量达到高峰，其含量与病毒的致细胞病变作用（ＣＰＥ）相对应。前病毒的存在形式为整合形式，未检出非整合形式的前病毒，在健康的ＦＤＤ细胞中未检出前病毒，说明ＥＩＡＶ属于外源性病毒。ＥＩＡＶ弱毒株基因组两端的ＬＴＲ序列之中各存在一个限制酶ＭｌｕⅠ位点，这与美国强毒株相同，但弱毒株基因组的３端ＭｌｕⅠ位点上游２ｋｂ位置可能存在另一个ＭｌｕⅠ位点。 展开更多
关键词 马病毒 马传染性贫血 病毒弱毒株 驴胎皮肤 细胞
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猪繁殖与呼吸综合征病毒R98弱毒株的分离鉴定与ORFs3～7基因特性研究 被引量：5
14
作者 李玉峰 姜平 +1 位作者 蔡宝祥 简中友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期5-8,共4页
从江苏某种猪场自北美引进的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体阳性临床健康仔猪血清中分离到1株病毒,经生物学特性测定、血清学试验、分子生物学鉴定、电镜观察及猪体致病性试验,鉴定为美洲型PRRSV类弱毒株。应用RT-PCR技术对该分离株... 从江苏某种猪场自北美引进的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体阳性临床健康仔猪血清中分离到1株病毒,经生物学特性测定、血清学试验、分子生物学鉴定、电镜观察及猪体致病性试验,鉴定为美洲型PRRSV类弱毒株。应用RT-PCR技术对该分离株ORFs3～7结构蛋白基因进行扩增、克隆与cDNA序列分析,结果表明该分离毒株的ORFs3～7基因序列与PRRSV-MLV弱毒株的相应基因同源性均达99.0%以上,属美洲型毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 弱毒株 结构蛋白 序列分析
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伪狂犬病病毒弱毒株LY株的分离鉴定 被引量：5
15
作者 马凤龙 王文成 +5 位作者 李尚波 马振宇 丁建民 卫广森 王铁东 宣华 《兽医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期252-254,共3页
从辽阳某猪场的 1 0日龄仔猪中分离到 1株病毒 ,经纯化后测得其毒价为 1 0 7.2 9TCID50 / m L。细胞中和试验表明 ,该病毒能被猪伪狂犬病病毒标准阳性血清所中和。电镜下可见到典型的疱疹病毒粒子 ,具有囊膜及外周纤突。所分离的病毒对... 从辽阳某猪场的 1 0日龄仔猪中分离到 1株病毒 ,经纯化后测得其毒价为 1 0 7.2 9TCID50 / m L。细胞中和试验表明 ,该病毒能被猪伪狂犬病病毒标准阳性血清所中和。电镜下可见到典型的疱疹病毒粒子 ,具有囊膜及外周纤突。所分离的病毒对氯仿、胰蛋白酶、乙醚敏感 ,在 p H5 .0～ 9.0下稳定 ,5 6℃ 30 m in可以灭活。应用特异性引物 ,通过 PCR能扩增出伪狂犬病病毒 1 2 4 0 bp的 g D基因。分离病毒对 3日龄乳鼠有一定的致病力 ,但对家兔、3～ 5日龄仔猪及妊娠母猪都有很高的安全性。用不同剂量的病毒培养液肌肉注射于 3～ 5日龄仔猪 ,1 4 d后用 1 0 5.7TCID50 伪狂犬病病毒强毒攻击 ,所有试验仔猪均可得到有效保护。用分离毒免疫母猪 ,其后代可获高滴度的母源抗体 ,1 5日龄的仔猪能抵抗1 0 5.7TCID50 强毒的攻击。试验的结果初步说明 ,所分离的病毒为伪狂犬病病毒 (命名为 PRV L Y株 ) ,并可能是一株弱毒株 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 弱毒株LY株 分离 鉴定
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猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析
16
作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页
[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选
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鸭瘟病毒强弱毒株PCR检测方法的建立 被引量：5
17
作者 谢丽基 黄莉 +8 位作者 谢芝勋 王盛 黄娇玲 张艳芳 范晴 罗思思 谢志勤 邓显文 钟传德 《动物医学进展》 北大核心 2017年第8期19-22,共4页
根据基因库中鸭瘟病毒强毒株和弱毒株UL2基因保守区设计特异性引物,优化PCR反应的引物浓度和退火温度等,初步建立了可同时鉴别鸭瘟病毒强毒株和弱毒株的PCR检测方法,并对建立的方法进行了敏感性、特异性验证和临床样品检测。该PCR检测... 根据基因库中鸭瘟病毒强毒株和弱毒株UL2基因保守区设计特异性引物,优化PCR反应的引物浓度和退火温度等,初步建立了可同时鉴别鸭瘟病毒强毒株和弱毒株的PCR检测方法,并对建立的方法进行了敏感性、特异性验证和临床样品检测。该PCR检测方法最低能检出1pg的鸭瘟病毒强毒和弱毒DNA模板。对鸭瘟病毒强毒和弱毒模板的检测,得到了与试验设计相符的827bp(强毒)和299bp(弱毒)的扩增条带,而对鸭副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鸭圆环病毒、番鸭细小病毒、鸭Ⅰ型肝炎病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒等病原体的检测均为阴性。说明建立了一种敏感性高、特异性好的鉴别鸭瘟病毒强毒和弱毒的PCR检测方法。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 强毒 弱毒 聚合酶链反应
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MDV CVI988/Rispens弱毒株VP22基因克隆和序列分析 被引量：5
18
作者 陈鸿军 秦爱建 +5 位作者 丁铲 苗晋锋 张鑫宇 何秀苗 金文杰 刘岳龙 《江苏农学院学报》 CSCD 2003年第4期5-8,共4页
血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用。根据已发表的MDV-1 GA株的序列,从CV1988/Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段,结果获得大小为732 bp的PC... 血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用。根据已发表的MDV-1 GA株的序列,从CV1988/Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段,结果获得大小为732 bp的PCR产物。将PCR产物克隆T载体并测序分析,结果发现,与经典强毒GA株相比,弱毒株CV1988的VP22存在3个定点突变和一个缺失性突变。缺失的位点亲水性强,并位于VP22主要的抗原决定簇区。结果证明强毒株与弱毒株的VP22存在明显差异,为利用CV1988 VP22的蛋白传导域传导目的蛋白奠定了理论基础。 展开更多
关键词 血清Ⅰ型马立克氏病病毒 CVI988/Rispens弱毒株 VP22基因 基因克隆 序列分析 基因缺失性突变 蛋白传导域
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不同品系小鼠对炭疽芽胞杆菌弱毒株芽胞的敏感性研究
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作者 袁璐 陈楠 +5 位作者 王东澍 吕宇飞 郭艳 陈杰 刘先凯 王恒樑 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期30-38,共9页
通过比较四种品系小鼠对炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)(简称炭疽杆菌)弱毒株芽胞的敏感性,确定炭疽杆菌弱毒株芽胞攻毒合适的动物模型。采用炭疽杆菌弱毒株A16Q1(pXO1-、pXO2+)和A16PI2(pXO1+、pXO2-)的芽胞对四种品系小鼠(DBA/2、K... 通过比较四种品系小鼠对炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)(简称炭疽杆菌)弱毒株芽胞的敏感性,确定炭疽杆菌弱毒株芽胞攻毒合适的动物模型。采用炭疽杆菌弱毒株A16Q1(pXO1-、pXO2+)和A16PI2(pXO1+、pXO2-)的芽胞对四种品系小鼠(DBA/2、KM、ICR和BALB/c)进行腹腔攻毒,记录小鼠死亡时间,计算LD50、绘制存活曲线并统计分析。运用较敏感的KM小鼠研究不同canSNP基因型毒素缺陷株(含pXO2拷贝数不同)芽胞的毒力差异。利用更为敏感的DBA/2小鼠评价S-层蛋白BA3338对荚膜缺陷株芽胞毒力的影响。结果表明,在四种品系小鼠中,毒素缺陷株芽胞的毒力均高于荚膜缺陷株芽胞的毒力。DBA/2小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞的剂量依赖关系最好,最为敏感,其次是KM小鼠,而ICR小鼠和BALB/c小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞不敏感。确定了DBA/2小鼠和KM小鼠在炭疽杆菌弱毒株芽胞研究中的适用性。使用KM小鼠评价了不同canSNP基因型炭疽杆菌芽胞的毒力差异,结果表明,不同canSNP基因型炭疽杆菌由于所含pXO2质粒拷贝数的差异导致芽胞的毒力不同。使用DBA/2小鼠评价了S-层蛋白BA3338缺失对炭疽杆菌芽胞毒力的影响,表明BA3338基因的缺失导致炭疽杆菌芽胞毒力降低。 展开更多
关键词 炭疽芽胞杆菌 弱毒株 小鼠品系 canSNP基因型 S-层蛋白
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新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律
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作者 胥焯然 程晓霞 +7 位作者 郑敏 朱小丽 董慧 肖世峰 刘鸿威 曾显成 陈少莺 陈仕龙 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1011-1016,共6页
【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的R... 【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代(NDRV-S-C30)腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2~8 d和2~10 d,排毒高峰期为4~6 d;病毒血症时间为1~4 d,其中1~2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3~6 d,在脾脏的带毒时间为1~8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增殖能力弱,丧失了对易感靶器官造成病理损伤的能力。明确了NDRV弱毒S株的排毒规律及病毒血症时间,为建立弱毒免疫效力评价方法奠定了基础。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 弱毒株 RT-QPCR 排毒规律 病毒血症
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