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Ischemic Preconditioning Inhibits Over-expression of Arginyl-tRNA Synthetase Gene Rars in Ischemia-injured Neurons 被引量:2
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作者 沈寅 赵洪洋 +3 位作者 王海均 王文良 张立志 符荣 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2016年第4期554-557,共4页
The expression changes of Rars gene in ischemia-injured neurons were investigated by detecting its translational product arginyl-t RNA synthetase(Arg RS), and the inhibitory effects of ischemic preconditioning(IPC... The expression changes of Rars gene in ischemia-injured neurons were investigated by detecting its translational product arginyl-t RNA synthetase(Arg RS), and the inhibitory effects of ischemic preconditioning(IPC) on Rars gene were explored. Both IPC model and prolonged ischemia(PI) model were established by using the classic oxygen glucose deprivation(OGD) method. The primary cultured neurons were assigned into the following groups: the experimental group(IPC+PI group), undergoing PI after a short period of IPC; the conditional control group(PI control group), subjected to PI without IPC; blank control group, the normally cultured neurons. The Rars transcriptional activities and Arg RS expression levels were measured at different time points after re-oxygenation(3 h/6 h/12 h/24 h). Data were collected and statistically analyzed. Compared to the blank control group, the Rars activities and Arg RS levels were significantly increased in PI control group, peaking at the time point of 6 h after re-oxygenation. Rars activities and Arg RS levels were significantly lower in the experimental group than in the PI control group at different time points after re-oxygenation. PI insult can induce an escalating activity of Rars and lead to Arg RS over-expression in primary cultured neurons. IPC can inhibit the increased Rars activity and down-regulate Arg RS expression of ischemia-insulted neurons. This mechanism may confer ischemic tolerance on neurons. 展开更多
关键词 ischemic preconditioning arginyl-trna synthetase Rars oxygen glucose deprivation
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Expression of Arginyl-tRNA Synthetase in Rats with Focal Cerebral Ischemia 被引量:2
2
作者 符荣 范云智 +1 位作者 范宇葱 赵洪洋 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2014年第2期172-175,共4页
Aminoacyl-tRNA syntheses (AARS) can catalyze the adenosine triphosphate (ATP)-dependent acylation of their cognate tRNA(s) with a specific amino acid. They can be seen as an index to reflect the energy metabolic... Aminoacyl-tRNA syntheses (AARS) can catalyze the adenosine triphosphate (ATP)-dependent acylation of their cognate tRNA(s) with a specific amino acid. They can be seen as an index to reflect the energy metabolic rate of ischemic brain cells in ischemic penumbra. This study ex- amined the relationship between arginyl-tRNA synthetase (ArgRS), one of the AARS, and cerebral ischemia in rats. The model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) was established in rats. The expression levels of ArgRS protein and mRNA were detected in rat brain tissues at different time points following MCAO by Western blotting and RT-PCR, respectively. The results showed that the MCAO model was successfully established. Western blotting and RT-PCR analysis revealed that the ArgRS protein and mRNA were expressed in brain cells in both ischemic and normal penumbra tissues. The expression levels of ArgRS protein and mRNA peaked at 6 h after MCAO and decreased gradually. At 24 h, the expression levels of ArgRs protein and mRNA in ischemic penumbral tissues were lower than those in normal tissues. The expression levels of ArgRS mRNA and protein in ischemic penumbra var- ied with ischemic time, suggesting that the energy metabolism of brain cells in penumbra changed dy- namically after ischemia to ensure the endogenous self-protection of the body. The brain oxygen supply should be improved as soon as possible, especially within 6-12 h after ischemia, so as to meet the de- mand for energy metabolism in ischemic penumbra and make sure the cell structure remains stable. 展开更多
关键词 STROKE cerebral ischemia arginyl-trna synthetase gene expression protein expression
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Crystal structure of E. synthetase and ligand revealed key residues coil arglnyl-tRNA binding studies in arginine recognition 被引量:1
3
作者 Kelei Bi Yueting Zheng Feng Gao Jianshu Dong Jiangyun Wang Yi Wang Weimin Gong 《Protein & Cell》 SCIE CAS CSCD 2014年第2期151-159,共9页
The arginyl-tRNA synthetase (ArgRS) catalyzes the esterification reaction between L-arginine and its cog- nate tRNAArg. Previously reported structures of ArgRS shed considerable light on the tRNA recognition mech- a... The arginyl-tRNA synthetase (ArgRS) catalyzes the esterification reaction between L-arginine and its cog- nate tRNAArg. Previously reported structures of ArgRS shed considerable light on the tRNA recognition mech- anism, while the aspect of amino acid binding in ArgRS remains largely unexplored. Here we report the first crystal structure of E. coli ArgRS (eArgRS) complexed with L-arginine, and a series of mutational studies using isothermal titration calorimetry (ITC). Combined with previously reported work on ArgRS, our results eluci- dated the structural and functional roles of a series of important residues in the active site, which furthered our understanding of this unique enzyme. 展开更多
关键词 arginyl-trna synthetase amino acyl-trnasynthetase isothermal titration calorimetry site-directedmutation X-ray crystal structure E. coil
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ARGINYL-tRNA SYNTHETASE FROM Escherichia coli AFFINITY LABELING WITH 3'-OXIDIZED tRNA^(Arg)
4
作者 程晓东 林胜祥 +1 位作者 施建平 王应睐 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第3期297-305,共9页
The covalent modification of E. coli arginyl-tRNA synthetase by the 2',3'-dialdehydederivative of tRNA^(Arg) (tRNA_(ox)^(Arg)) resulted in the complete inactivation of the ATP-PPi ex-change and aminoacylation ... The covalent modification of E. coli arginyl-tRNA synthetase by the 2',3'-dialdehydederivative of tRNA^(Arg) (tRNA_(ox)^(Arg)) resulted in the complete inactivation of the ATP-PPi ex-change and aminoacylation activities of the enzyme. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis of the ArgRS-tRNA_(ox)^(Arg) covalent complexes indicated that two bands simulta-neously appeared on the gel parallel with inactivation corresponding to different higher mo-lecular weights. This result was different from that of the other aminoacyl-tRNA synthetaselabeling systems as previously reported. Upon the ribonuclease treatment of the modifiedArgRS, less than 15% of both the initial ATP-PPi exchange and aminocylation activities wererecovered. During the whole process of labeling and RNase treatment, the two activities ofthe enzyme were closely associated. 展开更多
关键词 arginyl-trna SYNTHETASE ARGININE specific trna AFFINITY labeling E. COLI
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大肠杆菌JM83精氨酰-tRNA合成酶基因的克隆、测序及表达 被引量:3
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作者 王恩多 陆身楠 王应睐 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期141-145,共5页
用聚合酶链反应(PCR)以大肠杆菌JM83基因组DNA为模板,扩增了精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)基因。将该基因重组到载体pUC18上转化到大肠杆菌TG1中,得到在转化子中ArgRS的高表达。粗抽液中ArgRS... 用聚合酶链反应(PCR)以大肠杆菌JM83基因组DNA为模板,扩增了精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)基因。将该基因重组到载体pUC18上转化到大肠杆菌TG1中,得到在转化子中ArgRS的高表达。粗抽液中ArgRS的氨酰化活力,TG1和TG1转化子分别为1.65U/mg和210U/mg,后者为前者的127倍。DNA顺序测定表明,与从大肠杆菌JA200中克隆到的ArgRS基因相比913位碱基为A而不为C,这种变化使ArgRS的305位氨基酸残基由Gln变为Lys,但这种改变不影响酶的活力。 展开更多
关键词 精氨酰-trna 合成酶 基因克隆 序列 表达
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精氨酰-tRNA合成酶在局灶性脑缺血再灌注大鼠中的表达及机制研究 被引量:3
6
作者 沈寅 范云智 +1 位作者 范宇葱 符荣 《实用心脑肺血管病杂志》 2016年第6期54-58,共5页
背景目前,临床上针对哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶的研究主要集中在精氨酰-tRNA合成酶、亮氨酰-tRNA合成酶、甲硫氨酰-tRNA合成酶、丙氨酰-tRNA合成酶的结构和功能方面,对哺乳动物尤其是大鼠脑缺血与氨基酰-tRNA合成酶关系的研究报道极少... 背景目前,临床上针对哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶的研究主要集中在精氨酰-tRNA合成酶、亮氨酰-tRNA合成酶、甲硫氨酰-tRNA合成酶、丙氨酰-tRNA合成酶的结构和功能方面,对哺乳动物尤其是大鼠脑缺血与氨基酰-tRNA合成酶关系的研究报道极少。目的探讨精氨酰-tRNA合成酶在局灶性脑缺血再灌注大鼠中的表达及机制。方法选取清洁级健康雄性SD大鼠60只,其中4只大鼠进行预实验,采用线栓法栓塞大脑中动脉建立局灶性脑缺血再灌注模型。然后将剩余的56只大鼠随机分为正常组8只、假手术组8只、脑缺血再灌注组40只。正常组不做任何外科处理;假手术组大鼠外科操作步骤与脑缺血再灌注组相同,只是线栓不进入颈内动脉、不造成脑缺血;脑缺血再灌注组大鼠建立局灶性脑缺血再灌注模型。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定正常组、假手术组、脑缺血再灌注组大鼠再灌注后不同时间点精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量,采用Western Blotting法测定正常组、假手术组、脑缺血再灌注组大鼠再灌注后不同时间点精氨酰-tRNA合成酶蛋白相对表达量。结果假手术组与脑缺血再灌注组大鼠再灌注2 h、脑缺血再灌注组再灌注48 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);假手术组大鼠精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均低于脑缺血再灌注组再灌注6 h、12 h及24 h(P<0.05);脑缺血再灌注组大鼠再灌注6 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均高于再灌注2 h和12 h(P<0.05);脑缺血再灌注组大鼠再灌注24 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均高于再灌注12 h和48 h(P<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血再灌注后6 h及24 h精氨酰-tRNA合成酶表达明显升高,可能与缺血和再灌注两次损伤有关。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注损伤 精氨酰-trna合成酶
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缺血预处理通过抑制精氨酰-tRNA合成酶和Caspase-3表达减少脑梗死大鼠脑细胞的凋亡 被引量:3
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作者 王梓 邢宏义 +1 位作者 范宇葱 符荣 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1214-1221,共8页
目的探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只),前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模... 目的探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只),前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模型(缺血预处理组大鼠在造模前将线栓置入大脑中动脉阻断血流15 min),假手术组大鼠行假缺血预处理和假阻断大脑中动脉血流,正常组大鼠不做任何处理。分别于正常组和假手术组造模后24 h,缺血预处理组和脑梗死组造模后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,每组取10只大鼠,采用TUNEL染色检测小鼠缺血半暗带区细胞凋亡率,免疫组化染色检测小鼠缺血半暗带区含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达,RT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠缺血半暗带区精氨酰-tRNA合成酶(ArgRs)基因和ArgRs蛋白的表达。结果与正常组和假手术组比较,脑梗死组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与脑梗死组比较,缺血预处理组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑缺血预处理可以抑制脑梗死大鼠脑缺血半暗带区ArgRS基因及ArgRS蛋白、Caspase-3的表达,减少脑细胞的凋亡,从而起到脑保护作用。 展开更多
关键词 缺血预处理 细胞凋亡 精氨酰-trna合成酶 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 脑梗死
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RARS2基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响 被引量:1
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作者 刘悦泽 邱江东 +2 位作者 杨刚 赵方宇 张太平 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期368-372,共5页
目的研究线粒体精氨酰-tRNA合成酶(RARS2)基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响。方法人胰腺癌细胞株AsPC-1及PANC-1分别设置阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组,通过瞬时转染... 目的研究线粒体精氨酰-tRNA合成酶(RARS2)基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响。方法人胰腺癌细胞株AsPC-1及PANC-1分别设置阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组,通过瞬时转染法降低或过表达RARS2。细胞计数CCK-8法检测细胞增殖以及化疗敏感性,采用Transwell检测细胞侵袭及迁移。采用Western印迹检测RARS2在不同浓度及不同时间吉西他滨作用下的表达。Western印迹与聚合酶链式反应检测耐药株RARS2表达。结果在胰腺癌细胞AsPC-1及PANC-1中,干扰降低RARS2的表达可以显著抑制细胞增殖能力,增强吉西他滨化疗敏感性;过表达RARS2后细胞增殖能力增强,吉西他滨化疗敏感性降低。在AsPC-1细胞中,阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组迁移细胞数(100倍显微镜下)(586.7±37.4)个/视野、(195.7±18.6)个/视野、(237.0±17.1)个/视野、(157.7±19.1)个/视野、(456.0±23.1)个/视野,侵袭细胞数分别为(87.7±13.2)个/视野、(24.7±6.5)个/视野、(31.7±6.1)个/视野、(29.3±4.5)个/视野、(94.3±9.3)个/视野。降低RARS2表达后细胞迁移与侵袭能力降低,过表达RARS2细胞迁移与侵袭能力增强。聚合酶链式反应与Western印迹实验表明,吉西他滨耐药株AsPC-1中RARS2的相对表达高于普通细胞株。在AsPC-1细胞中,随着吉西他滨浓度及处理时间增加,RARS2表达随之上升。结论RARS2基因调控胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性,且RARS2表达与吉西他滨浓度与处理时间正相关。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 细胞增殖 线粒体精氨酰-trna合成酶 侵袭 迁移 化疗敏感性
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本氏烟草NbRS基因克隆及响应镉胁迫中的功能初步分析
9
作者 娄冰冰 赵一博 +2 位作者 辛翠花 卞晓燕 郭江波 《种子》 北大核心 2022年第3期6-11,共6页
为了研究精氨酰-tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RS)在植物响应镉胁迫中的作用,本研究扩增本氏烟草NbRS基因,进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR和BSP技术对镉胁迫下基因的表达和甲基化状态进行分析;利用病毒诱导的基因沉默... 为了研究精氨酰-tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RS)在植物响应镉胁迫中的作用,本研究扩增本氏烟草NbRS基因,进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR和BSP技术对镉胁迫下基因的表达和甲基化状态进行分析;利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术下调该基因表达,分析该基因下调对植物发育、对镉的耐受能力的影响。结果表明,NbRS基因大小为1947 bp,编码649个氨基酸,与茄科植物精氨酰-tRNA合成酶亲缘关系最近;不同浓度Cd^(2+)处理会影响该基因表达,且Cd^(2+)处理下基因甲基化状态发生变化;NbRS基因下调导致植物发育异常,且植物对Cd^(2+)胁迫的敏感性增加。研究表明,NbRS基因在植物耐受Cd^(2+)胁迫中起重要作用,可以作为潜在的培育耐受或低积累Cd^(2+)工程植物的靶基因做进一步研究。 展开更多
关键词 NbRS基因 精氨酰-trna合成酶 镉胁迫 病毒诱导的基因沉默
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牛带绦虫ATE基因功能预测及原核表达
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作者 刘玉江 戴佳琳 +1 位作者 黄江 王宇 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期73-74,共2页
目的分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶(arginyl-tRNA-protein transferase,ATE)基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-tRNA转移酶基因的功能进行预测并将其编码... 目的分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶(arginyl-tRNA-protein transferase,ATE)基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-tRNA转移酶基因的功能进行预测并将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-28 a(+)上,测序鉴定重组质粒。结果该基因全长1 476 bp,编码区为141~1 617 bp,编码491个氨基酸;该基因为全长基因,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为56 436.3Da;没有质体、线粒体定位序列;十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL21~DE3中表达成功。结论筛选出牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶基因,成功构建重组原核表达质粒。 展开更多
关键词 牛带绦虫 精氨酰-trna转移酶 生物信息学 原核表达
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